兔脑炎原虫引起的脑组织细胞凋亡

为了调查兔脑炎原虫引起脑组织细胞的凋亡情况,本研究用特殊染色、TUNEL染色、凋亡蛋白免疫组化染色和Western blot,对40只家兔的脑组织进行了详细研究。结果表明,病兔的脑组织中均检出了肉芽肿和脑炎原虫。脑炎原虫所引起的脑细胞凋亡主要发生于脑血管的内皮细胞、星形胶质细胞、巨噬细胞和上皮样细胞,其次为病变所累及的神经细胞。用TUNEL的免疫酶-荧光染色和抗凋亡蛋白的免疫组化染色,凋亡细胞均呈强阳性反应,被染成棕褐色。对脑组织蛋白提取物进行Western blot检测,病兔脑组织中P~(53)、Bcl-2、Bax和c-Myc凋亡基因蛋白表达量明显高于对照兔,差异非常显著(P0.01)。结果表明,兔脑炎原虫在脑组织细胞内寄生时可以引起细胞凋亡。     

黄连素抑制猪流行性腹泻病毒复制和组装

通过Western blot、qRT-PCR、噬斑形成试验等方法检测细胞病变、病毒增殖水平、细胞中病毒蛋白水平与基因水平表达来探究黄连素是否具有抗猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)活性,并通过检测细胞凋亡相关的标志蛋白PARP1、caspase7以探究黄连素是否影响病毒引起的细胞凋亡。结果显示,黄连素明显抑制了PEDV在Vero细胞中引起的细胞病变,明显降低了细胞内与上清中的病毒粒子的产生。在后续研究中,发现黄连素抑制了PEDV的复制和组装阶段,对病毒的吸附、入胞、释放的过程并没有明显影响。另外,检测了细胞凋亡的标志蛋白PARP1和caspase7,发现黄连素下调了PARP1、caspase7的剪切,减弱了PEDV诱导的细胞凋亡。结果表明,黄连素具有抗PEDV活性,并抑制PEDV的复制与组装阶段,可作为一种针对PEDV感染的潜在抗病毒药物。     

鸡白痢沙门菌pagC缺失株的构建及菌蜕制备

为了开发具有鉴别诊断功能的鸡白痢沙门菌疫苗,通过λ-Red同源重组敲除鸡白痢沙门菌CVCC1800的pagC基因,成功获得ΔpagC菌株;合成细胞穿透肽(cell penetrating peptide,CPP)制备菌蜕并对处理条件进行了优化。结果显示:作用浓度为50μmol/L,ΔpagC菌液OD_(600 nm)=0.4左右时CPP灭活效果最好。本研究制备的基于ΔpagC鸡白痢沙门菌菌蜕,在保留抗原性的同时为鉴别诊断提供了靶点,为后续开发针对鸡白痢沙门菌的鉴别诊断菌蜕疫苗奠定了基础。     

哈萨克羊骨骼肌卫星细胞的分离培养及鉴定

为了建立可稳定传代的哈萨克羊骨骼肌卫星细胞培养体系,以90日龄的哈萨克羊胎羊后腿肌为试验材料,采用酶消化法(胶原酶与胰蛋白酶)对绵羊骨骼肌卫星细胞进行分离,差速贴壁法对细胞纯化;对得到的骨骼肌卫星细胞进行形态学鉴定;使用Pax7特异性标志蛋白进行免疫荧光鉴定。经过免疫荧光染色的Pax7基因的免疫阳性产物,呈明显的绿荧光,分布于细胞质中。本研究成功从哈萨克胎羊中分离出了具有良好增殖分化能力且便于传代的骨骼肌卫星细胞,为研究调控哈萨克羊肌肉生长发育的分子机制,为完善哈萨克羊肉品质的研究提供基础。     

蓝刺头多糖B对胰岛素抵抗L6骨骼肌细胞耗糖量及AMPK表达的影响

为了探究蓝刺头多糖B(ETPB)对棕榈酸(PA)诱导的胰岛素抵抗L6骨骼肌细胞耗糖量及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)表达的影响,体外培养大鼠L6成肌细胞,诱导分化为骨骼肌细胞并进行分化鉴定;采用CCK8法检测细胞存活率,筛选PA和ETPB的安全浓度;葡萄糖氧化酶法检测各组细胞耗糖量;实时荧光定量PCR法检测AMPK mRNA基因表达水平,Western blot法检测AMPK蛋白表达量。结果显示:PA诱导L6骨骼肌细胞发生胰岛素抵抗的最适造模浓度为0.4 mmol/L,ETPB的最大安全浓度为200 mg/mL;ETPB可显著提高胰岛素抵抗L6骨骼肌细胞耗糖量(P<0.05),上调AMPK mRNA表达水平,增加AMPK蛋白表达量。提示:ETPB可以通过提高AMPK基因及蛋白表达而促进胰岛素抵抗L6骨骼肌细胞耗糖,这可能是ETPB改善骨骼肌胰岛素抵抗的作用机制之一。     

狂犬病病毒HEP-Flury M基因重排后在小鼠神经母细胞瘤细胞中的表型分析

【目的】探究狂犬病病毒HEP-Flury M基因重排对基因转录和蛋白表达的影响,揭示病毒在小鼠神经母细胞瘤(NA)细胞中的表型变化与M基因重排的相关性。【方法】通过荧光定量PCR、Western blot以及病毒在NA细胞中的生长和扩散试验,对亲本毒株rHEP-Flury和M基因重排毒株M2、M4在NA细胞中的基因转录、表达、生长和扩散进行比较。【结果】狂犬病病毒结构基因的转录和表达主要受病毒基因组RNA合成的影响,但是在一个完整转录过程中单个结构基因的转录比例与其所在位置相关,M基因重排病毒的Leader RNA (LeRNA)和L mRNA的转录比例显著高于亲本毒株rHEP-Flury。M基因重排病毒在NA细胞中的生长和扩散都劣于亲本毒株rHEPFlury。【结论】狂犬病病毒亲本毒株rHEP-Flury具有狂犬病病毒原始的基因组顺序,在NA细胞中的生长和扩散都明显优于M基因重排病毒。结构基因在基因组中的位置主要决定其在一次转录过程中的转录比例,进而影响病毒在NA细胞中的生长和扩散。     

柴胡总皂苷对胃癌(SNU-216)的抑制作用研究

目的探讨柴胡总对胃癌(SNU-216)抑制作用。方法采用体外法培养胃癌(SNU-216),分别用不同浓度柴胡总皂苷(0.025μmol/L、0.050μmol/L、0.075μml/L、0.100μml/L)作用于体外培养的胃癌(SNU-216),分别在24、48、72h用MTT法检测胃癌(SNU-216)生长抑制率。结果柴胡总皂苷对胃癌(SNU-216)具有抑制生长作用,并随剂量增长抑制作用增强。实验组与对照组进行比较,有显著性差异(P0.001)。在药物的作用时间上, 24h以内作用较弱,48h以内是随着作用时间增加,抑制效率增强, 72h以内观察抑制效率亦有所增强,但与48h组比较抑制效率差异明显。结论不同浓度柴胡总皂苷对胃癌(SNU-216)细胞生长有抑制作用。     

植物类病变突变体的研究进展

植物类病变是指在无外界致病因素和逆境因素的影响下,植株叶片、叶鞘等部位自发产生坏死斑的现象。这类突变与植物过敏性反应症状类似,属于程序化细胞死亡。在植物类病变突变体中,植株通常会表现出对某些植物病原物抗性增强。对植物类病变突变体的特点、遗传机制、病斑发生机制、抗病性以及类病变突变体基因的克隆及功能分析等进行整理,可为植物程序化死亡的机制研究和抗性品种的遗传改良提供理论依据。     

水稻OsBGAL1基因的亚细胞定位分析

植物β-半乳糖苷酶是一类与细胞壁重塑相关的糖苷水解酶,广泛分布于植物组织,参与多种生理生化过程,但水稻BGALs基因家族的亚细胞定位及其生物学功能尚不清楚。根据NCBI公布的水稻OsBGAL1的ORF序列设计引物,从日本晴叶片c DNA中扩增得到目的基因片段,构建了OsBGAL1-GFP融合表达载体,然后通过农杆菌介导的烟草瞬时表达系统对其进行亚细胞定位分析。激光共聚焦观察结果表明,与空载对照相比,水稻Os BGAL1蛋白主要定位于细胞壁,结合其生化活性,揭示其可能参与细胞壁多糖重塑。研究结果可为进一步研究其生物功能奠定基础。     

星豹蛛细胞色素CYP3001U15基因克隆与生物信息学分析

星豹蛛是农业害虫的重要捕食性天敌。通过转录组测序鉴定出66条星豹蛛细胞色素P450基因,进一步筛选分析出5条基因,预测其与外源物质代谢有关。为进一步研究星豹蛛细胞色素P450功能和代谢机制,选取其中一条基因进行生物信息学研究。试验通过RT-PCR扩增技术,将星豹蛛总RNA反转录cDNA,后以此为模板进行PCR扩增,回收纯化产物完成单克隆并测序,获取该基因序列信息,并对其进行生物信息学分析。结果发现,克隆到CYP3001U15基因ORF序列,该基因开放阅读框为1 074 bp,编码357个氨基酸,分子质量为42 ku,等电点为5.91,原子总数为5 808,分子式为C_(1877)H_(2896)N_(494)O_(531)S_(10);正电荷残基47个,占氨基酸总数的13.2%,负电荷残基52个,占氨基酸总数的14.6%;蛋白的二级结构预测结果显示,α螺旋占47.62%,β折叠占8.96%,β转角占4.76%,无规则卷曲占38.66%;亚细胞定位预测结果显示,其定位在细胞内质网上;蛋白信号肽预测结果显示,该蛋白不存在信号肽;跨膜结构预测分析结果显示,其不存在跨膜结构。研究结果可就星豹蛛细胞色素P450基因对杀虫剂等外源物代谢的研究提供理论基础。