水曲柳结构域重新甲基化酶DRM基因片段的克隆及同源性分析

[目的]克隆并分析水曲柳结构域重新甲基化酶(DRM)基因片段。[方法]根据GenBank上已发表的DRM氨基酸序列,采取CODEHOP方法设计合成1对简并引物,采用RT-PCR技术对水曲柳DRM基因进行扩增,将PCR产物与pMD 18-T连接后转化至E.coli JM109感受态细胞,检测阳性克隆,测序并进行序列分析。[结果]克隆得到的DRM基因cDNA序列长802 bp,由267个氨基酸残基组成,命名为FmadrmA。序列比对表明FmadrmA与参考的12个物种的DRM在氨基酸水平上表现出较高的同源性,其与山葡萄、番茄、黄瓜、野草莓、大豆、苜蓿、玉米、烟草、拟南芥、毛果杨、水稻和乌拉尔图小麦的DRM同源性分别为61%、54%、51%、50%、60%、48%、43%、44%、37%、42%、42%和39%。系统进化树分析表明同源的DRM蛋白可大致聚为3类,而水曲柳与其他植物的亲缘关系较远。[结论]该试验成功获得了水曲柳FmadrmA基因片段,并对其进行了同源性分析,为进一步研究结构域重新甲基化酶基因及分析其表达特性奠定了基础。     

白桦嫩枝扦插繁殖技术的研究（Ⅰ）

通过白桦嫩枝扦插及移栽试验，对影响插穗生根的各种因素进行了研究，认为使用生根促进剂和枝条的幼化状态对生根率有显著影响。扦插苗的成活率在不同的移载之间存在显著差异。用伐根的当年生半木质木萌条扦插生根效果最好，平均生根率效果最好，平均生根率在７０％以上。移栽成活率为６２．５％。     

"基因工程"教学改革的思考

基因工程课程教学改革应从教学内容、手段和考核方式等方面入手,建立融入新知识、新观念的教学内容模式;充分运用多媒体和网络资源,改进教学方法等;科学安排实验内容,强化学生的动手能力和发挥学生的创造能力;采取多种考核方式,增强学生分析和解决问题的能力。     

富含多糖的白桦成熟叶片DNA的提取方法

采用常规SDS方法、改良SDS法、常规CTAB法、高盐CTAB法和改良的CTAB法对富含多糖的白桦成熟叶片DNA进行提取，并对得到的DNA进行电泳分析和含量测定，结果表明：改良的CTAB法所提取的DNA纯度高，质量较好，用限制性内切酶酶切后条带均一，证明该方法适于提取白桦成熟叶片的基因组DNA，能满足进一步分析的要求。     

钙离子在介导SA 诱导白桦悬浮细胞三萜合成途径中的作用

为探讨Ca 2 + 作为信号分子在水杨酸(SA)诱导白桦悬浮细胞三萜合成中的作用,本文用SA、Ca 2 + 及Ca 2 + 阻断 剂对白桦悬浮细胞进行处理,采用紫外分光光度法和高效液相色谱法测定细胞中总三萜及其组分的积累量;同时 利用荧光定量PCR 方法检测了白桦细胞中三萜合成途径关键酶基因(FPS、SS、SE、BPW、BPY、CAS)和钙调蛋白基 因表达变化。结果显示:水杨酸可诱导白桦悬浮细胞三萜物质(总三萜、齐墩果酸、白桦脂醇、白桦脂酸)的合成及 相关基因的上调表达,且Ca 2 + 的加入使得这种诱导效应更为显著,暗示白桦细胞中钙信号分子介导了水杨酸诱导 三萜物质的合成。而对SA 与各种Ca 2 + 阻断剂互作处理结果显示,Ca 2 + 抑制剂的加入抑制了SA 对细胞中三萜合 成的诱导效果,表明Ca 2 + 作为信号分子介导了SA 诱导白桦悬浮细胞三萜物质的合成。      

水曲柳雌雄株酚类物质和几种氧化酶活性的比较

水曲柳(Fraxinus mandshurica)是东北3大珍贵硬阔叶用材树种之一,雌雄异株.由于不同性别的植株在形态学、生物学特性以及经济价值等方面存在一定的差异,林业生产中常常希望根据经营目的与利用方向选择特定性别的植株,尤其在种子园营建及杂交育种中,必须明确区分雌雄株.而目前水曲柳的性别鉴定工作主要在开花期间进行,性成熟前无法鉴别植株性别,即使性成熟后,非花期也很难区分雌雄株.因此有必要应用现代生物学方法建立一套准确、简便的水曲柳成年树性别鉴定技术,为苗木性别早期鉴定奠定基础.     

绒毛白蜡成熟胚和茎段培养繁殖体系的建立

以绒毛白蜡成熟胚和茎段为外植体，研究了培养基、激素组合对繁殖系数和生长的影响，适合绒毛白蜡离体繁殖的培养基为WPM培养基，胚萌发率为100％，4—5天萌发成幼苗；最适分化培养基为MS＋BA4．0．6．0mg／L＋NAA2．0mg／L，分化率为39．29％，平均增殖系数为3．59；生根培养基为1／2MS＋IBA1．5mg／L，生根率达65．0％。     

不同白桦家系茎皮和枝皮中三萜含量的变异分析

为了确定三萜类物质含量高的家系,以来自小北湖的11个白桦家系为研究材料,采用高效液相色谱仪(HPLC)分析了白桦不同部位和家系中白桦酯醇、白桦酯酸和齐墩果酸这3种三萜类物质含量的变异情况。结果表明:白桦茎外皮和枝外皮中三萜类物质的种类和含量不同,茎外皮中三萜类物质的含量高于枝外皮,且从茎外皮中检测到的白桦酯酸在枝外皮中却未检测到。对株高和胸径这2个生长指标的分析结果表明,在所选生长较快的白桦家系中,家系2、3、5和10号的茎外皮中白桦三萜类物质的积累量较高,而家系2和5号的枝外皮中白桦三萜类物质的积累量较高。由此推知,植株的部位和家系对三萜类物质的种类和含量均有影响。     

白桦BpbHLH2和BpbHLH3基因克隆及表达模式

从白桦组织中克隆2个响应Me JA、SA信号诱导的bHLH家族基因,分别命名为BpbHLH2和BpbHLH3,并对其进行生物信息学及表达特性分析。结果表明:2个bHLH基因均具有完整的开放读码框(ORF),BpbHLH2基因ORF长1 050 bp,编码349个氨基酸,BpbHLH3基因ORF长1 044 bp,编码347个氨基酸。两个基因编码的氨基酸序列与胡桃(Juglans regia)bHLH家族蛋白(Gen Bank ID:XP_018817560.1)和(Gen Bank ID:XP_018813766.1)相似度最高,分别达71%和70%。2个基因均包含bHLH、E-box和N-box的保守序列。BpbHLH2、BpbHLH3基因在白桦的根、茎、叶中均有表达,且两个基因均在叶中的表达量最高,BpbHLH2、BpbHLH3分别在根和茎中的表达量较低。生物信息学分析显示,BpbHLH2、BpbHLH3为白桦bHLH家族中的新基因。     

水杨酸对白蜡属种间杂交子代悬浮细胞中香豆素类含量的影响

为了研究不同浓度水杨酸(SA)对白蜡属种间杂交子代悬浮细胞生长量及香豆素类物质产量的影响,从而建立以生产香豆素类物质为目的的白蜡属细胞悬浮培养技术。以白蜡种间杂交子代悬浮培养96 h的细胞为材料,分别添加不同质量浓度(25、50、100 mg/L)的SA处理8、24、48、72、96 h,进行细胞生长量、香豆素类化合物类含量测定。结果表明,施加信号分子SA能不同程度地促进香豆素及白蜡树精的含量和产量增加,其中以浓度100 mg/L的SA效果最明显,处理72 h后白蜡树精的含量及产量均达到最高,分别为0.5704 mg/g和0.2595 mg,相较于对照分别提高了114.59%和35.03%,香豆素的含量和产量的变化也有相同的趋势,均在处理72 h后达到最高,分别为0.2470 mg/g和0.1124 mg,相较于对照分别提高了112.39%和56.56%。适宜浓度的SA可促进白蜡属种间杂交子代悬浮细胞中香豆素类物质的积累。