猴痘病毒荧光定量PCR检测方法的建立

根据GenBank发表的猴痘病毒(AF380138)F3L基因全序列,设计并合成了引物和TaqMan、MGB探针,建立了F3L基因的荧光定量PCR检测方法.应用该方法可从人工合成的猴痘病毒F3L基因片段(48048～48 509 bp)扩增典型的"S"型曲线,25 μL反应体系检测灵敏度可达68拷贝,但不能从鸡痘、山羊痘等病毒中扩增出相应的扩增曲线.结论:本方法可快速、敏感、特异地检测猴痘病毒.     

猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒双重RT-PCR方法的建立和初步应用

根据GenBank上已发表的猪瘟病毒(CSFV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的全基因序列,进行对比分析,分别设计合成两对能特异性扩增CSFV、BVDV的引物。经过条件优化后,建立了检测CSFV和BVDV的双重RT-PCR方法,扩增两种病毒的片段,大小分别为938、650 bp。应用该方法对11批牛睾丸细胞、7批胎牛血清、60个批次的猪瘟细胞苗、10份全血样及10份组织样进行检测。通过试验证明,所建立的方法具有良好的特异性和敏感性,为防止猪瘟细胞苗的污染及进行CSFV和BVDV鉴别诊断提供了有效方法。     

弓形虫感染对大鼠的学习记忆与脑单胺类神经递质含量的影响

探明弓形虫感染对大鼠的学习记忆及脑内单胺类神经递质去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)含量的影响。取40只雄性SD清洁级(220±20)g成年大鼠随机分成4组,即高、中、低感染剂量的弓形虫腹腔感染组(2×107ml、2×105ml、2×103ml各2 ml)和腹腔注射灭菌生理盐水2 ml的正常对照组。感染后进行被动回避试验和Morris水迷宫试验,观察弓形虫感染对大鼠的学习记忆能力等行为学变化。行为学试验结束后,采用高效液相色谱电化学法检测各组大鼠脑内单胺类神经递质NE、DA、5-HT含量。结果表明:弓形虫感染对大鼠的记忆获得没有影响,但高、中剂量弓形虫感染使大鼠的记忆消失早于对照组(P0.05),低感染剂量对大鼠记忆消失无影响(P0.05);各感染组大鼠Morris水迷宫测试中逃避潜伏期均明显延长,其距离百分比明显降低(P0.05);高、中剂量弓形虫感染大鼠脑组织中的NE、5-HT显著降低(P0.05),而DA则显著升高(P0.05);低感染剂量大鼠脑内单胺类神经递质含量与对照组的差异不显著(P0.05)。因此,弓形虫感染可能通过影响脑内单胺类神经递质的合成而降低学习记忆能力。     

火炭母提取物抑菌性能研究

为解决细菌在不同食品表面以及食品工业环境中形成生物膜引起食品质量安全问题,以中药材火炭母提取物为对象,对不同供试菌株进行抑制细菌及抑制细菌生物膜试验,探讨其抑菌性能.结果表明:火炭母提取物对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌和铜绿假单胞菌的生长均有一定的抑制作用,其最低抑菌浓度(MIC)分别为3.91、1.95、15.63、15.63 mg/mL;在亚抑菌浓度下,火炭母提取物能有效抑制金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌生物膜形成,其最小生物膜清除浓度(MBEC)分别为0.98和0.49 mg/mL.     

传染性法氏囊病病毒自然重配株全基因组序列分析

从具有新的流行病学特征的传染性法氏囊病(IBD)发病鸡群中分离到2株传染性法氏囊病病毒(IBDV),分别命名为QL和ZZ-11,对4周龄SPF鸡的致死率分别为94%和86%。为分析该毒株的分子生物学特征,对其全基因组序列进行了测定,2个病毒株基因组A节段长度为3 260bp、B节段长度2 827bp。病毒演化分析结果显示2个病毒基因组A节段的核苷酸序列与已发表的强毒株序列的同源性分别为96.8%⁹8.1%和96.9%98.1%和96.9%⁹8.4%,处在IBDV超强毒株分支上;而B节段与已发表的弱毒株序列的同源性分别为89.7%98.4%,处在IBDV超强毒株分支上;而B节段与已发表的弱毒株序列的同源性分别为89.7%⁹0.4%和90.0%90.4%和90.0%⁹0.7%,位于弱毒株分支上。IBDV超强毒株和弱毒株序列特征氨基酸残基与基序分析表明,QL和ZZ-11两个病毒株的A节段VP2基因的氨基酸残基为222A、249Q、253Q、254G、256I、294I和299S,七肽基序为SWSASGS,均符合超强毒株的分子特征;而B节段77790.7%,位于弱毒株分支上。IBDV超强毒株和弱毒株序列特征氨基酸残基与基序分析表明,QL和ZZ-11两个病毒株的A节段VP2基因的氨基酸残基为222A、249Q、253Q、254G、256I、294I和299S,七肽基序为SWSASGS,均符合超强毒株的分子特征;而B节段777⁷82位核苷酸序列为GGTGCC,没有KpnⅠ酶切位点,具有弱毒株的序列特点。以上分析结果表明,QL和ZZ-11为IBDV自然重配株,A节段源于超强毒株,而B节段源于弱毒株。     

马链球菌兽疫亚种ATCC35246酮基转移酶的原核表达及其免疫保护试验

根据已发表的马链球菌兽疫亚种MGCS10565酮基转移酶(transketolase)的基因序列,设计并合成引物。以ATCC35246株基因组DNA为模板,通过PCR技术,扩增出目的基因并定向克隆至表达载体pET-28a(+)中,然后将重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,分析并纯化表达产物。选用ICR小鼠作为实验动物模型,以纯化的重组融合蛋白通过皮下注射途径免疫小鼠,并用间接ELISA法监测小鼠血清中的抗体效价。结果表明重组蛋白免疫小鼠后能产生有效的免疫应答,血清中抗体水平有明显的升高。加强免疫2周后,以5LD50的ATCC35246强毒株攻击免疫组及对照组,结果免疫组小鼠的保护率可达37.5%。表明原核表达产物免疫ICR小鼠,可使其对同源菌株攻击产生一定的保护作用,在亚单位疫苗研制中具有潜在的应用价值。     

转换喂食器对断奶仔猪生长与健康的影响研究

为了研究"转换饲喂器"对断奶仔猪生长与健康的影响,在夏季和初春的时候分别选择梅山猪与大白猪的断奶仔猪群各10窝,每个品种平均分成两组,每组5窝,分别采取使用或不使用"转换饲喂器"进行保育生产试验。结果表明,使用"转换饲喂器"不仅能够增加保育猪饲料采食量,而且有显著促进生长发育的效果。     

快速,特异检测李斯特菌单抗—夹心ELISA方法的建立及应用

本研究以高度特异的，针对单核细胞增生李斯特氏菌，无害李斯特氏菌，格氏李斯特氏菌共同表位的单抗ＬＪ１０Ａ为捕捉抗原抗体和酶标抗体，建立了快速检测该菌的单抗夹心法ＥＬＩＳＡ方法，该方法对单核细胞增生李斯特菌的最小检出量为５×１０＾５个菌／ｍｌ，人工模拟样品至少可检出５个菌／１０ｇ样品，并在４８小时内报告结果，在实际应用中，我们以该法检测了２４０份肉样和８５０份奶样，并平行以改良ＭｃＢｒｉｄｅ琼脂分离国     

规模化猪场喘气病控制策略

近年来规模化猪场采取现代化管理技术及规范性防疫措施,许多烈性传染病已得到控制,而以猪肺炎支原体感染为主的呼吸道病复合征(PRDC)成为现代养猪业的主要危害。论文详细阐述猪喘气病发病特点及其危害,并客观评价弱毒疫苗的免疫效果,旨在为规模化猪场控制该病提供综合性控制策略。     

猴痘病毒PCR检测试剂盒的研制及应用

将建立的猴痘PCR和荧光PCR检测方法构建成试剂盒,并对其重复性、保存期、冻融次数等性能进行了检测。结果显示:试剂盒在-20℃条件下放置6个月,在4℃和室温下放置96 h,反复冻融10次后仍能扩增出特异性条带或典型的"S"型曲线。表明其具有较好的稳定性和重复性。对从江苏等地采集的343份猴等动物咽喉拭子样本进行检测,结果均为阴性,首次用技术手段证实了我国为猴痘非疫区。