杂交猪IFN-γ和IL-18双基因在Rosetta TM大肠杆菌的表达

依据已测的杂交猪IFN-γ、IL-18基因的核苷酸序列,设计4条引物,通过重叠PCR的方法将2个基因进行连接,并在两个基因连接处引入45 bp的连接肽的核苷酸序列;融合基因通过pEGX-4T-1载体及RosettaTM表达菌实现了原核表达,蛋白可被GST标签多抗识别.本研究的进行,为IFN-γ/IL-18融合蛋白的功能研究奠定了基础.     

陕西省农村劳动力就业活动圈选择及其影响因素分析

【目的】对陕西省农村劳动力就业活动圈选择及其影响因素进行分析,为优化农村劳动力就业活动圈的分布及促进充分就业提供理论依据和建议。【方法】利用316份陕西省榆林市农村劳动力的实地调查数据,运用多项Logistic回归模型进行实证分析。【结果】农村劳动力就业活动圈分布不均衡;年龄和性别对就业活动圈选择有显著负向影响;外出打工收入对就业活动圈选择有显著正向影响;学历对外乡本县及外省就业活动圈选择有显著正向影响;农业收入及其满意度对外乡本县就业活动圈选择有显著正向影响;技能培训对其选择本省外县就业活动圈有显著正向影响。【建议】政府可以通过招商引资、鼓励创业和促进农业产业化等措施拓展就地转移的就业空间;通过增加技能培训提高农村劳动力的实用技能;同时建立规范的务工信息中介机构以多渠道地拓展进城务工途径。     

西北农业企业“走出去”模式选择的影响因素——基于西北地区20家农业企业调研数据

农业企业"走出去"是促进农业科技交流、优化配置农业资源、提高农业国际竞争力及推进农业现代化发展的关键。通过实地调研收集西北地区20家已成功"走出去"农业企业的一手数据,总结现阶段主要"走出去"模式,并重点分析农业企业选择"走出去"模式的影响因素。结果表明,东道国政治、经济、市场环境、法律、社会文化和母国因素等企业外部因素,企业规模、产品差异、资源状况、国际化经营经验和管理层对风险的态度等企业内部因素会影响企业"走出去"模式的选择。另外,资源投入、控制程度、风险程度、投资收益和灵活性等模式内部特征也会对企业选择"走出去"模式产生影响。     

大肠杆菌O26、O45、O121血清型多重PCR检测方法的建立及应用

大肠杆菌O26、O45、O121血清群是STEC中的常见血清群,传统的大肠杆菌血清学检测存在费时、费力而且不同血清型之间经常出现免疫交叉反应,这给大肠杆菌血清学鉴定带来了极大的困扰。本研究根据大肠杆菌O抗原决定簇相关基因之间的差异设计合成了3对引物,能够快速而准确的鉴定这3种血清群,建立的方法具有较高的特异性、灵敏性,其最低检测灵敏度可达到10pg细菌基因组DNA。     

鸡痘病毒TCID50和EID50值相关性分析

鸡痘是鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)引起的一种急性接触性传染病,各年龄和品种的鸡都易感染,但雏鸡的敏感性最高.鸡痘可使病禽生长迟缓,产蛋下降,种禽发病时孵化率降低,若并发其他传染病、寄生虫病和卫生条件、营养状况不良时也可以引起大批死亡,特别是雏鸡损失更为严重,死亡率高达50％[1].在我国普遍采用疫苗接种措施,鸡痘的发生率已明显下降.目前,我国使用的国产鸡痘疫苗有两种,一种为细胞苗,另一种为组织苗.     

牛病毒性腹泻病毒套式RT-PCR检测方法的建立及初步应用

根据GenBank公布的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)全基因组序列,选择保守性比较高的5'非编码区,利用Oli-go6.0软件设计了2对特异性引物,建立了检测BVDV的套式RT-PCR方法。结果表明,该方法重复性好、特异性强、敏感性高,可以准确快速检测出极低含量的BVDV,极大地提高了常规RT-PCR检测方法的特异性和敏感性。临床初步应用表明,该方法可用于动物与疫苗生物制品原辅料BVDV的快速低含量检测。     

禽多杀性巴氏杆菌交叉保护因子的研究进展

禽霍乱是危害养禽业的重要传染病之一。疫苗免疫接种是防制该病的重要措施,传统疫苗因禽多杀性巴氏杆菌血清型众多且无交叉保护能力而不能有效控制该病。禽多杀性巴氏杆菌交叉保护因子的发现为研制适合各种血清型禽多杀性巴氏杆菌引起感染的广谱疫苗展现了诱人的前景。本文就禽多杀性巴氏杆菌交叉保护因子研究进展进行了综述。     

抗猪瘟病毒单克隆抗体的制备及特性鉴定

将纯化后的猪瘟病毒免疫4只SPF级BALB/c小鼠,无菌取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经半固体培养基克隆化和间接ELISA筛选,最终获得了4株稳定分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。ELISA结果显示4株单克隆抗体效价均较高,并与其他病毒及PK-15细胞培养物无交叉反应。Western blotting结果证实3株单克隆抗体可特异性识别猪瘟病毒。间接免疫荧光试验可在细胞膜内观察到特异性绿色荧光,表明3株单克隆抗体与猪瘟病毒具有良好的反应性。该研究为猪瘟病毒新型诊断试剂开发奠定了基础。     

仔猪圆环病毒2型与高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染的诊断与病毒变异分析

2010年,山东某规模化猪场2月龄仔猪群暴发未知疫病,发病率在80%以上、死亡率在50%以上。结合临床症状、剖检病变,以及PCR或RT-PCR检测,证实该猪场发生PCV-2与高致病性PRRSV混合感染。并且细菌病排查证实还混合感染了猪肺疫。通过对感染的PCV-2ORF2基因、PRRSV Nsp2基因部分序列进行分析显示,PCV-2毒株进化来源差异较大,毒株间核苷酸序列同源性仅为94.2%,但均属于2b基因型,在我国均广泛流行;高致病性PRRSV毒株序列同源性在99.7%以上,说明毒株进化来源同一,并且与近期报道毒株序列的同源性在99%以上,而与2006年分离毒株的序列同源性在95.8%～97.2%之间。以上结果表明,该猪场感染了不同进化来源的PCV-2,所感染的高致病性PRRSV高度同源,但相比2006年报道毒株已经发生一定程度的变异。     

昆明小鼠与BALB/c小鼠MHC-Ⅱ分子恒定链的序列差异分析及多克隆抗体的制备

分离昆明小鼠与BALB/c小鼠脾脏淋巴细胞,经Con-A活化,提取细胞总RNA,RT-PCR获得小鼠Ii分子（P31、P41）基因,DNAStar软件分析序列。将BALB/c小鼠P31/P41分子插入到pGEX-KG多克隆位点构建原核表达载体,IPTG诱导并经GST标签蛋白纯化柱纯化表达蛋白,将GST-P31/P41蛋白分别与弗氏佐剂混合乳化后免疫家兔,采集血清。测序分析显示,两品系小鼠P31、P41均分别为648、840bp,编码215个、279个氨基酸;序列比对结果表明,昆明小鼠、BALB/c小鼠P31、P41分子与GenBank已登录核苷酸序列与/或氨基酸序列均存在多个位点差异,且所克隆的两品系小鼠P31分子之间核苷酸序列同源性为98.8%,氨基酸序列同源性为98.6%;两种小鼠P41分子之间核苷酸序列、氨基酸序列同源性均为99.3%;通过与人、鸡对应Ii分子进行比较,发现与人同源性较高,核苷酸序列同源性在79.0%以上,氨基酸序列同源性在73.0%以上,而与鸡同源性相对较低,核苷酸序列同源性在55.0%以上,氨基酸序列同源性在41%以上。IPTG诱导并纯化后获得GST-P31/P41蛋白,免疫家兔后所采集的血清经ELISA、Western-blotting证实获得了兔抗P31/P41多克隆抗体。结果表示,昆明小鼠与BALB/c小鼠Ii分子间存在差异位点,并成功制备了兔抗Ii分子多克隆抗体,为开展靶向性表位疫苗研究奠定基础。