三七总皂苷β-环糊精包合物稳定性研究

考察免疫佐剂——三七总皂苷(PNS)β-环糊精包合物的稳定性.采用比色法,以PNS含量为指标,分别对PNSβ-环糊精的包合物和混合物进行强光照射、高温、高湿、恒温加速试验.结果表明:在光、热、湿等因素影响下,包合物中PNS含量没有明显变化,而混合物中PNS含量明显下降,包合物的热失重百分率比混合物小.说明PNSβ-环糊精包合物具有一定的抗光照性、热稳定性和湿稳定性,其稳定性明显优于单纯PNS.     

鸭瘟病毒环介导等温扩增检测方法的建立及应用

为建立一种简便、快速、灵敏度高、特异性好的鸭瘟病毒(DPV)检测方法,根据GenBank中公布的DPV UL6基因组序列,设计了3对特异性引物,建立了LAMP快速检测方法。该方法的灵敏度可达0.1fg,对其他鸭常见病原体检测结果均为阴性,扩增反应只需在水浴锅中60min内即可完成,可通过肉眼观察颜色变化直接判定结果。结果表明,所建立的LAMP方法简便快捷,省时省力,是适用于现场和基层实验室快速、准确检测DPV的分子生物学方法。     

水貂阿留申病基因检测芯片的研究与初步应用

根据已发表的水貂阿留申病病毒（ADV）的序列，设计合成能扩增VP2基因片段的一对引物，通过生物素标记PCR技术，将VP2基因片段作为探针点在硝酸纤维素膜上，制作成疾病诊断基因芯片。以采取的160份可疑病貂的血液核酸作模板，进行PCR扩增，将其产物与诊断基因芯片进行特异性逆向点杂交检测；同时使用水貂阿留申病DOT-ELISA检测试剂盒进行检测、比较。结果表明基因芯片的检出率比ELISA方法高17％，试验同时还比较了常规PCR与基因芯片的敏感性。     

产志贺毒素大肠杆菌毒素基因的敲除

根据GenBank上致仔猪水肿病大肠杆菌志贺毒素(Stx2e)A单位基因序列(M21534)以及Red重组系统试剂盒提供的FRT-PGK-gb2-neo-FRT序列设计1对引物;引物的5′端与Stx2e基因同源,3′端与FRT-PGK-gb2-neo-FRT序列同源。使用合成的引物利用PCR扩增FRT-PGK-gb2-neo-FRT序列片段。将扩增的PCR片段转化带有pRedET重组质粒的产志贺毒素大肠杆菌(STEC)S451521菌株(F18+)的感受态细胞中,通过同源重组技术替换Stx2eA单位基因的805～1 152bp区域。通过卡那霉素抗性以及PCR检测获得同源重组的STEC后,将708-FLPe质粒进一步转化重组菌,利用Flp重组酶去除了重组菌的卡那霉素抗性。另外,研究还发现Stx2e基因在STEC基因组中并非单拷贝。     

新鱼腥草素钠增强NDV LaSota疫苗免疫作用研究

用新城疫病毒(NDV) LaSota株弱毒活疫苗接种1日龄非免疫健康肉雏鸡的同时,以新鱼腥草素钠为免疫佐剂按不同剂量颈部皮下注射,以生理盐水为对照;二次免疫后第7、14、21、28天分别测定各组动物的抗NDV血凝抑制抗体和外周血CD4 /CD8 淋巴细胞比值.结果表明: 新鱼腥草素钠对提高鸡体抗NDV血凝抑制抗体效价和外周血CD4 /CD8 淋巴细胞比值都有一定作用,与对照组差异显著(P<0.05),且这种作用与给药剂量有关.另外,新鱼腥草素钠对细胞免疫的影响早于对体液免疫.     

猪圆环病毒2型的PCR快速检测及其临床应用

根据GenBank中发表的猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)基因组序列,设计了2段特异性核苷酸引物.通过对已知PCV2和对照病毒(PCV1、伪狂犬病毒、猪细小病毒)的PCR扩增,证明所设计的引物可用于PCV2的特异性PCR检测.采集来自江苏扬州和泰州地区的157头份临床门诊病料(每头份均为脾脏和腹股沟淋巴结双份病料)进行PCR检测,发现仅从腹股沟淋巴结检出PCV2的占21.65%,仅从脾脏检出PCV2的占7.64%,从脾脏和淋巴结均可检出PCV2的占41.40%,其中扬州市地区感染率为73.47%,泰州地区感染率为66.10%.通过对扬州某屠宰场的32份腹股沟淋巴结的检测,结果表明临床健康猪的PCV2隐性感染率也高达71.88%.     

高等农牧院校科技服务“三农”的实践创新

阐述了江苏省最大的农牧职业院校--江苏畜牧兽医职业技术学院几十年来坚持走以打造品牌特色为根本、以科技服务"三农"为宗旨的办学思想,详细介绍了学院创新办学之路,倾情服务畜牧业、产学研结合育人才的办学模式.学院办学实力快速提升,办学水平显著提高,为江苏省农业科技创新、农业科技发展作出了积极的贡献,提高了农业生产水平,促进了农民增收和农村经济社会的发展,充分展示了高等农牧职业院校在建设社会主义新农村中的重要地位和作用.     

狼山鸡消化道乳酸菌的分离·鉴定以及生物学特性研究

[目的]分离和鉴定狼山鸡消化道乳酸菌,为开发新型禽用微生态制剂提供依据。[方法]利用厌氧菌分离技术,从狼山鸡肠道中分离乳酸菌,通过形态、生理生化特性、16S rRNA基因序列测定以及同源性分析对其进行鉴定,并对菌株进行耐酸性、抗菌活性等筛选。[结果]分离到5株乳酸菌LCr-01、LCr-02、LCe-01、LCe-02、LCe-03,经过生理生化试验、16S rRNA基因序列测定以及同源性分析,初步鉴定植物乳杆菌、卷曲乳杆菌、德氏乳杆菌以及嗜酸乳杆菌。其中,LCr-02具有较强的耐酸性和抗菌活性。[结论]筛选到的5株菌乳杆菌中LCr-02具有较强的耐酸性与抗菌活性。     

1型鸭肝炎病毒RT-PCR快速检测方法的建立

为建立快速检测临床1型鸭肝炎病毒(DHAV-1)感染的方法,根据DHAV-1的vp1基因序列设计1对引物,以DHAV-1及其他常见的感染鸭的病毒基因组为模板,建立了DHAV-1的特异性RT-PCR检测方法;以10倍梯度稀释的DHAV-1 RNA为模板,测定该方法的灵敏度;采集江苏多地的疑似DHAV-1感染病料,提取基因组进行RT-PCR扩增,产物经测序鉴定后判断所建立方法的检测率。结果显示,建立的方法可以特异性扩增DHAV-1 vp1基因保守区360 bp的序列,最低可检测1 fg基因组模板,对临床样品检测率为100%。表明,成功建立了特异性强、灵敏度高且可以用于临床快速诊断DHAV-1感染的方法。     

大肠埃希菌ETT2毒力岛ECs3703基因和HPI毒力岛irp2基因双重LAMP检测方法的建立

根据GenBank中大肠埃希菌ETT2毒力岛保守基因ECs3703和HPI毒力岛的保守基因irp2分别设计一套LAMP引物,在同一体系中进行LAMP扩增,通过对体系Mg2+、dNTP、内引物及反应温度和反应时间等进行优化,建立了在60℃恒温下对大肠埃希菌ETT2和HPI毒力岛进行同步检测的LAMP方法,并进行了特异性和灵敏性试验。结果显示,所建立的双重LAMP检测方法同时检测ETT2和HPI毒力岛大肠埃希菌检测限均可达到100fg,比常规PCR灵敏度高100倍。利用该方法对8株非大肠埃希菌进行LAMP扩增,结果均为阴性。用该方法对采集的20份临床样品进行检测,与双重PCR检测结果一致。结果显示,该双重LAMP方法可用于大肠埃希菌ETT2和HPI毒力岛的同步快速检测,可作为临床疫病诊断的有效手段。