鉴别高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

据GenBank登录的高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（highly and lowly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP/LP-PRRSV）的非结构蛋白2（Nsp2）基因序列设计特异性引物和TaqMan MGB荧光探针,经优化反应条件,建立鉴别HP/LP-PRRSV二重TaqMan MGB实时荧光定量RT-PCR（Real-time fluorescent quantitative RT-PCR）检测方法;对该二重实时荧光定量RT-PCR方法进行了敏感性、特异性和重复性试验;对疑似PRRSV感染临床样品进行了应用检测,同时与建立的HP/LP-PRRSV二重RT-PCR方法进行了对比试验。结果显示,成功建立了鉴别HP/LP-PRRSV的二重实时荧光定量RT-PCR检测方法,HP/LP-PRRSV标准曲线的循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数分别为0.998和0.997;该方法灵敏度可达10¹拷贝/μL;特异性高,对HP/LP-PRRSV阳性对照扩增呈阳性反应,而对5个对照病原均呈阴性反应;不同浓度的HP/LP-PRRSV重组质粒分别重复扩增3次,重复结果良好;对25份临床疑似PRRSV感染样品进行了应用检测,阳性检出率为92%,较普通二重RT-PCR方法阳性检出率高。     

鸡传染性喉气管炎病毒河南株gB基因真核表达载体的构建及表达

根据已发表的传染性喉气管炎病毒(ILTV)gB基因序列,设计并合成1对引物,以河南分离株(ILTV-HN)接种10日龄鸡胚,从含痘斑的绒毛尿囊膜中提取基因组DNA扩增gB基因,将扩增片段克隆入pGEM-T Easy载体后,经蓝白斑筛选,菌液PCR和酶切鉴定为阳性的重组菌进行测序,结果表明克隆到ILTV-HN株gB基因,全长为2 629 bp,包含一个完整的开放阅读框.然后将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建真核表达载体pcDNA3.1-gB,转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过RT-PCR检测,转染细胞中含gB基因的mRNA,间接免疫荧光检测,结果表明gB基因在CEF细胞中进行了瞬时表达.     

猪圆环病毒研究进展

PCV2可严重导致猪群产生免疫抑制,从而容易继发和并发其它传染病的发生;也可加重其它传染病的临床表现和病理过程,PCV感染可能干扰正常的免疫功能。猪圆环病毒属于单股DNA圆环病毒科,该科的共同特征为20面体对称,无囊膜,核酸为负链,是单股环状DNA,是迄今为止发现的最小的动物病毒。其中PCV1基因组大小为1759bp,包含7个阅读框;PCV2基因组大小为1767～1768bp,包含11个阅读框;目前诊断PCV的方法大致可分为两类:一类为血清学方法,另一类为病原学方法,本病尚无疫苗可用,目前主要采取综合防制措施对本病的防控。     

果树修剪技术要点及病虫害防治方式分析

我国在现代化的农业发展过程中,果树修剪及病虫害防治,成为了重点关注对象。从客观的角度来分析,该方面的工作落实,必须在细节上良好的转变,而且多方面的工作部署、落实,应随着时代的转变来良好的调整,固步自封的手段和方法,并不能按照预期设想来完成,而且产生的潜在性疏漏非常突出。针对果树修剪及病虫害防治展开讨论,并提出合理化建议。     

鲜食和加工兼用型甘薯新品种浙薯259 的选育

浙薯259 是从以浙薯81（浙73 半2× 花G-2）为母本，开放授粉的杂交后代中选育的甘薯新品种。薯块长纺锤形，
红皮淡橘红肉。薯块平均烘干率25.45%。每667 m² 鲜薯产量2 700 kg 左右，可作鲜食和加工，适宜在浙江、江苏南部、江西、
四川、重庆、湖南、湖北等地区种植，不宜在有茎线虫病的地块种植。     

石榴叶提取物的抑菌杀虫活性

以75%乙醇为溶剂,采用索氏提取法提取石榴(Punica granatun L.)叶的有效成分,并对该提取物的抑菌作用进行了测定。结果表明,石榴叶提取物对白色葡萄球菌抑菌活性明显,对黑腹果蝇成虫有明显的毒害作用,且毒性效果与浓度呈正相关。石榴叶提取物对槐蚜防治效果明显,当石榴叶提取物浓度为60 mg/mL时,24 h后槐蚜校正死亡率达96.72%。石榴叶提取物具有广谱抑菌杀虫活性。     

乐山好水,美景美村——张家口水母宫风景名胜区重点景区规划方案

本文通过对张家口水母宫风景名胜区现状及周边环境的分析,提出水母宫景区的功能定位和发展目标,布局水母宫景区重点建设项目,同时对景区周边永丰堡村提出环境整治和产业发展建议,探索景区建设与村庄发展共荣的途径。     

淮南猪IL-2全基因的克隆与遗传进化分析

参照GenBank发表的猪IL-2cDNA基因序列,设计l对引物,将河南地方品种淮南猪脾淋巴细胞在伴刀豆球蛋白A(Con A)的刺激下体外培养27 h后,提取激活淋巴细胞总RNA,进行反转录.聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,克隆到pGEM-T Easy载体上并测序.测序结果显示,克隆的HuainanPIL-2 eDNA全长为516 bp,开放阅读框(ORF)包含465bp,编码154个氨基酸,分子量为17.4 kDa,等电点为5.27,疏水氨基酸38.3%,亲水氨基酸42.O%.碱件氨基酸11%,酸性氨基酸23%.此cDNA与已报道的猪IL-2同源性为100%,与猫、牛、鸡、狗、鸭、山羊、马、人、家鼠等的IL-2基因进行比较分析,核苷酸同源性分别为83.7%,82.6%,28.2%.80.6%,29.6%,83.4%,81.3%.82.O%,61.5%.     

一例鸡传染性喉气管炎的诊治

2006年9月,登封市某鸡场发生了一种以呼吸困难、咳出血性渗出物为特征的疾病,用针对鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)gX基因的特异引物,经PCR检测鸡传染性喉气管炎病毒阳性,结合病史和临床症状及病毒分离,诊断为鸡传染性喉气管炎。对该鸡场采取了综合防制措施,取得了较好的效果。     

应用PCR检测鸡传染性喉气管炎病毒

根据传染性喉气管炎病毒(ILTV)TK基因序列，设计、合成1对引物，应用PCR技术对ILTV以色列疫苗株、河南分离株（ILTV-CG和ILTV-XY）进行PCR扩增，均能扩增出预期大小的目的片段，测序分析和酶切分析证实了PCR产物的特异性，而对其它禽病原体的扩增均为阴性。PCR检测ILTV DNA的最小检测量为21 pg。应用PCR检测人工接种后不同〖JP2〗天数采集的鸡的结膜拭子，接种后第2~5 d均能检测到ILTV。该方法可用于鸡传染性喉气管炎病的诊断和临诊样品检测。