GEM技术浓缩纯化O型口蹄疫病毒灭活抗原方法的建立

[目的]验证利用革兰氏阳性增强基质颗粒(GEM)浓缩纯化口蹄疫病毒(FMDV)抗原的可行性。[方法]将含有3个自溶素基序的锚钩蛋白基因(PA)与针对O型口蹄疫病毒特异性纳米抗体基因(VHH)串联克隆入原核表达载体p ET-32a(+)中,构建原核表达载体p ET-VPA,将其转化大肠杆菌宿主菌BL21(DE3),表达获得融合重组蛋白VPA。先将GEM颗粒与重组蛋白VPA在37℃孵育30 min,离心,取沉淀用适量的FMDV抗原液重悬,再经一步低速离心,获得沉淀即为浓缩纯化的口蹄疫病毒抗原。利用SDS-PAGE、Western-blot、蛋白含量测定及146S测定等方法对浓缩纯化方法的可行性进行鉴定,并通过动物免疫试验初步验证浓缩纯化后抗原的免疫原性。[结果]VPA融合蛋白能够在大肠杆菌中部分可溶性表达。作为接头蛋白,VPA既能与GEM颗粒结合,又能与FMDV抗原结合。SDS-PAGE与Western-blot结果表明:FMDV通过GEM法得到有效纯化;146S测定结果表明FMDV的回收效率达到99%;总蛋白含量测定结果显示口蹄疫抗原杂蛋白去除率达到90%;动物免疫试验结果显示GEM技术纯化后的FMDV具有良好的免疫原性。[结论]利用GEM技术浓缩纯化口蹄疫病毒抗原是可行的。     

浅谈桐乡市农作物秸秆综合利用现状、问题及对策

为加快推进农作物秸秆综合利用、促进农业生态系统物质循环、减轻环境压力、改善农村农业环境、增加农民收入,通过对当前桐乡市主要农作物秸秆综合利用现状和做法进行调查,浅析了当前桐乡市农作物秸秆综合利用中存在的问题和困难,并依此提出了加速桐乡市主要农作物秸秆多元化利用的对策建议。     

黄曲霉毒素B1对雏鸡外周血T淋巴细胞亚群及 血清IL–2和IFN–γ的影响

为探明黄曲霉毒素B1(AFB1)对雏鸡细胞免疫功能的影响,将100只1日龄艾维茵健康公雏鸡随机分为4组,分别喂以基础日粮(玉米–豆粕型基础日粮,对照)和AFB1日粮(基础日粮中AFB1的添加量分别为0.15、0.3、0.6 mg/kg,分别记为AFB1Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组),试验期21 d。以流式细胞术检测雏鸡外周血T淋巴细胞亚群变化;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测雏鸡血清IL–2和IFN–γ含量变化。结果显示,与对照组相比,AFB1Ⅱ和AFB1Ⅲ组7、14和21日龄雏鸡外周血CD3+,CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴细胞百分比下降明显(P0.05或P0.01),血清中IL–2和IFN–γ含量降低(P0.05或P0.01),AFB1Ⅰ组雏鸡14日龄的血清IL–2和7日龄的IFN–γ含量降低(P0.05),表明摄食含黄曲霉毒素B1的日粮可导致雏鸡细胞免疫功能下降。     

桐乡市农作物秸秆禁烧与综合利用进展

秸秆是农作物的主要副产品,也是十分宝贵的生物资源。露天焚烧秸秆,不仅污染环境、浪费资源、影响交通,而且影响社会生产和人民生活,已成为一个严重的经济和社会问题。桐乡市确立生态立市理念后,市委、市政府高度重视农作物秸秆禁烧与综合利用工作,大力宣传露天焚烧秸秆的害处,引导农户积极应用秸秆垫畜禽棚舍带粪肥再还田、制作草绳及蜈蚣簇等,不断提高稻麦秸秆的利用率。采用推广联合收割机、大中型拖拉机及秸秆还田机等农机新机具来推进稻麦及油菜秸秆还田,改善土壤、增加肥力。     

橄榄果实中糖和氨基酸组成与含量分析

对5个橄榄品种(系)果实中糖与氨基酸组成与含量进行分析。结果表明,橄榄果实中可溶性总糖含量为2.43%～4.47%,蔗糖含量为1.08%～2.90%,还原糖含量为1.15%～1.48%。橄榄果实均含有17种氨基酸,包括苯丙氨酸、苏氨酸和赖氨酸等7种人体必需氨基酸(色氨酸未检测),组氨酸和精氨酸2种儿童必需氨基酸,胱氨酸和酪氨酸2种半必需氨基酸及6种非必需氨基酸,总氨基酸含量为688.26～1 109.52mg·hg-1,必需氨基酸、味觉氨基酸和药用氨基酸占总氨基酸含量的比例分别为24.13%～25.80%、90.41%～91.47%和67.98%～72.97%。橄榄果实中可溶性糖含量和氨基酸含量存在相关性;可溶性总糖含量与蔗糖含量呈极显著正相关,与丝氨酸、丙氨酸、组氨酸、甜味类氨基酸含量呈显著正相关;还原糖含量与天门冬氨酸含量呈显著正相关。     

福建省橄榄种质资源圃的建立

福建省橄榄种质资源圃于2002年建立，至今已收集、保存来自福建、广东、浙江、广西、云南、四川等省（区）127份橄榄种质资源，涵盖了我国绝大部分橄榄地方品种和重要遗传材料，是我国目前保存品种最多最齐全的橄榄种质资源圃。制订了《橄榄种质资源描述规范和数据标准（试行）》，并开展了资源抗寒性测定、叶片解剖结构观察、叶片性状多样性分析等基础性研究工作，初步选育出甜榄1号、池1号、光甜等橄榄优良单株。     

西藏尼洋河干流河岸带维管植物区系特征

统计分析尼洋河河岸带的维管植物多样性、区系地理成分、生活型、入侵植物、保护植物。结果表明：1)该区有维管植物571种,隶属于311属,86科,生活型丰富多样,主要以草本植物为主,木本植物有125种,占全部植物种数的21.89%;草本植物446种,占全部植物种数的78.11%,物种多样性较高。2)该区有8种国家二级保护植物,1种国家一级保护植物,外来入侵植物20种。3)优势科现象明显,本区单种科与寡种科占比大,但属和物种主要集中在少数几个大科中,属的数量组成上,本区单种属与小属是组成尼洋河河岸带植物种多样性的主要成分,所含物种数占总物种数的80.04%。4)本区植物种的区系以温带性质成分为主,区系成分丰富多样,有15种区系类型,其中以中国-喜马拉雅分布为主。5)特有种丰富,中国特有种138种,占非世界分布总种数的25.00%,其中41种为西藏特有种。     

肉桂醛对炎性IPEC-J2细胞AQP4和NHE3基因表达的影响

本试验旨在探讨肉桂醛（CA）对炎性猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）水通道蛋白4(Aquaporin 4,AQP4)和钠-氢交换蛋白3(Na+-H+Exchanger3,NHE3)表达的影响,以揭示肉桂醛抗炎止泻的分子作用机制。将IPEC-J2细胞随机分为对照组、脂多糖组（5.00μg/mL LPS）和LPS+CA组（5.00μg/mL LPS+0.05μL/mLCA）组,各组按剂量孵育12h后,每组3个重复。采用CCK-8法检测细胞活力,RT-qPCR检测IL-1α、TNF-α、AQP4及NHE3 mRNA的相对表达水平,ELISA检测细胞中IL-6、TNF-α、IL-1α含量,Western blotting检测AQP4及NHE3蛋白表达。结果显示：与对照组相比,5μg/mL LPS能显著提高IPEC-J2细胞中IL-1α和TNF-α mRNA丰度及IL-6、TNF-α、IL-1α含量,说明5μg/mL LPS能诱导IPEC-J2细胞的炎症反应;与LPS组相比,0.05μL/mL CA与LPS共处理后,IPEC-J2细胞中IL-1α和TNF-α mRNA的表达水平显著下降,IL-6、...     

地锦草水提物在IPEC-J2细胞中的抗炎与抗氧化作用

【目的】为了揭示地锦草(EH)在猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)中的抗炎和抗氧化作用。【方法】利用不同浓度EH水提物(0、5、10、50、125、200 μg/mL)处理IPEC-J2 细胞12 h,通过CCK-8法检测IPEC-J2细胞活力,确定EH处理细胞的最佳浓度。将IPEC-J2细胞随机分为对照组(CT)、脂多糖(LPS)组(LPS)、EH+LPS组(ELP),每组3个重复。CT组细胞正常培养不做任何处理,LPS组细胞用5 μg/mL LPS处理,ELP组细胞用5 μg/mL LPS和最佳浓度EH共处理,各组细胞均处理12 h后,收集细胞和上清。利用实时荧光定量PCR方法检测细胞中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、核因子E2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)mRNA表达;ELISA法检测上清液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量,化学荧光法检测上清液中活性氧(ROS)水平。【结果】与0 μg/mL EH组相比,5、50 μg/mL EH组IPEC-J2细胞活力显著增加(P＜0.05);10 μg/mL EH组IPEC-J2细胞活力极显著增加(P＜0.01),125 μg/mL EH组IPEC-J2细胞活力下降,但差异不显著(P＞0.05),200 μg/mL EH组IPEC-J2细胞活力极显著下降(P＜0.01)。因此,后续选用10 μg/mL EH处理IPEC-J2细胞。与CT组相比,LPS组IPEC-J2细胞中IL-6、TNF-α基因mRNA的表达极显著增加(P＜0.01),上清液中MDA含量和细胞ROS的荧光强度极显著增加(P＜0.01),Keap1、Nrf2和HO-1基因mRNA表达极显著下降(P＜0.01),抗氧化酶SOD、GSH-Px的含量极显著下降(P＜0.01)。与LPS组相比,ELP组IPEC-J2细胞中IL-6基因mRNA表达极显著下降(P＜0.01),TNF-α基因mRNA的表达显著下降(P＜0.05),细胞上清液中MDA含量和细胞ROS的荧光强度均极显著下降(P＜0.01),Keap1、Nrf2、HO-1基因mRNA表达极显著增加(P＜0.01),GSH-Px含量极显著升高(P＜0.01),SOD含量显著升高(P＜0.05)。【结论】EH水提物在猪小肠上皮细胞中通过激活Keap1/Nrf2信号,提高抗氧化酶SOD和GSH-Px含量,启动下游靶基因HO-1表达,发挥抗炎和抗氧化的作用,且10 μg/mL EH水提物作用效果最佳。     

叶片结构与柑橘溃疡病抗性的初步研究

以稻叶温州蜜柑[Citrus unshiu(L.)var.Inaba]、春见[(C.reticulata×C.sinensis)var.Okitsu No.44]、卡拉卡拉红肉脐橙[C.sinensis(O.)var.Cara Cara]、玫瑰橙[C.Sinensis var.Meiguicheng]和HB柚[C.grandis(L.)var.HS]等5个柑橘品种的夏梢老熟叶片为材料,采用表皮撕取法及常规石蜡切片法对气孔及叶片显微结构进行解剖构造的观察和测定,并就结构与品种的溃疡病抗性进行了相关性分析.结果表明:不同品种间叶片的气孔密度差异显著,并且与品种抗病性成正相关,其相关系数为0.888;不同品种间叶片的显微结构特征差异不显著,与品种抗病性相关性不显著,品种间变化规律性不强.叶片气孔的密度可作为抗柑橘溃疡病的形态结构的初步鉴定指标.