猪圆环病毒Ⅱ型衣壳蛋白片段与T4噬菌体SOC蛋白的融合表达

将PCV2衣壳蛋白片段与T4噬菌体SOC蛋白在大肠杆菌中融合表达。利用PCR技术扩增猪圆环病毒Cap基因。将Cap基因克隆至T4噬菌体表达质粒pSOC的SOC基因（T4噬菌体表面非结构蛋白基因）下游,构建成T4噬菌体SOC位点表达Cap的表达载体pSOC-Cap。将其转化至大肠杆菌BL21（DE3）,经IPTG诱导后表达的目的蛋白SOC-Cap进行SDS-PAGE与Western-blot方法检测。表达的SOC-Cap蛋白相对分子质量约28kD,表达量占菌体总蛋白量的22.31%,并具有与PCV2特异性抗体反应的活性。PCV2衣壳蛋白片段与T4噬菌体SOC蛋白的融合表达后,表达量较高,并具有免疫活性,有望用于猪圆环病毒II型的诊断和预防。     

催乳素释放肽对摄食功能的调节

催乳素释放肽（PrRP）是RF肽的一个新成员,它通过与G蛋白耦联受体结合,起着很多重要的生理调控作用。催乳素释放肽可通过多种途径作用于下丘脑,参与摄食、能量的调节。本文主要回顾了目前有关催乳素释放肽在调节摄食方面的研究进展。     

抗H5亚型AIV血凝素单克隆抗体的制备及亚型鉴定

制备抗H5亚型AIV血凝素单克隆抗体;依据淋巴细胞杂交瘤技术,用纯化的H5N1亚型AIV和重组噬菌体T4-H5HA免疫Balb/C小鼠,细胞融合后用ELISA方法筛选特异性单克隆抗体;获得6株抗H5亚型AIVHA的特异性单克隆抗体H5-01（1E6）、H5-02（2C2）、H5-03（2A8）、H5-04（2G6）、H5-05（2E9）和H5-06（3F6）。各株单抗亚型测定的结果为：H5-01、H5-02为IgG1,H5-03、H5-04为IgG2a,H5-05、H5-06为IgG2b,轻链的亚型均为kappa链;经特异性和与同型病毒的反应谱检测,6株均是抗H5亚型AIVHA特异性单克隆抗体,为进一步分析H5N1亚型AIV的结构与功能以及建立监测该亚型AIV的试剂盒奠定了基础。     

左旋咪唑对新城疫灭活疫苗抗体滴度的影响

为探讨免疫增强剂左旋咪唑对新城疫灭活疫苗抗体滴度的影响,将20只20日龄雏鸡,随机分成A、B、C、D4组,每组5只。分别皮下注射新城疫灭活疫苗0.5ml/羽,同时注射A组雏鸡高(0.6mg)、B组中(0.3mg)、C组低(0.15mg)剂量的左旋咪唑,对照组D不加。免疫后0天、7天、14天、21天和28天,翅下静脉采血并检测新城疫抗体滴度。结果显示:免疫前4组抗体水平基本一致,无统计学意义;免疫后7天,14天,21天,高、中、低3组抗体水平基本一致,4组的抗体水平相差均在2个滴度以内,统计分析无明显差异;免疫后28天,B组抗体水平较高。统计分析显示,对照组与高、中、低3组均有显著差异,但无剂量差异;在高、中、低3组中,以中剂量添加最佳,抗体效价高(7.2log2),但中剂量组与高、低组的差异不显著。这表明,左旋咪唑的添加提高新城疫抗体滴度,并且与免疫后时间长短有关系。从趋势看,随着时间的推移,添加组的抗体水平好于对照组。     

猪圆环病毒Ⅱ型衣壳蛋白片段与T4噬菌体SOC蛋白的融合表达

将PCV2衣壳蛋白片段与T4噬菌体SOC蛋白在大肠杆菌中融合表达。利用PCR技术扩增猪圆环病毒Cap基因。将Cap基因克隆至T4噬菌体表达质粒pSOC的SOC基因（T4噬菌体表面非结构蛋白基因）下游,构建成T4噬菌体SOC位点表达Cap的表达载体pSOC-Cap。将其转化至大肠杆菌BL21（DE3）,经IPTG诱导后表达的目的蛋白SOC-Cap进行SDS-PAGE与Western-blot方法检测。表达的SOC-Cap蛋白相对分子质量约28kD,表达量占菌体总蛋白量的22.31%,并具有与PCV2特异性抗体反应的活性。PCV2衣壳蛋白片段与T4噬菌体SOC蛋白的融合表达后,表达量较高,并具有免疫活性,有望用于猪圆环病毒II型的诊断和预防。     

H9N2亚型AIV NS1基因的克隆及其在杆状病毒系统的表达

应用DNAStar软件,参照Genbank中注册的AIV H9亚型毒株NS1基因序列,设计了一对引物,用RT-PCR方法成功地扩增出带双酶切位点的H9亚型AIV的NS1基因,通过BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切位点将NS1基因插入转移质粒载体pFastbacHTa中,获得重组转移载体pFastbacHTa-H9NS1并将其转化DH10Bac细胞,与Bacmid发生位点特异性转座作用,得到重组穿梭载体Bacmid-H9NS1,再将其转染昆虫细胞sf9,PCR鉴定证实该基因正确地插入到病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下游,经过SDS-PAGE和WesternBlot检测,H9 NS1基因在sf9细胞中得到了表达,H9 NS1大小约为28kD,而且表达的产物具有特异免疫学反应性。     

猪圆环病毒2型在转管微载体培养PK-15细胞中增殖动态

为提高猪圆环病毒2型(PCV2)的增殖规模及单位体积内的病毒滴度,本研究利用转管微型反应器,采用荧光定量PCR检测方法,对PCV2在PK-15细胞中复制特性和增殖动态进行了系统研究。结果显示,转管(内置0.6 g纸片载体)中接种约2.98×107个DF-1细胞,培养7 d细胞增至1.93×108~2.0×108个,并确定培养7 d时为最佳接毒时间;病毒的最佳接种剂量为120.8 MOI,最佳收毒时间为接毒后的100 h,可达5.53E+06以上。细胞数增长与糖耗间呈明显平行关系,在细胞生长期内(168 h)平均每个细胞耗糖量为3.09×10-8g/24 h,可以根据糖耗量的多少推测细胞生长状态和数量。相同培养液中利用转管微型反应器培养PK-15细胞生产PCV2最终获得的病毒液毒价比转瓶培养毒价提高1.65倍。本实验为PCV2在生物反应器中大规模培养提供了参考依据。     

河南鸡群马立克氏病病毒流行毒株的分子进化分析

为了解鸡马立克氏病病毒流行毒株的分子特征,对2012-2014年河南省发病鸡群的临床病料进行了采集,并对MDV 132 bp重复序列进行了PCR扩增,同时对meq、g E、g I基因进行了克隆和序列测定。结果表明,9份病料中均可扩增出与132 bp双拷贝大小相符的PCR主产物;meq、g E、g I基因的核苷酸序列同源性与国内外参考毒株相比,分别为98.5%~100%,98.8%~100%和98.0%~100%;基于这些基因构建的系统发生树的分析结果表明,与美国、澳大利亚、日本以及印度的MDV分离株相比,目前,河南省鸡群中流行的MDV与此前分离的河南流行株进化关系较近,并且与其他国内分离株共同形成一个较大的独立进化分支。     

施用生物菌肥对桃园土壤养分及微生物功能多样性的影响

以不同施肥处理下的桃园土壤为试验材料，设置不同梯度的生物菌肥 T1（200 kg·667m^-2）、T2（300 kg·667m^-2）、T3（500 kg·667m^-2）及T4（1 000 kg·667m_-2）4个处理，以鸡粪为 CK（2 000 kg·667m^-2），研究生物菌肥对桃园土壤养分及微生物功能多样性的影响。结果表明：随生物菌肥施用量的增加，桃园土壤pH值、有机质、铵态氮、速效钾、有效磷含量、微生物单孔颜色平均变化率(AWCD)、微生物多样性指数及微生物对六类碳源的利用强度先增加后降低，硝态氮含量下降。生物菌肥200 kg·667m^-2处理下，0~20 cm土层有效磷含量较CK提高53.98%（P＜0.05），而与生物菌肥300 kg·667m^-2处理差异不显著。生物菌肥300 kg·667m^-2处理下，土壤微生物对羧酸类化合物利用强度最高，较CK提高22.67%(P＜0.05)。生物菌肥300 kg·667m^-2处理下20~40 cm土层的土壤有效磷、速效钾含量、微生物多样性指数（Simpson 优势度指数）及微生物对碳水化合物利用强度较CK分别提高33.49%、129.61%、0.22%和18.06%（P＜0.05）。冗余分析表明，土壤微生物对氨基酸化合物利用强度与有机质显著正相关，相关系数为0.68。主成分分析中，生物菌肥300 kg·667m^-2处理对土壤微生物多样性指数、碳源利用强度及土壤养分影响得分最高，分别为2.42和1.36。因此，生物菌肥能够提高土壤微生物活性、功能多样性、微生物对碳源的利用强度及养分含量，其中以生物菌肥300 kg·667m^-2处理效果最佳。     

禽流感病毒的宿主特异性和致病性分子基础

禽流感病毒可感染许多鸟类和哺乳动物．但是其自然宿主范围通常限于野生水禽，如野鸭、海鸥等。近年来出现新的特征．可以感染人类、猫、虎等动物，突破了宿主限制性，出现种间传播。这与其宿主特异性变化和致病力变异有关。为此，依据禽流感病毒的致病特性、抗原蛋白（血凝素蛋白HA）特性和宿主细胞受体特点，结合其它影响因素，阐述了流感病毒的宿主特异性和致病性分子基础．以进一步认识禽流感病毒。