李宝聚博士诊病手记(九十九) 番茄花叶病毒对番茄茎部和果实危害严重

正正番茄在我国乃至世界上都是种植范围最广的蔬菜之一,具有良好的营养价值和经济效益。然而番茄上的病害也有很多,对番茄的生产造成很大的危害。番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,To MV)寄主范围较广,不仅能侵染茄科、十字花科等蔬菜作物,还能侵染花卉和苗木等,对寄主尤其是番茄的危害十分严重。近年来,随着地域交流的加强、番茄品种的多样化以及天气的变化,番茄花叶病毒病的症状也呈现多样化,且危害不减。中国农业科     

10%乙霉威·腐霉利微粉剂的研制及其 对黄瓜棒孢叶斑病的防治效果

【目的】获得对多主棒孢（Corynespora cassiicola）抑菌活性高的杀菌剂乙霉威和腐霉利的最佳混配比例,将其加工成微粉剂并确定其对黄瓜棒孢叶斑病的防治效果。【方法】采用菌丝生长速率法,测定乙霉威与腐霉利不同配比混合物对多主棒孢的毒力,以Wadley公式评价其协同作用,明确最佳增效组合;通过单因素试验、正交试验筛选载体、助剂及最优配比,确定其最佳配方后,利用气流粉碎机超微粉碎加工成微粉剂,测定其对黄瓜棒孢叶斑病的防治效果。【结果】乙霉威与腐霉利以质量比1﹕1、1﹕4进行混配时,对多主棒孢菌株HG09112606、FQ07091401、HG11011509均表现为毒力增效作用,增效系数分别为3.19、2.53、1.68;1.99、1.77、1.98,其中1﹕1的混配组合增效作用较为明显。以质量分数为10%的乙霉威·腐霉利为有效成分,3%的萘磺酸钠盐甲醛缩合物NNO为分散剂,3%的十二烷基硫酸钠K12为表面活性剂,1%的聚氧乙烯烷基醚为稳定剂,15%的白炭黑和补足至100%的硅藻土为载体而研制的10%乙霉威·腐霉利微粉剂粒径为6.18 μm,分散指数95.18%,浮游性指数86.26,含水率1.24%,坡度角67°,热贮分解率4.12%,各项检测结果均符合标准。在盆栽试验中,10%乙霉威?腐霉利微粉剂在用药量为100 g a.i./hm²时喷粉对黄瓜棒孢叶斑病的防治效果为89.82%,显著高于对照药剂35%苯甲·咪鲜胺水乳剂、43%氟菌·肟菌酯悬浮剂在推荐用量时喷雾的防治效果;在田间试验中,10%乙霉威·腐霉利微粉剂在用量为100 g a.i./hm ²时喷粉对黄瓜棒孢叶斑病的防治效果为84.39%,与35%苯甲·咪鲜胺水乳剂在用量为300 g a.i./hm ²、43%氟菌·肟菌酯悬浮剂在用量为90 g a.i./hm ²时的喷雾防治效果无显著性差异。【结论】乙霉威和腐霉利混配使用对多主棒孢具有不同程度的毒力增效作用;按照选定的配方加工成的10%乙霉威?腐霉利微粉剂粒径小,分散指数、浮游性指数高,贮存稳定,在黄瓜棒孢叶斑病的防治方面具有广阔的应用前景。     

大白菜枯萎病病原镰刀菌种类的初步研究

 2014~2016年,由于栽培管理及重茬等原因,大白菜枯萎病在我国大面积发生,造成了巨大的经济损失。为了明确引起大白菜枯萎病的病原菌,本课题组从山东、内蒙古、河北、甘肃等大白菜主产区采集了具有典型枯萎病症状的病样,并对样品中的病原菌进行了分离和鉴定。形态学鉴定结果表明:分离物分别具有尖孢镰刀菌 (Fusarium oxysporum)、茄病镰刀菌 (F. solani) 和木贼镰刀菌 (F. equiseti)的形态学特征。柯赫氏法则验证结果表明:3种病原菌均能使大白菜发病,且发病症状与田间症状一致。此外,基于病原菌的rDNA-ITS和mt SSU序列的测序比对,3种病原菌与尖孢镰刀菌、茄病镰刀菌和木贼镰刀菌的同源性分别达99%~100%,这与形态学鉴定结果相一致。尖孢镰刀菌引起白菜枯萎病为国内首次报道,而茄病镰刀菌和木贼镰刀菌引起白菜枯萎病为国内外首次报道。     

番茄细菌性斑点病菌、溃疡病菌、青枯病菌和疮痂病菌的四重PCR检测方法

针对引起番茄细菌性病害的细菌性斑点病菌（Pseudomonas syringae pv. tomato,Pst）、溃疡病菌（Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis,Cmm）、青枯病菌（Ralstonia solanacearum,Rs）以及疮痂病菌（Xanthomonas campestris pv. vesicatoria,Xcv）,建立了四重PCR检测技术,为病害的快速、准确诊断提供技术支持。根据gap1基因设计Pst特异性引物BW-F/BW-R,经PCR条件优化,扩增出了375 bp的特异性片段。将设计的引物与已报道的3种细菌特异性引物组合,通过设定不同的退火温度、引物浓度、循环次数以及延伸时间,探索影响四重PCR扩增的因素,优化了其反应体系。四重PCR反应体系中的引物对BW-F/BW-R、Fan1/Fan2、RS-1-F/RS-3-R和XCVF/XCVR可分别扩增出细菌性斑点病菌、溃疡病菌、青枯病菌和疮痂病菌长度为375、146、716和517 bp的特异性目的片段,反应体系退火温度为57.1 ℃,4对引物的终浓度分别为0.24、0.16、0.16和0.08 μmol ? L-1,延伸时间45 s,35个循环。该四重PCR反应体系可快速检测田间番茄发病植株中的细菌性斑点病菌、溃疡病菌、青枯病菌和疮痂病菌,灵敏度达到10-1 ng ? μL-1。     

辣椒疫霉菌RT-PCR检测技术的建立及应用

根据辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici Leonian）与致病疫霉菌（Phytophthora infestans）及其他8种常见土传病害病原菌Actin基因序列差异,设计并筛选出辣椒疫霉菌的特异性引物YM2F/YM2R,建立辣椒疫霉菌的实时荧光定量PCR检测体系,并利用该体系定量检测人工模拟带菌样品及田间发病土壤样品中的辣椒疫霉菌。试验结果表明,利用该引物建立的实时荧光定量PCR检测体系线性关系良好,灵敏度为1 × 10-1 pg ? μL-1,是普通PCR的100倍。该体系无需病原菌的分离培养即可对土壤中的辣椒疫霉菌进行快速、特异且定量检测。对田间土壤样品的检测结果表明,在一定范围内病害发生、流行程度与病原菌密度成正比,从而为该病的流行监测和早期防控提供科学依据。     

葡聚六糖诱导植物防卫反应的信号传导

以烟草悬浮细胞和黄瓜为试材,采用常规试验方法测定防卫反应相关指标,探讨葡聚六糖诱导植物后防卫反应信号传导的途径。结果表明:葡聚六糖诱导后,烟草悬浮细胞在50min时pH值达峰值,为5.75;60min时一氧化氮(NO)含量达峰值,为38.4μmol.mL-1,80min时苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性达到峰值,为3.06U·g-1.FW-1;30min时过氧化氢(H2O2)含量达峰值,为3.8μmol·g-1.FW-1,同时过氧化氢酶(CAT)活性也达峰值为129.3U·g-1.FW-1。添加不同抑制剂EGTA、新霉素、氯化锂(LiCl)等测定发现,细胞胞内和胞外Ca2 参与调控葡聚六糖诱导的NO释放及H2O2迸发。葡聚六糖诱导黄瓜产生对霜霉病菌的系统抗性,处理叶及其上位叶和下位叶的防效分别为81.34%、52.12%、6.69%。测定黄瓜叶片PAL、H2O2及其清除酶CAT、SOD活性发现,处理叶活性达到高峰之际,其上位叶和下位叶的活性也先后达峰值,此间抗病信号发生了系统传导。     

不同灰霉病菌株对黄瓜幼苗的致病力分析

用采集自全国的26个灰霉病菌株，采用苗期菌片接种法和离体叶片接种法，对两个黄瓜纯系进行抗病性鉴定，分析了不同灰霉病菌株对黄瓜品系的致病力。结果表明，不同灰霉病菌株对黄瓜的致病力表现出极显著的差异，平均病斑面积在0~556.15 mm2之间。部分菌株对黄瓜不同基因型的致病力有一定差异。相关分析表明，离体叶片接种法的鉴定结果与苗期菌片接种法基本一致。     

西葫芦果实腐烂病的病原诊断与防治

随着我国蔬菜种植面积的不断扩大、广大菜区基本上实现了蔬菜的周年栽培,病害已成为西葫芦生长过程中的主要障碍之一,特别是在保护地湿度大、重茬、栽培密度过高、管理不善的情况下,蔓延速度更快,严重影响西葫芦的产量和品质,其中对西葫芦产量影响最大的是果实腐烂病。造成西葫     

瓜类蔓枯病的发生与防治

蔓枯病又称黑色茎蔓腐烂病、黑色斑点腐烂病等，主要为害瓜类作物，近年来在素有“蔬菜之乡”的山东省寿光市以及北京市顺义地区等冬季大棚中为害尤为严重，造成死藤、烂叶、果实腐烂等，导致果实品质和产量下降，可食用性降低，给菜农带来严重损失。蔓枯病最初于1891年在法国、意大利、美国被报道，寄主分别为黄瓜、甜瓜、西瓜，而后该病频繁发生于温室中。我国华北、东北、新疆等地都有瓜类蔓枯病的记载。蔓枯病病原菌的寄主范围广泛，可寄生在绝大部分的瓜类作物上，     

茄子绒菌斑病的病原鉴定、发生与防治

我国早在二十世纪三四十年代即有茄子绒菌斑病(茄子叶霉病)的记载，日本在1973年开始有该病的报道，以后我国许多地方都有发生，但为害一直很轻，一般不会引起明显的损失。二十世纪90年代以来，随着我国茄子设施栽培面积的不断扩大，该病在北方一些保护地茄子产区有加重的趋势，甚至成为某些地区的主要病害，造成重大损失，减产达30％～