排序方式: 共有87条查询结果,搜索用时 31 毫秒
71.
荧光定量RT-PCR检测禽白血病病毒方法的建立及应用 总被引:5,自引:0,他引:5
gag基因是禽白血病病毒(ALV)的群特异性基因,根据GenBank中登录的gag基因的保守序列(E46390),设计合成了1对引物,建立了基于SYBR GreenI模式的检测禽白血病病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。该方法只对目的基因有扩增,对其它无关病毒核酸无特异性扩增;扩增效率为94.6%;在8.2×102~8.2×107拷贝的范围内有很好的线性关系(Y=3.46X+31.8,r=0.9995);最低可检测82个拷贝的病毒核酸,与普通PCR方法相比,灵敏度高出1000倍。组内CV为0.28%~1.45%;组间CV为2.13%~3.84%;对151例临床疑似样本的检出率为54.9%(83/151)。随机选择15份阳性样本PCR产物克隆测序,结果证明扩增片断为ALV的特异序列,与ALVgag基因核苷酸同源性为97.8~98.9%;对重庆14个县的14个健康商品蛋鸡群的134份粪便棉拭子进行检测,ALV的检出率为38.1%,鸡群的阳性率为14/14。同时用实时RT-PCR方法和ELISA方法对从种鸡场随机采集的30份100日龄蛋鸡的血清进行检测,实时RT-PCR检测率为5/30,ELISA方法检测率为4/30。本方法的建立为禽白血病的快速诊断、大规模检疫、监测、流行病学调查以及药物筛选等提供了新的检测方法。 相似文献
72.
H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的克隆与表达 总被引:1,自引:0,他引:1
根据GenBank中收录的H5N1亚型禽流感病毒NS1基因序列设计合成了一对引物AI-N1/AI-N2,利用RT-PCR方法扩增AIVNS1基因并克隆到pMD18-T载体上,对所得到的重组质粒进行酶切分析及序列测定,与GenBank中收录的其他分离株NS1基因进行序列比较分析,同源性达96%~99%,含有NS1基因的1个开放性阅读框(ORF)。将该基因克隆到pET-28a中构建NS1基因原核表达质粒pET/NS1,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,在IPTG诱导下获得了预期的蛋白表达,所表达的蛋白质分子质量约为30kD。Western-blotting结果表明表达的NS1蛋白有良好的生物学活性,与H5N1 AIV感染鸡血清发生特异性反应,而与H5N1 AIV灭活疫苗免疫鸡血清无反应,为建立区分野毒AIV感染家禽与AIV灭活疫苗免疫家禽ELISA方法的建立提供了生物学材料。 相似文献
73.
74.
荧光定量RT-PCR检测鸡CD4、CD8基因表达水平 总被引:2,自引:0,他引:2
白细胞分化抗原CD4和CD8在机体免疫应答及其信号传递过程中发挥着重要作用。本试验建立了定量检测鸡CD4和CD8 mRNA表达水平的SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR(RRT-PCR)方法,并采用该方法对26-50日龄商品鸡外周血淋巴细胞(PBL)中CD4和CD8 mRNA表达水平进行了检测。结果显示:所建立的RRT-PCR对CD4和CD8 mRNA的扩增效率分别为93%和91%;线性范围分别在10^-4-10^-9和10^-3-10^-9;相关系数分别为0.998 0和0.999 9;最低分别能检测105和120拷贝;熔解曲线分别在78.2和86.7℃附近出现1个单特异峰;组内变异系数分别在1.13%-2.15%和1.17%-3.68%,组间变异系数分别在1.16%-3.25%和1.66%-2.86%。26-50日龄鸡PBL CD4和CD8的mRNA表达水平有小幅波动,与采用流式细胞术检测结果的报道一致。本试验建立的RRT-PCR方法敏感性高、稳定性和再现性好,为检测鸡CD4、CD8基因表达水平提供了精确定量的新方法。 相似文献
75.
本研究克隆了一株鸡源AIVH5N1亚型PQ分离株的NA基因,并对其进行了序列分析。结果表明NA基因开放阅读框架内含有1350个核苷酸,编码449个氨基酸。NA基因与发表的H5N1亚型毒株HKYU的核苷酸和氨基酸同源性分别为89%~98.4%和91.5%~98.7%。PQ分离株的NA茎部有20个氨基酸的缺失,从而使50、58、63、68位糖基化位点丢失。NA基因定向亚克隆入杆状病毒Bac-to-Bac系统的转移载体pFast BacDual中,经酶切和PCR鉴定为阳性的重组转移载体再转化入含有杆粒和辅助质粒的DH10BacTM菌中,与杆粒DNA在细菌内进行同源重组。以M13为引物,用PCR方法鉴定重组杆粒DNA,结果证明成功构建了表达NA基因的重组杆状病毒表达载体。 相似文献
76.
鸡传染性鼻炎(Infectious Coryza简称IC)是由副鸡嗜血杆菌(Haemophilus Paragallinarum简称HPg)引起的鸡上呼吸道性疾病。近几年来呈流行趋势,对养禽业造成极大的经济损失,主要表现肉鸡淘汰率增加,蛋鸡产蛋率下降10%~40%。 相似文献
77.
78.
79.
80.
33株H9N2亚型禽流感病毒分离株分子流行特点的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
在1998至2007年期间,采集了我国不同地区、不同宿主来源的H9N2亚型禽流感病毒株,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HA基因,获得33株H9N2亚型禽流感病毒的核苷酸序列。结合GenBank中公开发表的其他国内H9亚型禽流感HA基因序列共65株,应用计算机软件绘制进化树,进行H9亚型禽流感病毒谱系全景分析,探索H9亚型禽流感的流行趋势。分析结果表明:这65株的基因进化树主要分为三个系列,每个系列毒株均呈现全国性流行分布;三个系列毒株可在同一时间段内、同一地区发生流行;不同时间的流行毒株虽有变异,但大部分归属于三个系列中。无论从时间的推移上还是地域的转变中,病毒均没有表现出明显的时间演变与地理分布特征,进一步显示了H9亚型禽流感的复杂性和多样性。 相似文献