猴痘病毒荧光定量PCR检测方法的建立

根据GenBank发表的猴痘病毒(AF380138)F3L基因全序列,设计并合成了引物和TaqMan、MGB探针,建立了F3L基因的荧光定量PCR检测方法.应用该方法可从人工合成的猴痘病毒F3L基因片段(48048～48 509 bp)扩增典型的"S"型曲线,25 μL反应体系检测灵敏度可达68拷贝,但不能从鸡痘、山羊痘等病毒中扩增出相应的扩增曲线.结论:本方法可快速、敏感、特异地检测猴痘病毒.     

猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒双重RT-PCR方法的建立和初步应用

根据GenBank上已发表的猪瘟病毒(CSFV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的全基因序列,进行对比分析,分别设计合成两对能特异性扩增CSFV、BVDV的引物。经过条件优化后,建立了检测CSFV和BVDV的双重RT-PCR方法,扩增两种病毒的片段,大小分别为938、650 bp。应用该方法对11批牛睾丸细胞、7批胎牛血清、60个批次的猪瘟细胞苗、10份全血样及10份组织样进行检测。通过试验证明,所建立的方法具有良好的特异性和敏感性,为防止猪瘟细胞苗的污染及进行CSFV和BVDV鉴别诊断提供了有效方法。     

弓形虫感染对大鼠的学习记忆与脑单胺类神经递质含量的影响

探明弓形虫感染对大鼠的学习记忆及脑内单胺类神经递质去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)含量的影响。取40只雄性SD清洁级(220±20)g成年大鼠随机分成4组,即高、中、低感染剂量的弓形虫腹腔感染组(2×107ml、2×105ml、2×103ml各2 ml)和腹腔注射灭菌生理盐水2 ml的正常对照组。感染后进行被动回避试验和Morris水迷宫试验,观察弓形虫感染对大鼠的学习记忆能力等行为学变化。行为学试验结束后,采用高效液相色谱电化学法检测各组大鼠脑内单胺类神经递质NE、DA、5-HT含量。结果表明:弓形虫感染对大鼠的记忆获得没有影响,但高、中剂量弓形虫感染使大鼠的记忆消失早于对照组(P0.05),低感染剂量对大鼠记忆消失无影响(P0.05);各感染组大鼠Morris水迷宫测试中逃避潜伏期均明显延长,其距离百分比明显降低(P0.05);高、中剂量弓形虫感染大鼠脑组织中的NE、5-HT显著降低(P0.05),而DA则显著升高(P0.05);低感染剂量大鼠脑内单胺类神经递质含量与对照组的差异不显著(P0.05)。因此,弓形虫感染可能通过影响脑内单胺类神经递质的合成而降低学习记忆能力。     

传染性法氏囊病病毒自然重配株全基因组序列分析

从具有新的流行病学特征的传染性法氏囊病（IBD）发病鸡群中分离到2株传染性法氏囊病病毒（IBDV）,分别命名为QL和ZZ—ll,对4周龄SPF鸡的致死率分别为94％和86％。为分析该毒株的分子生物学特征,对其全基因组序列进行了测定,2个病毒株基因组A节段长度为3260bp、B节段长度2827bp。病毒演化分析结果显示2个病毒基因组A节段的核苷酸序列与已发表的强毒株序列的同源性分别为96．8％～98．1％和96．9％～98．4％,处在IB—DV超强毒株分支上;而B节段与已发表的弱毒株序列的同源性分别为89．7％～90．4％和90．0％～90．7％,位于弱毒株分支上。IBDV超强毒株和弱毒株序列特征氨基酸残基与基序分析表明,QL和ZZ—11两个病毒株的A节段VP2基因的氨基酸残基为222A、249Q、253Q、254G、256I、294I和299S,七肽基序为SWSASGS,均符合超强毒株的分子特征;而B节段777～782位核苷酸序列为GGTGCC,没有KpnI酶切位点,具有弱毒株的序列特点。以上分析结果表明,QL和ZZ—11为IBDV自然重配株,A节段源于超强毒株,而B节段源于弱毒株。     

基层兽医行政执法存在的问题和对策

随着养殖业逐渐趋于规模化 ,国家动物防疫体系逐步完善 ,相关法律、法规及标准先后出台 ,动物疫病一定程度上得以控制和消灭 ,但仍有OIE规定的A类动物疫病和一些新疫病的蔓延 ,严重影响畜牧业发展和威胁人类的健康。为了探究根源 ,调查了 2 0多个县级兽医站、40 0多个乡镇兽医站、190 0名从业兽医、1万多个养殖单位 (户 ) ,遍及 5个省市 ,发现基层兽医行政执法现状甚使人担扰 ,问题较多 ,对此进行了分析 ,并提出对策 ,期盼引起全社会高度关注。     

弓形虫感染对大鼠T细胞免疫功能的影响

应用流式细胞术检测大鼠腹腔感染经CF-11纤维素纯化的活弓形虫速殖子悬液后60 d内大鼠外周血CD3 、CD4 、CD8 T淋巴细胞的百分率,并应用酶联免疫吸附试验测定其外周血IFN-γ、TNF-α、IL-4等细胞因子的水平.结果显示:CD8 T细胞亚群水平在感染弓形虫后3 d、7 d、14 d和21 d时均显著低于正常水平(P＜0.05),至感染后28 d恢复至正常;而CD4 T细胞亚群水平在整个感染过程中并无显著变化;CD4 / CD8 比值升高,以感染后14 d最为明显;大鼠外周血中IFN-γ和IL-4 水平在感染后7 d开始升高(P＜0.05),至感染后60 d时仍高于正常水平,TNF-α至感染后28 d时高于正常水平(P＜0.05),至感染后60 d时仍高于正常水平.表明大鼠感染弓形虫对其免疫功能有一定程度的影响.     

SCOTS技术在筛选动物病原菌功能基因中的应用

<正>病原菌在宿主体内定植与感染的过程是一个复杂的、动态的多因素作用过程,在这个过程中病原菌需要通过调控各基因的表达来适应环境的变化。目前,随着大量细菌的基因组测序完成,为研究细菌病原、流行病学和防控方法提供了参考。下一步就需要研究这些基因的功能,考察在不同环境条件下的选择性表达情况,特别是病原菌的致病过程以及如何与宿主细胞作用一直是关注的重点。目前已经有多种方法用于研究病原菌定植和感染宿主时的基因     

猪干扰素α质粒-PLL聚合体对猪PRRSV弱毒疫苗免疫增强作用研究

本文探讨聚合体形式的猪干扰素α真核表达质粒(p VAX1-PIFNα)对猪PRRSV弱毒疫苗免疫作用的增强作用。在猪免疫PRRSV弱毒疫苗的同时,注射p VAX1-PIFNα重组表达质粒与多聚赖氨酸(PLL)的聚合体(PLL-p VAX1-PIFNα),以研究聚合体状态的干扰素对PRRSV免疫的增强作用。将分泌表达干扰素α的重组真核表达质粒p VAX1-PIFNα与PLL聚合,同时免疫PRRSV弱毒疫苗和PLL-p VAX1-PIFNα聚合体,使用ELISA试剂盒检测PRRSV中和抗体;另外,分离培养猪外周血白细胞(PBMC)进行体外试验,分析PLL-p VAX1-PIFNα聚合体刺激淋巴细胞后IFN-γ的分泌情况。中和抗体的结果表明,PLL-p VAX1-PIFNα的使用可明显提高PRRSV活疫苗诱导产生PRRSV中和抗体的能力;细胞试验的结果表明,经PLL-p VAX1-PIFNα刺激后,明显提高了淋巴细胞分泌表达IFN-γ的水平。在PRRSV疫苗免疫中,聚合体状态的猪IFNα重组表达质粒可有效提高机体的体液免疫和细胞免疫水平,这一结果也为干扰素或其他重组蛋白在疫苗免疫中的应用提供了新的思路。     

嗜水气单胞菌菌种的限定代次及保存条件研究

将嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila ,Ah)J 1菌株第 5代菌种通过鲫鱼体内复壮后 ,制备基础种子。将基础种子在普通营养琼脂培养基上连续传至 10代 ,分别测第 1代和第 10代的培养特性、免疫原性以及其毒力 ;同时 ,对Ah菌种的保存条件进行了优化。结果嗜水气单胞菌菌种在 1～ 10代之内 ,其培养特性、免疫原性以及毒力完全相同 ,表明嗜水气单胞菌基础种子的使用限定代次至少可达 10代。Ah菌种以 15 %甘油肉汤、 - 2 0℃保存为佳 ,保存期可达两年。     

传染性法氏囊病病毒VP2与C3d串联基因重组表达质粒的构建及其免疫功能研究

为提高传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因核酸疫苗的免疫效力,本研究根据已发表的鸡源补体C3d序列,设计并合成在5’端添加编码连接肽(Gly4Ser)2序列的C3d基因。用同尾酶BglⅡ和BamHⅠ构建含有3拷贝C3d与VP2基因融合的重组表达质粒pcDNA-VP2-3C3d。用脂质体法转染BHK21细胞,48 h后,westernblot分析表明,表达的重组蛋白为162 ku;间接免疫荧光试验检测转染细胞中具有特异性荧光。用pcDNA-VP2-3C3d与前期构建的pcDNA-VP2分别免疫2周龄SPF鸡,二免14 d后,间接ELISA法检测IBDV抗体效价,pcDNA-VP2-3C3d组抗体水平显著高于pcDNA-VP2组;MTT法检测鸡脾淋巴细胞增殖活性,pcDNA-VP2-3C3d组免疫诱导的特异性淋巴细胞增殖活性显著高于pcDNA-VP2组(p<0.05)。本研究表明C3d可以增强VP2基因免疫诱导的IBDV特异性体液和细胞免疫应答。