瓜枝孢弱致病菌诱导黄瓜植保素的积累及抑菌活性

瓜枝孢(Cladosporium cucumernium ) 弱致病菌株2-2A₂诱导黄瓜产生对黄瓜黑星病的抗病性反应。对经2-2A₂诱导后黄瓜叶片中提取的物质进行生物活性试验、硅胶板薄层层析、高效液相色谱分析,证明2-2A₂可以有效诱导黄瓜中类黄酮类植保素的积累。     

滋养节杆菌S17的分离鉴定及其对黄瓜促生能力研究

为筛选出具有促生效果的生防细菌,本研究从河北、山东等地采集土样,分离筛选具有高产IAA能力的促生菌株,基于形态学特征、生理生化指标及多基因系统发育树分析,对潜在具有促生能力的菌株进行鉴定。同时测定促生菌株对黄瓜种子出芽及在盆栽试验、田间试验中对黄瓜幼苗的促生效果。结果表明：分离并鉴定出1株对黄瓜幼苗具有显著促生效果的细菌,滋养节杆菌ArthrobacterpascensS17。在DF+培养基中滋养节杆菌S17可大量合成IAA,其合成的IAA含量最高为128.54μg/mL。使用滋养节杆菌S17灌根处理,对黄瓜幼苗株高的增长率达到35.99%、对黄瓜幼苗叶面积的增长率达到26.90%,黄瓜幼苗各项生理指标均显著高于对照。滋生节杆菌S17对黄瓜促生效果显著,具有一定的开发应用前景。     

蔬菜作物灰葡萄孢菌对不同类型杀菌剂的抗性评价

为评价灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)的抗药性发展现状,采用菌丝生长速率法测定了自华北地区蔬菜作物上分离得到的85株灰葡萄孢菌对苯并咪唑类(多菌灵)、二甲酰亚胺类(腐霉利)、N-苯氨基甲酸酯类(乙霉威)、苯胺基嘧啶类(嘧霉胺)、酰胺类(啶酰菌胺)以及苯并吡咯类(咯菌腈)等6种不同类型杀菌剂的敏感性。结果表明:华北地区蔬菜作物上的灰葡萄孢菌对6种不同类型杀菌剂均产生了不同程度的抗药性,其中防治灰霉病的常用杀菌剂嘧霉胺、啶酰菌胺以及新型杀菌剂咯菌腈的抗药性发展迅速。灰葡萄孢菌对传统杀菌剂多菌灵、腐霉利、乙霉威的抗性水平较高,总抗性频数分别为72.94%、51.76%、69.41%;多菌灵-乙霉威双抗频数为51.76%,多菌灵-腐霉利-乙霉威三抗频数为34.12%。灰葡萄孢菌对目前防治灰霉病的主要杀菌剂嘧霉胺及啶酰菌胺也已经产生了较高水平的抗性,其抗性频数分别为64.71%和65.88%。而对于新型杀菌剂咯菌腈的抗性频数为36.47%。共发现了40种多重抗药性的类型,且有32种多抗类型未曾报道;1株灰葡萄孢菌对6类杀菌剂均表现敏感,抗性频数为1.18%;5株灰葡萄孢菌对6类杀菌剂均表现抗性,抗性频数为5.88%。实际生产应用中应尽量避免单一杀菌剂的长期重复使用,建议多种药剂配合使用以延长杀菌剂的使用寿命。     

马铃薯块茎和土壤样品中粉痂病菌快速检测方法的建立

 马铃薯粉痂菌(Spongospora subterranea f. sp. subterranea)是引起马铃薯粉痂病的病原。本研究根据粉痂菌内部转录间隔区和线粒体DNA的保守区域,分别设计了2对适用于普通PCR的引物A5/A9、C3/C8和1对适用于荧光定量PCR的引物QF/QR,用于检测块茎和土壤样品中的粉痂菌。特异性检测结果表明:引物对A5/A9和C3/C8,以马铃薯粉痂菌DNA为模板,能分别扩增出264和367 bp大小的单一条带,而对其他非靶标DNA无扩增;引物对QF/QR对马铃薯粉痂菌有单一的熔解峰,说明三对引物特异性良好。灵敏性检测结果表明:荧光定量PCR灵敏度为13.8 fg·μL^-1,是普通PCR灵敏度的1 000倍。进一步建立循环域值(Ct)与质粒DNA含量的曲线关系,获得标准曲线y=-3.893 9 x+35.228,R² = 0.9966,呈良好线性关系。通过对不同地区采集的18份带菌种薯和18份带菌土壤进行普通PCR和荧光定量PCR检测,引物A5/A9、C3/C8和QF/QR对带菌种薯检测率均为100%,对带菌土壤的检测率分别为44.44%、66.67%和100%。本研究建立的马铃薯粉痂病菌快速检测方法,能及时、准确地检测带菌种薯和土壤,为马铃薯粉痂病的早期诊断和防治提供依据。     

白菜黑腐病拮抗菌Lysobacter enzymogenes CX03的分离鉴定及生防效果研究

从白菜根际土壤中分离到一株对白菜黑腐病菌具有显著拮抗效果的生防细菌CX03。根据生物学特征、生理生化分析、Biolog测定及多基因系统发育分析，鉴定菌株CX03为产酶溶杆菌Lysobacter enzymogenes。酶学试验结果表明，菌株CX03在代谢过程中产生纤维素酶、蛋白酶和几丁质酶。通过抑菌谱分析，证明菌株CX03具有广谱拮抗作用，对野油菜黄单胞野油菜致病变种、密执安棒杆菌密执安致病变种等5种病原细菌和尖孢镰孢菌、辣椒疫霉菌等4种病原真菌具有显著的拮抗效果。通过盆栽试验结果显示，菌株CX03处理组的白菜黑腐病症状明显减轻，防治效果达到90.4%，显著高于春雷霉素的防治效果84.1%。综上所述，本文首次报道了一株对植物病原细菌具有抗菌活性的产酶溶杆菌生防菌株CX03，其生防性状优良，在植物病害生物防治中具有一定的应用潜力，为国内生物防治研究提供了新的微生物资源。     

李宝聚博士诊病手记(九十一) 云南大白菜“脱落病”病原菌鉴定与防治方法

正2015年5月,中国农业科学院蔬菜花卉研究所菜病综防课题组在云南地区进行病害调查发现,当地大白菜菜帮脱落严重,菜农称之为"脱落病"。该病在云南各地普遍发生,随着大白菜种植面积不断扩大和复种指数提高,土壤中的病原菌逐年增多,大白菜脱落病的危害呈逐年加重的趋势。该病田间症状表现为叶片脱落、茎基部出现腐烂,严重时可减产60%~80%。基于此,本文旨在通过大白菜"脱落病"发病症状识别、病原菌鉴定和发病规律探索,为该病的     

弥粉法施药防治设施蔬菜高湿病害技术

为了有效解决设施蔬菜高湿病害轻简化防控问题,促进设施蔬菜产业健康发展,研发出了新型微粉剂和精量电动弥粉机,解决了弥粉法施药技术对药剂和药械的要求。技术操作简单、方便快捷,还具有药剂吸附均匀、整棚空间处理无死角、施药不受天气限制、大幅度节省施药劳动力投入等优势,防治效果较好。弥粉法施药适合在设施蔬菜主产区大面积推广,前景广阔。     

水生拉恩氏菌ZF7分离鉴定及其促生防病效果研究

 从樱花根际土壤中分离到一株对大白菜黑腐病菌具有强拮抗作用的细菌ZF7。根据生物学特征、16S rDNA 序列分析、Biolog及生理生化分析,菌株ZF7被鉴定为水生拉恩氏菌Rahnella aquatilis。利用平板对峙法和双层培养法,证明菌株ZF7具有较广的抑菌谱,对5种病原真菌和5种病原细菌具有明显拮抗效果。而且,该菌能在大白菜根际土壤以及白菜根部稳定定殖。采用盆栽试验对菌株ZF7进行促生防病效果测定,结果表明该菌对大白菜具有显著的促生效果。灌根菌量为20 mL/株时,菌株ZF7对大白菜株高和根长的促生率分别达56.47%、54.74%,对地上部重量及根重的促生率分别达233.84%和164.71%。同时,菌株ZF7对大白菜黑腐病具有良好的防治效果,防效可达88.80%,高出中生菌素的防治效果26.76%。综上分析,菌株ZF7生防性状优良,具有一定的田间应用开发潜力。     

多主棒孢菌CcTLS1对黄瓜的致病机理分析

为了解多主棒孢菌CcTLS1基因对黄瓜棒孢叶斑病的致病机理，以多主棒孢菌强致病力菌株HG14102524和弱致病力菌株HG15052104为研究对象，通过对CcTLS1在强致病力菌株中敲除、回补以及在弱致病力菌株中异源表达等方法，研究CcTLS1在多主棒孢菌对黄瓜致病过程中的作用。CcTLS1全长为1 222 bp，与GenBank中已注释的基因无序列相似性。与野生型菌株相比，CcTLS1基因敲除菌株对黄瓜的致病力明显下降，产孢量和产孢梗数量显著减少，菌丝变细易卷曲，隔膜减少，纤维二糖水解酶分泌显著降低；而CcTLS1回补菌株致病力、产孢量以及纤维二糖水解酶分泌得到恢复；与野生型菌株相比，CcTLS1异源表达菌株对黄瓜的致病力提升，菌丝粗壮且隔膜增多，纤维素酶及纤维二糖分解酶分泌显著增加。影响多主棒孢菌致病的蛋白激酶基因CCK1、产孢相关基因（Ccflbc、CcstuA）以及黑色素合成相关基因CcSCD1，在CcTLS1基因敲除菌株中的相对表达量显著下调。结果表明，CcTLS1的表达影响菌株产孢机制、菌丝生长、蛋白激酶表达以及黑色素合成，在多主棒孢菌致病中起重要作用。