抗犬细小病毒单链抗体库构建及其亲和力检测

为获得高亲和力抗犬细小病毒单链抗体,构建抗犬细小病毒(CPV)细菌展示单链抗体文库。研究提取犬脾脏总RNA,反转录c DNA,以此为模板,分别扩增犬抗体VH和VL编码序列,插入克隆载体p Tlinker。利用SfiⅠ酶切位点将sc Fv基因构建至细菌展示载体p BSD中,将重组质粒电转化入E.coli DH5α构建p BFD-sc Fv细菌展示库。通过标记FITC的VP2蛋白,利用流式细胞术筛选12株阳性sc Fv。将12株sc Fv基因分别插入p ET-28a,构建重组表达质粒p ET28a-sc Fv。转化到E.coli Rosetta中诱导表达,获得约28 ku目的蛋白。经ELISA检测,纯化sc Fv对VP2蛋白P/N值均大于2.1,其中sc Fv-23、sc Fv-33、sc Fv-34对VP2蛋白亲和力较强。研究通过免疫本动物源动物,在获得高价抗体同时,避免传统单克隆抗体的免疫排斥现象;结合流式细胞术和细菌展示技术可对单链抗体文库高效、快速筛选。抗犬细小病毒同源单链抗体研究在填补市场同源基因工程抗体空白的同时,可为研制具有中和活性全长抗体奠定基础。     

麦秆全量还田对土壤肥力与水稻生长的影响

通过麦秆还田应用秸秆腐熟剂试验、麦秆还田数量对比试验的结果分析,明确了应用快腐剂能加快麦秆腐烂,且对水稻有一定增产效果、增幅达4.15%～7.15%;麦草全量还田水稻田成熟期土壤速效钾和碱解氮明显高于秸秆未还田块,土壤理化性状均有较大改善,容重有所降低,各种营养元素及有机质均有所提高;秸秆腐熟过程中会与植株争夺氮素养分...     

长期注射成纤维细胞生长因子21对二乙基亚硝胺诱发肝癌的预防作用

研究成纤维细胞生长因子21(FGF21)对二乙基亚硝胺(DEN)诱导肝癌模型的预防作用及机制。健康雄性wistar大鼠随机分3组:FGF21组,模型对照组及正常对照组。FGF21组大鼠每天注射一次FGF21,注射20周。2周后,FGF21组大鼠和模型组大鼠同时每3 d注射一次DEN,直至试验结束。给药结束后,取各组大鼠血清样本测定肝功,统计各组大鼠肝癌发生率,比较各组大鼠肝脏内氧化应激水平。结果表明,FGF21治疗组肝功显著低于模型对照组,接近正常水平。通过分析各组大鼠肝脏变化发现,FGF21治疗组大鼠肝癌发生率为18.1%,而注射生理盐水的模型对照组肝癌发生率为60.0%。FGF21治疗组肝脏内的活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量显著低于模型对照组,接近正常对照组;FGF21治疗组肝脏内超氧化物歧化酶(SOD)活性与正常对照组持平,显著高于模型对照组。Real-time PCR结果显示,FGF21治疗组肝脏的抗氧化酶基因(G6pdh,GCL-c,Gpx-1,Sod2)表达水平显著高于模型对照组。结果表明,长期注射FGF21可通过抑制肝脏内氧化应激水平预防DEN诱导的肝癌。     

定点突变FGF21提高表达量研究

FGF21是一类具有重要糖脂代谢调节功能因子,是治疗2型糖尿病候选药物。但其在大肠杆菌中表达量低且主要以包涵体形式表达,为此根据FGF21与FGF家族同源序列差异,对FGF21进行定点突变以提高其表达量。以pSUMO-FGF21表达载体为模板,在突变位点两端设计引物,采用定点突变方法,将FGF21141位甘氨酸(G)突变为苯丙氨酸(F),构建突变FGF21表达载体pSUMO-mutFGF21;在大肠杆菌中进行表达,纯化mutFGF21蛋白。利用SDS-PAGE和Western blot鉴定分析突变蛋白,HepG2细胞糖吸收试验检测突变蛋白活性。结果成功对pSUMO-hFGF21进行突变,突变蛋白在大肠杆菌中成功表达,经SDS-PAGE分析,主要以可溶形式表达;与野生型FGF21(hFGF21)相比,表达量提高50%。Western blot表明mutFGF21可与FGF21抗体特异性反应。糖吸收试验显示mutFGF21具有与hFGF21一样生物活性并存在剂量依赖性,相比hFGF21,mutFGF21活性略有提高,说明定点突变FGF21(141位G突变为F)可显著提高FGF21表达量。     

沿江高沙土地区水稻超高产栽培技术集成初探

江苏如皋高沙土地区的沙壤土，土壤肥力低，在水稻生产过程中，要高度重视土壤培肥，通过增施有机肥和复合肥改良土壤，并配套相应的栽培技术，才能提高该地区的水稻单产水平。本文初步阐述了高沙土地区水稻超高产途径及其栽培技术。     

水稻机插秧的优越性及高产栽培技术探讨

人工肥床旱育秧，秧本比1：20。而机插秧双膜或软盘育秧，秧本比为1：100，农户不需留秧母地，节省的秧田可种其它作物，增加农民收入。     

鸡传染性支气管炎免疫的研究 Ⅰ野外毒株的分离、鉴定与传代

鸡传染性支气管炎是由病毒引起的一种急性、高度接触性的呼吸道传染病,传播广泛。早在1930年Sckalk和Kawn报导,在美国North Dokoto的三周令以下的雏鸡发生急性呼吸道传染病,并分离到病原体。1936年Beach等人证明,鸡传染性支气管炎病毒与喉气管炎病毒是不同的。Beandette和     

春玉米、大豆同钵育苗移栽关键技术

近几年，我市不少农户利用玉米棵脚插种大豆，改玉米、大豆纯作为间、套种，改直播为两苗同钵育苗移栽，利用玉米苗床一钵育两苗，无需多制钵、多用工、多用膜，提高了膜钵利用率。大豆改直播为育苗移栽，争得壮苗早发，青豆荚可提早上市，禾本科和豆科、高秆和矮秆作物复合间作，共生互利，相得益彰。在不影响玉米高产的情况下，一般每亩可增收大豆30-40kg，增加经济产值100元左右，玉米、大豆双丰收，效益显著。     

浅谈水稻的抗倒性培植

我市中稻倒伏，去年面积较大，倒伏率为8.49%，结实率下降9.4％，千粒重减6.3％,平均减产16.7％；今后又出现罕见大面积倒伏，倒伏率达57.5％，结实率下降3.33％，千粒重减2.9％，平均减产6.3％。不能克服倒伏，就难以获得高产，也不可能稳产、高效和优质。为此近两年来，我们进行了广播细致的调查研究，以防水稻倒伏。