斗鸡新城疫病毒的分离与生物学特性鉴定

从病死的越南斗鸡脑组织中分离到l株病毒,能凝集鸡的红细胞,而且这种凝集能被新城疫阳性血清特异性抑制。通过对分离株进行RT—PCR检测、动物致病性试验、MDT与ICPI值测定,证实为中等偏强毒力新城疫病毒。动物感染试验表明,20日龄非免疫鸡感染分离毒后24～120h可用RT—PCR方法从喉头和泄殖腔检出新城疫病毒。     

新城疫血凝抑制浓缩抗原的研制与应用

采用甲醛对新城疫LaSota株病毒进行灭活,利用蔗糖透析法进行浓缩,抗原效价由浓缩前的log26上升至浓缩后的log210,在浓缩液中加入25％的丙三醇制成了新城疫血凝抑制抗原.同时对加入稳定剂——丙三醇的自制抗原进行了定质研究.结果表明：加丙三醇自制抗原,温度越低时稳定性越好、保存期最长.将自制抗原、标准抗原与标准血清、待检血清进行血凝抑制试验对比,表明自制抗原准确性、重复性较好,可用于临床监测.     

禽源产色葡萄球菌的分离鉴定及其耐药性分析

为了解禽源产色葡萄球菌的耐药性，本研究从发病金陵花鸡中分离到1株产色葡萄球菌GZQX2019，并进行细菌分离培养、革兰氏染色镜检、生化试验、16S rDNA序列分析、药敏试验、部分耐药与肠毒素基因检测和动物回归试验。结果显示，分离菌在鲜血琼脂培养基上长出表面凸起、边缘整齐的溶血现象白色菌落；革兰氏染色镜检呈葡萄串状球菌。生化试验结果显示，分离菌蔗糖、精氨酸水解酶、木糖等反应阳性，尿素、木糖醇、麦芽糖等反应阴性。系统进化树显示，分离菌与产色葡萄球菌处于同一分支；药敏试验结果显示，分离菌对红霉素、头孢他啶、多西环素等6种抗菌药耐药，对头孢呋辛、头孢哌酮、新霉素等11种抗菌药敏感。耐药与肠毒素基因检测结果显示，分离菌能检测出热敏感细胞肠毒素基因Alt，耐大环内酯类基因ermB，β-内酰胺类基因VIM、TEM，四环素类基因tetB。动物回归试验结果显示，分离菌对小鼠和雏鸡致病能力不强或者没有致病力。试验成功分离到1株禽源产色葡萄球菌，丰富了禽源产色葡萄球菌的认知。     

禽白血病病毒贵州流行株env基因克隆与序列分析

为了解禽白血病病毒(ALV)贵州流行株的遗传变异情况及分子特征,本试验基于ALV env基因设计合成引物对禽白血病贵州临床病例进行目的基因扩增、克隆和序列分析。结果显示,从临床病例中筛选获得3份阳性样本,PCR扩增均获得大小约921 bp的目的基因片段,将其命名为:GZ-ALV-1株、GZ-ALV-2株和GZ-ALV-3株。序列分析结果显示,3株ALV贵州流行株之间核苷酸同源性在97.2%～97.6%之间,与国内外ALV-J的同源性相对较高,为93.1%～99.3%;而与A、B、C、D、E、K亚群ALV同源性仅为51.4%～53.2%。系统进化分析显示,3株ALV贵州流行株与ALV-J亚群参考株处于同一分支,表明本试验所检测的ALV毒株均为ALV-J亚群;与A、B、C、D、E、K亚群处于不同进化分支。基因变异分析显示,3株流行株37处相同核苷酸变异导致17处氨基酸发生位点变异,其中9个可变点在高变区hr1和hr2,1个可变点在低变区vr3。结果表明,3株ALV贵州流行株均为ALV-J亚群,env基因存在位点发生了变异,且可变位点位于序列高变区。本研究结果为明确贵州禽白血病流行概况及ALV的防控与净化提供基础数据。     

复合益生菌对早期断奶仔猪生长性能和免疫水平的影响

为研究酿酒酵母菌和枯草芽孢杆菌组成的复合益生菌对早期断奶仔猪免疫水平的影响,试验选取(杜×长×大)三元杂交断奶仔猪80头,分为试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及对照组,每组20头,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组在基础日粮中分别添加0.10%、0.20%、0.30%复合益生菌,对照组饲喂基础日粮,以期评价其生长性能、血液生化、血清细胞因子和肠道黏膜分泌性球蛋白A(SIgA)水平。结果表明,试验Ⅱ、Ⅲ组末重极显著高于试验Ⅰ组和对照组(P0.01);试验Ⅲ组平均日增重极显著高于试验Ⅰ、Ⅱ组及对照组(P0.01),试验Ⅲ组平均日采食量显著高于试验Ⅰ、Ⅱ组及对照组(P0.05),对照组、试验Ⅱ组腹泻率均极显著高于试验Ⅰ、Ⅲ组(P0.01);试验组中的乳酸脱氢酶(LDH)、谷丙转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)含量均高于对照组,总蛋白(TP)含量低于对照组,差异均不显著(P0.05);试验组中尿素氮(BUN)含量均显著高于对照组(P0.05),试验Ⅱ、Ⅲ组谷草转氨酶(AST)含量显著高于试验Ⅰ组和对照组(P0.05)。试验0d,试验组白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平与对照组相比差异不显著(P0.05);试验20d,试验Ⅱ、Ⅲ组中IL-6水平极显著高于试验Ⅰ组及对照组(P0.01),IL-1β和TNF-α水平与对照组相比差异不显著(P0.05);试验40d,试验组IL-1β水平均高于对照组(P0.05),IL-6和TNF-α水平均极显著高于对照组(P0.01)。试验组中空肠黏膜SIgA水平极显著高于对照组(P0.01);十二指肠和回肠黏膜SIgA水平均显著高于对照组(P0.05),盲肠黏膜SIgA水平低于对照组,差异不显著(P0.05)。说明不同含量酿酒酵母菌-枯草芽孢杆菌复合益生菌均可有效提高断奶仔猪的生长性能,缓解早期断奶仔猪应激反应,增强断奶仔猪的免疫功能。     

J亚群禽白血病病毒与粪肠球菌混合感染的诊断及相关基因分析

为了解贵阳市某养殖场J亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)gp85基因的变异情况及粪肠球菌(Enterococcus faecalis,EF)毒力基因的携带情况,本研究对该养殖场ALV与粪肠球菌混合感染的病例展开了病原学调查分析,采集病料进行病毒核酸检测、gp85基因克隆测序分析、核苷酸序列相似性分析、细菌分离鉴定、毒力基因检测等。结果显示,成功克隆出ALV gp85基因并分离鉴定出1株粪肠球菌,分别命名为GZM52021株和GZEF2021株。ALV核酸检测仅在约422 bp处出现特异性扩增条带,说明存在ALV-J感染;成功克隆ALV gp85基因,且GZM52021株与J亚群参考毒株gp85基因(GenBank登录号为KM655820、KF796654、JN378888和Z46390)的相似性较高,在97.9%~98.2%之间;gp85基因核苷酸序列遗传进化树构建结果与相似性结果一致。GZEF2021株在LB 固体平板上长出圆形凸起、不透明的乳白色菌落,在鲜血琼脂平板上有明显的溶血现象,革兰氏染色镜检为球形或卵圆形阳性链状球菌;16S rRNA测序结果显示,GZEF2021株与粪肠球菌(GenBank登录号为KJ626240、MT611693、KY399248、MH919370、MN379663和KU937389)的相似性均在99%以上;药敏试验结果显示,GZEF2021株对头孢哌酮、青霉素、哌拉西林和羧苄西林4种药物敏感,对复方新诺明、头孢拉定、头孢唑啉3种药物中度敏感,对新霉素、丁胺卡那、多西环素和米诺环素4种药物耐药;毒力基因检测显示,GZEF2021株携带有ace、gelE、asa1、EF3314和efaA 5个毒力基因,说明从鸡中分离出的粪肠球菌可能具有一定的致病性。该病死鸡存在J亚群ALV与粪肠球菌共同感染的情况,本试验结果可为了解J亚群ALV和粪肠球菌在贵州的流行趋势及其混合感染的诊治提供一定的参考资料。     

对鸡、驼鸟新城疫毒株毒力与血凝素的测定

两株新城疫（ND）病毒分别分离自发病鸡群与鸵鸟群，本实验室对两株病毒的最小致死量致死鸡胚的平均死亡时间（MDT）、3日龄雏鸡脑内接种指数、6周龄鸡静脉接指数（IVPI）、血凝解脱速率和血凝素热稳定性进行了测定。结果表明，源于发病鸡群的分离物是一株中发型的ND病毒，属快速解脱型，血凝素对热的抵抗力较强；而源于鸵鸟的分离物是一株缓发型的ND病毒，属慢速解脱型，血凝素对热的抵抗力较差。本文还对新城疫病毒的毒力与血凝解脱速率和血凝素热稳定性的关系进行了讨论。     

免疫压力下猪繁殖与呼吸综合征病毒的变异

为了解连续免疫压力下猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的变异规律,以及为猪繁殖与呼吸综合征病的防控提供科学依据,以贵州分离株 PRRSV AS 为研究对象,监测分析了 PRRSV 接种免疫猪群后其主要基因变异情况。结果表明：1）接种 PRRSV 后,免疫猪只未发生死亡现象,但出现轻微的临床表现和病理变化,且能在病变组织中分离到 PRRSV,并扩增出与预期大小相一致的 Nsp2和 GP5基因条带;2）对Nsp2基因,两次分离物 PRRSV AS-a、PRRSV AS-b 与原始病毒 PRRSV AS 的遗传距离相应为0．018和0．064,呈加速渐远趋势;PRRSV AS-a 发生16处点突变,其中9处为非同义突变,7处为同义突变;PRRSV AS-b 发生25处点突变,其中非同义突变12处,同义突变13处;从 PRRSV AS 向 PRRSV AS-a 到PRRSV AS-b 演变过程中,Nsp2基因编码蛋白第285～293位抗原指数发生不同程度改变,且演变趋势呈正向选择作用;3）对 GP5基因,两次分离物 PRRSV AS-a、PRRSV AS-b 与原始病毒 PRRSV AS 的遗传距离相应为0．004和0．015,变异趋势不明显;PRRSV AS-a 发生2处点突变,非同义突变和同义突变各1处;PRRSV AS-b 发生3处点突变,其中非同义突变2处,同义突变1处;从 PRRSV AS 向 PRRSV AS-a 到PRRSV AS-b 演变过程中,GP5基因编码蛋白重要抗原表位未发生改变,但其演变呈正向选择作用。说明,在连续免疫压力下 PRRSV 容易发生变异。     

不同药物对犬蠕形螨的临床作用效果研究

犬蠕形螨病又称犬毛囊虫病或犬脂螨病,是由蠕形螨寄生于犬皮脂腺或毛囊而引起的一种常见、顽固的皮肤病,多发生于3-6月龄幼犬,大量蠕形螨寄生时,可导致全身皮肤感染,被毛脱落,脓疱破溃后形成溃疡,并继发细菌感染,出现全身症状,重者可导致死亡[1]。由于该病常继发细菌、真菌感染,引起更为严重的皮肤病,所以对其研究具有十分重要的临床意义。