牦牛分子标记研究进展

牦牛是青藏高原高寒草地牧区畜牧业发展中最重要的畜种.作为当前遗传育种的热点,分子标记技术已被广泛应用于牦牛分子育种研究中.为此,本文以影响牦牛生长发育、肉品质、繁殖和泌乳相关的基因为切入点,结合现代DNA标记与起源进化分析,就牦牛分子标记研究的最新进展作一综述.     

Overlap PCR克隆黄牛脂肪特异性磷脂酶A2基因(AdPLA)及其原核表达

脂肪特异性磷脂酶A2基因(adipose-specific phospholipase A2,A dPLA)在脂肪组织甘油三酯水解过程中发挥着重要的调节作用,为了构建黄牛AdPLA基因原核表达系统,本研究通过Overlap PCR方法从黄牛(Bos taurus)基因组DNA中得到了AdPLA基因编码区全长,将其克隆到pGM-T载体上,阳性克隆经测序表明,与NCBI公布的序列(GenBank No.NM_001075280)完全一致.阳性质粒经BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切后,将其定向重组到pET28a(+)原核表达载体上,转化感受态大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (DE3)中,用IPTG诱导融合蛋白表达.SDS-PAGE电泳表明,融合蛋白His-AdPLA在大肠杆菌中表达,证明成功构建了AdPLA基因原核表达系统,为进一步研究黄牛AdPLA基因的功能和AdPLA蛋白产品开发提供了依据.     

IGFBP3基因多态性与鲁西牛和晋南牛部分屠宰性状的相关性

利用PCR-RFLP技术对24头鲁西牛和19头晋南牛的IGFBP3基因多态性及与屠宰性状的关系进行了研究。结果表明，鲁西牛和晋南牛IGFBP3基因存在多态性，但只有AA、AB 2种基因型，基因型频率分别为0.875/0.125和0.895/0.105，等位基因A/B的频率分别为0.938/ 0.062和0.948/0.052。对IGFBP3基因座基因型与19个屠宰性状进行了分析，在鲁西牛群体中，除胴体深、日增重、净肉率、屠宰率4个指标外,其它指标AB型均好于AA型,但差异不显著；在晋南牛群体中，除屠宰率、骨重、膘度、胴体胸深、后腿围、后腿宽、后腿长、腰部肉厚这8个指标外，其它指标AA型均好于AB型，差异也不显著。     

陕西地区荷斯坦牛Mx1基因外显子多态性分析

牛Mx1基因位于1号染色体上,含有14个外显子,编码648个氨基酸。研究以346头陕西地区荷斯坦牛为研究对象,根据GenBank所提供的牛Mx1基因序列,设计15对引物,采用混合DNA池扩增测序和PCR-RFLP的方法对牛Mx1基因的14个外显子进行多态性分析。结果表明,4个SNPs,分别位于外显子3（g.843330T〉C,g.843411A〉G）、外显子4（g.844048C〉T）和外显子7（g.851325T〉C）。其中,外显子4（g.844048C〉T）为同义突变;外显子3（g.843330T〉C,g.843411A〉G）两个位点的突变分别导致了异亮氨酸（Ile）向苏氨酸（Thr）、谷氨酸（Glu）向精氨酸（Arg）的突变;外显子7（g.851325T〉C）位点的突变导致亮氨酸（Leu）变为脯氨酸（Pro）。4个SNPs位点都存在三种基因型,但纯合子的突变频率较低。4个SNPs位点共构建了11种单倍型,其中以H6为最主要的单倍型。结果显示,陕西地区荷斯坦牛Mx1基因存在较丰富的多态性,这将为Mx1基因结构和功能的研究以及将来在育种实践中的应用提供基础资料。     

内蒙古绒山羊KAP9.2基因遗传多态性及其与生长性状的关联分析

【目的】 探究内蒙古绒山羊KAP基因家族角蛋白相关蛋白9.2（KAP9.2）基因插入/缺失（insertion/deletion,InDel）突变及其与生长性状的关系,以期为内蒙古绒山羊分子育种提供理论基础。【方法】 选取606只雌性阿拉善型内蒙古绒山羊为研究对象,采集耳组织提取DNA并测定其体重及体高、体长和胸围等体尺数据,利用琼脂糖凝胶电泳方法与直接测序技术检测KAP9.2基因的InDel突变,检测遗传多样性指标,利用SPSS 23.0软件分析突变位点与生长性状的关联性。【结果】 在内蒙古绒山羊KAP9.2基因外显子区存在30 bp的InDel突变,产生II、ID和DD 3种基因型。多态信息含量（PIC）显示,该位点在育成羊群体中属于中度多态（0.25<PIC<0.50）,在成年羊群体中属于低度多态（PIC<0.25）,且均处于哈代-温伯格平衡状态（P>0.05）;在整个群体中,属于低度多态（PIC<0.25）,但偏离哈代-温伯格平衡状态（P<0.05）。关联分析结果表明,在育成羊群体中,此30 bp的InDel突变对体长和十字部高有显著影响（P<0.05）,对体高、胸深和胸宽有极显著影响（P<0.01）;在成年羊群体中,此突变对管围、胸深和胸宽有极显著影响（P<0.01）。进一步的分析发现,在育成羊和成年羊全部群体中,此突变对体长和十字部高有显著影响（P<0.05）,对体高、胸深和胸宽有极显著影响（P<0.01）。【结论】 KAP9.2基因InDel突变对阿拉善型内蒙古绒山羊多个生长性状有显著或极显著影响,可作为内蒙古绒山羊优良性状选育的分子标记。     

晋南牛父系和母系起源研究

为了研究晋南牛的父系起源和母系起源,随机抽取30头晋南公牛,分别对Y染色体INRA124微卫星位点和线粒体DNAcytb基因进行分析。Y染色体INRA124微卫星分析表明:30个个体中,具有132bp的等位基因约占总样本76.7%,表明晋南牛具有76.7%的普通牛父系血统;具有130bp的等位基因,约占总样本23.3%,表明晋南牛具有32.2%的瘤牛父系血统。cytb基因的HinfI酶切分析表明,在这31个个体中,没有发现牦牛和班腾牛的母系起源。     

of Goat Follicle-stimulating Hormone Receptor (FSHR) Gene

利用PCR-SSCP技术检测山羊(Capra hircus)包括西农萨能奶山羊、关中奶山羊、陕南白山羊、安哥拉山羊和波尔山羊173个个体FSHR基因第10外显子的单核苷酸多态性 (SNP)。结果未发现SNP位点。测序后获得山羊FSHR基因第10外显子的核苷酸序列， 并在NCBI数据库中获得GenBank登录No.DQ069909和DQ069910。通过DNA序列分析发现， FSHR基因第10外显子第120位碱基不存在C→T的转换，也不存在颠换等其它遗传变化。山羊、绵羊 (Ovisaries L.) 和普通牛( Bos taurus) FSHR基因第10外显子序列同源性比较和聚类分析结果表明，山羊、普通牛和绵羊该部分序列的相似性最高为99.3%；在物种间比较中，绵羊和普通牛纯合子该基因外显子序列的不相似性最高为3.4%；据FSHR基因外显子序列构建的分子系统树结果显示，山羊、绵羊和普通牛物种内的个体各自聚为一类；山羊和绵羊先聚为一类，然后再与普通牛聚为一类。提示FSHR基因第10外显子的核苷酸序列适合于物种间的动物分子树的构建。     

山羊miRNA研究进展

miRNA作为一类内源性的,小型非编码RNA,通过其种子序列与靶基因互作,以序列特异性方式调控靶基因的表达,参与多种生理、生化和病理的过程.本文综述了近年来miRNA在山羊泌乳生理、肌肉生长和发育、毛囊皮肤发育和繁殖生理等方面的研究,为相关研究提供参考.     

奶牛乳房炎相关IRF5基因CDS区克隆及表达分析

【目的】研究奶牛干扰素调节因子5(Interferon regulatory factor 5,IRF5)基因在奶牛乳腺组织及乳腺上皮细胞炎症中的表达模式。【方法】利用RT-PCR和测序技术克隆得到IRF5基因的编码区(Coding sequence, CDS)序列,并采用生物信息学方法分析IRF5基因及其特性;利用qPCR技术检测IRF5基因及相关干扰素调节因子3(Interferon regulatory factor 3,IRF3)和MyD88基因的表达量。【结果】IRF5基因的CDS长度为1500 bp,编码499个氨基酸,存在47个潜在磷酸化位点,氨基酸组成中脯氨酸(Pro)和亮氨酸(Leu)所占比例较高。IRF5蛋白分子式为C₂₅₂₄H₃₉₀₁N₆₇₁O₇₂₈S₂₀,主要存在于细胞核和线粒体,理论等电点为5.38,是碱性亲水且不稳定的非分泌蛋白。蛋白互作分析结果显示,IRF5蛋白可能与骨髓分化初级反应蛋白(MyD88)、白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAK1)、C...     

山羊LIM同源框基因LHX3分子遗传特征研究

利用PCR-RFLP、Forced-PCR-RFLP、DNA测序法研究中国西农萨能奶山羊(Sa)、关中奶山羊(GZ)和内蒙古白绒山羊(IMWC)3个品种LHX3基因的分子遗传特性.结果表明,在第2内含子452 nt处存在T＞C的突变,第6外显子352 nt处存在T＞C的突变.在Hinf Ⅰ位点,GZ、Sa和IMWC的等位基因T/C频率分别为0.492 9/0.507 1,0.376 3/0.623 7,0.698 4/0.301 6;在Msp Ⅰ位点,GZ、Sa和IMWC的等位基因T/C频率分别为0.492 9/0.507 1,0.633 8/0.366 2,0.267 2/0.732 8;以上位点在不同品种中的多态信息含量(PIC)在0.314 9～0.374 9之间.独立X2分析表明,Hinf Ⅰ和Msp Ⅰ位点的基因型频率分布在不同山羊品种间均存在极显著差异,暗示品种因素对这些基因型的分布具有显著影响.