大鼠肝酪蛋白激酶Ⅱ的分离纯化和鉴定

依次采用ＤＥＡＥ－纤维素、肝素－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，酪蛋白－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和羟基磷灰石层析将大鼠酪蛋白激酶Ⅱ纯化了２４８６倍，回收率９．５％。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明ＣＫⅡ由三个不同亚基组成，分子量分别是３７，３５和２６ＫＤ。该激酶利用酪蛋白为底物，Ｃａ~（２＋），Ｃａ~（２＋）－磷脂酰丝氨酸和ｃＡＭＰ对ＣＫⅡ的活性无影响，而肝素对该酶的活性有抑制作用。     

CM52纤维素柱层析法分离纯化多磷酸肌醇磷脂

本文报道一种简单、得率较高、有较大实用价值的CM_(52)纤维素柱层析分离纯化多磷酸肌醇磷脂的方法。该法可从每克牛脑(湿重)中分得磷脂酰肌醇-4-单磷酸0.2mg,磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸1.2mg。     

重组人磷脂酰肌醇3-激酶p110β催化亚基的原核表达

目的：表达人磷脂酰肌醇3－激酶p110β催化亚基。方法：将构建有人磷脂酰肌醇3－激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3-K)p110β催化亚基cDNA的重组质粒，转化大肠杆菌BL21（DE3），用IPTG进行诱导表达。用磷脂酰肌醇－4、5－二磷酸、[γ-^32P]ATP与重组PI 3－K p110β催化亚基一起保温的方法测定PI 3－K的活性；^32P标记的磷脂用氯仿和甲醇抽提、板薄层层析和放射自显影来分析。结果：SDS－PAGE显示表达出－110kD的新蛋白质分子，重组蛋白占菌体总蛋白的比例为15％，大多数重组蛋白以可溶性形成存在。wortmannin是PI3－K特异的抑制剂，wortmannin对重组PI 3－K p110β亚基有抑制作用，这种抑制作用呈剂量依赖关系（2.5-20nmol/L)。结论：重组蛋白是有活性的人PI3－Kp110β催化亚基。     

酵母中磷脂酰肌醇的分离纯化

本文报告一种用微晶纤维素柱层析法,分离纯化磷脂酰肌醇的方法:用氯仿:甲醇(10:1,V/V)混合液     

半边旗抗肿瘤有效成分6F对HL-60细胞的 DNA、RNA及蛋白质生物合成的抑制作用

目的：从DNA、RNA及蛋白质生物合成的角度探讨半边旗有效成分6F抗肿瘤的作用机理。方法：用台盼蓝拒染法测定细胞成活率；[^3H]—TdR，[^3H]—UTP和[^3H]—Leu参入法分别测定细胞DNA、RNA及蛋白质生物合成的水平。结果：6F对HL—60细胞生长有强烈的抑制作用，且具明显的时间和剂量效应关系。6F明显抑制HL—60细胞DNA、RNA及蛋白质生物合成，呈剂量依赖关系。6F对蛋白质合成的抑制作用最强。结论：6F对HL—60细胞生长有强烈的抑制作用，抑制细胞DNA、RNA，特别是蛋白质的生物合成是6F抗肿瘤作用的可能机制之一。     

小鼠蛋白激酶CK2β亚基cDNA的克隆与序列分析

目的：构建小鼠蛋白激酶CK2β亚基cDNA重组表达质粒，以便深入进行CK2结构与功能的研究。方法：通过反转录PCR从NIH3T3小鼠成纤维细胞中获得小鼠蛋白激酶CK2β亚基编码区cDNA，PCR扩增酶为高保真DNA聚合酶。将NdeⅠ/HindⅢ彻底双酶切PCR产物定向连接到牛小肠碱性磷酸酶去5′端磷酸的同样彻底NdeⅠ/HindⅢ双酶切的表达载体pT7—7中，转化感受态大肠杆菌DH5α获得转化子，用0．8％琼脂糖凝胶电泳初步筛选转化予，将阳性克隆进行单和双酶切分析鉴定。随机挑选两个阳性克隆进行DNA测序。结果：转化子的阳性筛选率为100％，限制性酶切分析结果表明插入片段和重组质拉的大小与理论推测值相符。DNA测序结果表明：两个重组小鼠CK2β亚基克隆中的插入片段序列均与两种已报道的小鼠CK2β亚基cDNA编码区序列分别存在一个碱基差异，但我们报道的这2个差异碱基与大鼠、兔、猪和人CK2β亚基cDNA的编码区相应碱基序列一致。结论：本实验克隆的小鼠蛋白温酶CK2β亚基cDNA编码区序列可能是正确的序列。     

半边旗有效成分5F的研究现状

该文以近年来国内外的文献为依据,从提取分离纯化、药理作用及作用机制方面综述了半边旗提取物5F的研究现状。     

田七总皂苷对兔全血血小板聚集的影响

目的观察田七总皂苷对凝血酶或ADP诱导的兔全血血小板聚集的影响。方法兔全血与田七总皂苷孵育5min,然后用凝血酶或ADP作用1min,用全血血小板聚集仪观察兔全血血小板聚集情况。结果田七总皂苷50、100和200μmol/L作用兔血小板后,用凝血酶诱导时对血小板聚集的抑制率分别为39%、60%和61%;用ADP诱导时抑制率分别为65%、79%和60%。结论田七总皂甙对凝血酶和ADP诱导的兔全血血小子板聚集都有抑制作用。     

纯化半边旗抗肿瘤有效成分5F的新方法

目的：寻找分离纯化半边旗抗肿瘤有效成分5F的新方法。方法：提取分离出5F精提物后,以H40型硅胶为填料,采用不同的溶剂系统石油醚和丙酮的混合液,氯仿和甲醇的混合液洗脱,分离纯化5F。结果：经薄层色谱鉴定,可以得到纯的5F。结论：分别采用两种不同的溶剂系统洗脱硅胶柱,可以有效地纯化半边旗抗肿瘤有效成分5F。