利用细菌发酵生产玉米素的研究

研究了利用细菌发酵生产玉米素的工艺。通过ELISA 反应检测发酵液中玉米素的含量,确定了玉米素发酵生产的最合适工艺。经HPLC检测,该条件下玉米素产量高达0.87 m g/m L。     

淹水培养过程中水稻土地杆菌科微生物群落结构变化特征

采用淹水非种植水稻土微环境模式系统,对水稻土进行1h和1、5、10、20、30d淹水培养,利用PCR-DGGE技术检测、多元统计分析淹水培养过程中地杆菌科微生物的群落结构和多样性变化规律及其影响因子。结果表明,淹水培养过程中地杆菌科微生物群落结构发生了明显的演替性变化:由r-对策优势种群演替至k-对策优势种群,且群落结构由不稳定向稳定演变(培养1h和1d处理间相似性最低,群落结构变化最大,20d和30d处理间相似性最高,群落结构变化最小);该过程中,地杆菌科微生物物种丰富度指数和Shannon-Weiner指数在1h处理中均为最小,5d处理的最大;CCA相关性分析表明,淹水培养过程中Fe(Ⅱ)浓度与群落结构多样性指数呈正相关,证实该类微生物对于异化铁还原能力具有重要作用;测序结果表明,19个优势DGGE条带与来自水稻土中的未培养地杆菌科微生物亲缘关系相近。     

黑曲霉木聚糖酶基因（xynA）在大肠杆菌中的表达及酶学分析

从黑曲霉(Aspergillus niger)F19中克隆得到木聚糖酶基因xynA.将不带原基因信号肽编码序列的xynA基因段以正确的阅读框架克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pET-28a(+)上,并转化E.co-li BL21,获得重组工程菌BLX1.经过IPTG诱导,xynA获得特异性表达,其表达产物以包涵体和胞内可溶性蛋白2种形式存在.经过SDS-PAGE分析,重组蛋白分子质量约为24 ku.酶学分析表明,最适反应温度为50℃,最适反应pH为5.0,在酸性条件下具有较好的稳定性.     

秦岭大熊猫IFN-γ基因的表达及其生物活性分析

【目的】探讨大熊猫秦岭种群和四川种群IFN-γ基因的差异,获得具有生物活性的秦岭大熊猫重组γ干扰素蛋白。【方法】采集秦岭大熊猫血样,采用RT-nested PCR技术扩增秦岭大熊猫IFN-γ基因,将其克隆到表达载体pET32a中,转入DH-5α,进行菌液PCR和双酶切鉴定,经序列测定与分析,构建表达质粒pET32a-IFN-γ,将其转入BL21(DE3)受体菌后,用IPTG诱导表达秦岭大熊猫IFN-γ蛋白。对重组IFN-γ蛋白进行SDS-PAGE电泳、Western-blot分析后,用镍柱亲和层析纯化可溶性蛋白。采用淋巴细胞增殖试验检测重组IFN-γ的活性。【结果】大熊猫秦岭种群和四川种群的IFN-γ基因序列在434位核苷酸处存在差异,秦岭大熊猫的为G,而四川大熊猫的为C;氨基酸序列相同。重组IFN-γ主要以可溶性形式存在,其分子质量为35.3 ku,约占菌体总蛋白的20%;纯化的可溶性蛋白经SDS-PAGE分析,纯度可达90%以上;重组IFN-γ具有促进淋巴细胞转化增殖的生物学活性。【结论】获得的重组IFN-γ蛋白表达量高且具有生物学活性。     

一株红棕象甲寄生真菌的分离鉴定

为明确一株红棕象甲寄生真菌的归属,采用形态学及分子生物学方法,从产孢表型、分生孢子特征和ITS序列测定等方面对其进行了分析鉴定。结果表明:该菌分生孢子梗粗短,顶端具2～5个瓶状小梗,分生孢子呈长椭圆形或圆柱形,大小为4.8～9.3μm×2.2～3.1μm;ITS通用引物扩增该菌得到了预期的558bp条带,其与金龟子绿僵菌小孢变种的支持率高达100%。因此,将该红棕象甲寄生真菌菌株鉴定为金龟子绿僵菌小孢变种Metarhiziumanisopliaevar.anisopliae。     

瓜枝孢弱毒菌株基因组分析

经高温筛选到具有弱致病性的瓜枝孢菌株2R、3R。经稳定遗传特性试验表明,菌株2R经15代繁殖后弱致病性仍然得到稳定遗传。采用RAPD和AFLP技术在全基因组水平分析了高温诱导产生的瓜枝孢弱毒菌株的变化。结果表明AFLP技术可以有效地揭示弱毒菌株的DNA的变异,瓜枝孢经50℃高温处理后基因组发生了显著的变化。AFLP图谱分为三种：一种是弱毒菌株和野生型菌株的扩增谱带基本相同;另一种是弱毒菌株产生的谱带一部分与野生型菌株相同,同时出现新的扩增片段;第三种情况是弱毒菌株有新的DNA片段产生,但是与野生型菌株相同的大部分主带消失。256个AFLP引物组合在扩增2R/2Q和3R/3Q时（瓜枝孢弱毒菌株2R和3R,野生型菌株2Q和3Q）,分别在2910和2216个位点上有DNA片段产生,2R与2Q以及3R与3Q的遗传相似性分别为24.81%和43.68%。     

海南槟榔细菌性叶斑病病原鉴定

In 2008, a severe bacterial disease was observed in Wenchang, Hainan Province. Symptoms consisted of small circular to elongated brown lesions surrounded by yellow halos. All isolates, which formed white colonies, were gram-negative and each had a single, polar, sheathed flagellum. Isolates were oxidase and catalase positive, negative for arginine dihydrolase, gelatin hydrolysis and starch hydrolysis, and acid production from levan. Sequences of the 16S rDNA gene of the isolates shared 98% sequence identity with that of Burkholderia andropogonis strain LMG2129 (GenBank accession No. NR118985). Pathogenicity tests were conducted and fulfilled Koch's postulates, indicating that these isolates are causative agent of the disease. The results led to the conclusion that the causal pathogen of betel palm bacterial leaf spot was B. andropogonis. It is the first report of B. andropogonis causing bacterial leaf spot of betel palm in mainland China.     

菊苣叶中生物活性物质的提取及其抑菌活性初测

以菊苣叶为材料,利用丙酮、乙醚、石油醚、乙醇4种有机溶剂,采用冷浸和索氏提取法分别提取叶中的活性成分。然后以提取液为供试药剂,对苹果腐烂病菌、棉花枯萎病菌、葡萄白腐病菌、构巢曲霉病菌4种植物病原真菌进行离体活性测定。结果表明：丙酮、乙醚、石油醚的提取液对4种病菌均有不同程度的抑制作用,其中对葡萄白腐病菌抑制效果最好;乙醇的提取液对枯萎病菌具有一定的抑制作用。表明菊苣叶中存在抑菌活性成分,补充了菊苣抑菌活性的研究内容,为该种植物抑菌活性成分的研究和应用奠定基础。     

油棕叶斑病的病原鉴定及其生物学特性

对油棕发生的一种严重叶部病害进行研究,对该病病原进行了分离和鉴定,经ITS序列分析确定该病病原为半知菌亚门拟茎点霉属真菌.生物学特性研究结果表明:该茵分生孢子呈椭圆形或球形,浅褐色至深褐色;马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)最适合该茵生长,其次是胡萝卜琼脂培养基(CDA)和燕麦琼脂培养基(OMA);在10 ～30℃范围内...     

海南省琼中县林业有害生物种类、分布及危害情况调查

琼中县地处海南省生态保护核心区,也是重要水源涵养区,对海南生态建设有着举足轻重的作用。对琼中县林业有害生物危害种类及危害程度等展开全面调查,共发现林业有害生物27种,其中虫害4目13科15种、病害9种、草害3种。分析认为:(1)林业检疫性有害生物双钩异翅长蠹发生面积仅有0.67 hm2,危害较轻;红火蚁和薇甘菊的发生面积虽然不大,分别仅为2.07和19.13 hm2,但危害逐渐加重;(2)林业危险性有害生物椰心叶甲发生面积223.93 hm2,为害仍然较重,刺桐姬小蜂危害偶有发生,危害减弱,槟榔黄化病、槟榔炭疽病发生面积扩大(分别为688.4和3 746.87 hm2),危害也较之前加重;金钟藤危害情况不容乐观,其分布范围(587.93 hm2)和危害程度已超过薇甘菊,由次生危害上升为主要草害;(3)其他有害生物,如红脉穗螟(发生面积51.13 hm2)从之前轻度危害逐渐加重为中度危害,而油茶炭疽病危害情况也开始加重。