副猪嗜血杆菌lpxM基因缺失株构建及生物学特性分析

【目的】研究副猪嗜血杆菌脂寡糖合成相关基因lpxM对其生长、生物被膜形成能力、抗50%猪血清杀菌能力、对巨噬细胞毒力和抗生素敏感性部分生物特性的影响,为揭示HPS致病机制,lpxM基因缺失疫苗的构建奠定理论基础,为猪场防治HPS进行药物选择时提供依据。【方法】以高致病性血清5型HPS地方分离株H45为研究对象,自杀性质粒PK18mobsacB为载体,通过自然转化法将构建好的重组质粒转进H45,使其在抗生素的压力下发生同源重组,最终经过抗生素筛选并通过PCR和测序验证得到lpxM基因缺失株H45-△lpxM,比较两者之间部分生物学特性的差异。测定两者的OD₆₀₀-t关系曲线比较生长情况;用结晶紫染色法比较两者在培养24h后生物被膜形成的能力;测定两者在50%猪血清中存活率,比较两者的抗血清补体杀菌能力;将两者同时刺激小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞,作用时间为6、12和24h,检测细胞培养上清液中LDH的释放量,比较两者对巨噬细胞毒力影响;利用K-B 纸片扩散法研究两者对氨苄西林等临床上常用13种抗生素和多粘菌素B抗生素敏感性,通过测定抑菌圈直径来并参照耐药标准判断对抗生素的敏感性。【结果】成功构建lpxM基因缺失株H45-△lpxM,生长情况比较发现菌株生长前期缺失株慢于野生株,8h后保持一致,结果表明lpxM基因缺失能在一定程度上抑制H45的生长;两者均能形成生物被膜,但是缺失株弱于野生株;野生菌株在50%猪血清中存活率为16.1%,而缺失株只有0.71%,缺失株明显低于野生菌株;两者均能引起巨噬细胞的死亡,作用6、12和24h后,野生株对细胞的致死率分别为6.63%、10.86%和22.17%,而缺失株对细胞的致死率为2.62%、6.35%和18.01%,结果表明随着作用时间的延长,两者对细胞的毒力作用越来越大,具有一定的时间依赖性,在各个时间点,缺失株的毒力作用均低于野生株;抗生素敏感性结果发现,两者对头孢噻吩等10种抗生素均表现敏感,对恩诺沙星均表现抗性,但对阿莫西林克拉维酸、磺胺二甲异噁唑和氨苄西林三种抗生素的耐药性发生了较大的差异,阿莫西林克拉维酸和磺胺二甲异噁唑两种抗生素由耐药变成了敏感,氨苄西林也从中介变成敏感,结果表明lpxM基因缺失对H45抗生素敏感性具有一定影响。【结论】lpxM基因缺失能一定程度地抑制HPS生长,降低其生物被膜形成能力、抗血清杀菌能力和对巨噬细胞的毒力作用,增大对临床上多数常用抗生素的敏感性,揭示lpxM基因可能是HPS毒力基因,与HPS的致病能力密切有关,但具体机制还需要进一步研究。     

牛粪不同堆肥处理对观赏向日葵生长发育的影响

以新鲜牛粪为原料,利用不同的工艺技术进行堆肥处理后,作为基肥应用于观赏向日葵,检测牛粪堆制有机肥对观赏向日葵生长发育的影响。结果表明:牛粪堆制的有机肥与相当养分含量的化肥相比,更能促进观赏向日葵生长和开花;牛粪堆制有机肥的工艺技术影响有机肥肥效的发挥,其中牛粪初始秸秆添加量为7.5%,通气10 min,物料初始含水量60%,接种自制菌剂的处理7与牛粪初始秸秆添加量5%,通气30 min,物料初始含水量50%,接种自制菌剂的处理6效果最好,可以达到既能解决牛粪污染,又能创造优质肥料的目的。     

副猪嗜血杆菌hhdB基因的鉴定和分析

为了明确副猪嗜血杆菌致病菌株的毒力相关因子,从广东省不同地区发病猪场送检病猪中分离到9株细菌(H1~H9),并对其hhdB基因进行了鉴定和分析。结果显示,所分离的9株细菌经形态观察、生化特性鉴定和PCR鉴定为副猪嗜血杆菌阳性,并具有卫星现象和不溶血特征。用hhdB基因引物从分离菌株中扩增到了特异性片段,序列分析表明,所获得的hhdB基因序列与GenBank中副猪嗜血杆菌SH0165的hhdB基因同源性为99%,分离菌株hh-dB基因之间序列同源性为97.5%~99.8%,推导的氨基酸序列与少数放线杆菌、杜克雷嗜血杆菌的溶血素激活蛋白具有一定的相似性。RT-PCR扩增到了hhdB基因的目的条带,表明该基因在分离菌株中得到了相应的表达。这将为副猪嗜血杆菌致病菌株毒力特征基因的鉴定以及副猪嗜血杆菌致病机理的研究奠定基础。     

A级绿色食品玉米栽培技术

1.A级绿色食品定义A级绿色食品是指在生态环境质量符合规定标准的产地,生产过程中允许限量使用限定的化学合成生产资料,按特定的生产技术操作规程生产、加工,产品质量及包装经检测、检验符合特定标准,并经专门机构认定,许可使用A级绿     

乡镇兽医站动物防疫工作的几点体会

我国经济体制不断改革发展推动下,国民经济发展较快,居民生活水平较以往有明显的改变,乡镇经济也处于不断增长中,养殖业作为乡镇经济的主要内容,在乡镇经济份额中占据较大比例,又加之乡镇养殖户较为分散、养殖区域较大,使得兽医站工作受到人们广泛关注,乡镇兽医站动物防疫工作顺利开展成为乡镇兽医站发展中所必须重视的问题.文章就乡镇兽医站动物防疫工作体会做简要分析.     

大豆产业链利益共享机制设想与实践

大豆产业在中国是一个相对特殊的产业,无论从开放程度还是产业链本身,都存在着诸多问题。目前,在大豆生产实践中,存在着企业需求与原料供给不能衔接、企业产品与消费者需求难以对接、产业链整体竞争力不强等问题。大豆联盟在大豆生产、加工与流动等环节整合了现有科技资源,在自主研发、项目运作及农户培训等领域,提供了技术支持与跟踪服务,这对于提升整个大豆产业核心竞争力具有重要意义。在研究利益共享机制的基础上,针对联盟运行中出现的问题,提出了进一步发展的思路与建议。     

表达序列标签(EST)及其在抗孢囊线虫大豆研究中的应用

表达序列标签(expressed sequence tags,EST)是一种快捷、高效地揭示基因组信息的方法.本文对EST概念、技术原理及其在基因组研究中的应用和进展等方面内容进行了综述,并对EST在大豆基因组研究和抗孢囊线虫大豆研究中的应用进展作一介绍.     

广东省花生青枯病病原的分离和遗传多样性鉴定

为了解广东省花生青枯病病原菌的遗传多样性,对广东省主栽花生品种近年来发生青枯病的病株进行病原菌分离,共获得64株分离菌株,其中31株为青枯菌（Ralstonia solanacearum）．遗传多样性分析,发现31株青枯菌菌株均为演化型I型．随机挑取不同分离地点的花生青枯菌菌株进行致病力测定,发现来自不同地区的青枯菌致病力有所不同,其中来自湛江市的ZKRS126菌株致病力明显具有材料特异性,对花生A300致病力强而对花生A281致病力弱．此外,进化树分析的亲缘关系较近菌株致病力也有明显差异,近缘菌株ZKRS126与ZKRS206对花生A300的致病力具有显著性差异．本研究不仅有助于广东省花生青枯病的防治与研究,而且为抗青枯病花生品种的选育和研究提供基础数据和依托材料．     

养殖业的新希望——长春市五棵树经开区玉米秸秆养牛纪实

在我国,肉牛的饲养,无论在当前,还是在长远,在促进国民经济的发展,农业产业格局的调整,人们膳食结构的稳定等方面,越来越凸显它的重要性。长春市五棵树经济开发区,采用生物活菌剂发酵高温膨化裂解玉米秸秆替代稻草饲喂肉牛,走出了一条与众不同的饲养之路。本文全面阐述了此项技术,以期为养殖业提供一项技术参考。     

贡嘎山国家级自然保护区昆虫（地上部分）初步调查

文章分析了贡嘎山国家级自然保护区地质、地貌、气候及植被概况,通过在保护区不同海拔高度布设样地,使用挂网、捕捉、灯光诱杀等方法对昆虫进行调查、鉴定和记录。