靶向S基因外源性microRNA抑制TGEV增殖效果的研究

应用生物信息学软件对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因进行分析,筛选出可能与S基因有相互作用的外源miRNA:amiRNA-S-28035,amiRNA-S-28038,amiRNA-S-28165。之后,利用脂质体将构建好的相应的表达载体瞬时转染至PK-15细胞;通过Q-PCR和间接免疫荧光方法检测其对S基因的抑制作用;CPE分析和TCID50测定检测其对TGEV增殖的抑制效果。结果发现,3个外源性miRNA均降低了S基因mRNA的转录和蛋白的表达,其中amiRNA-S-28038对TGEV mRNA的平均抑制率可达64.6%,最高可达69.9%,表明外源性microRNA可以通过靶向TGEV基因组来抑制TGEV的复制。研究结果为猪传染性胃肠炎的预防和治疗提供了新的思路。     

橄榄果实总RNA提取方法的比较

针对橄榄果实富含酚类、多糖、蛋白质等次生代谢物的特点,采用百泰克总RNA抽提试剂盒法、Trizol法和CTAB法提取橄榄果实总RNA,用紫外分光光度计测定其纯度,并用琼脂糖凝胶电泳检验其完整性。结果表明,CTAB法提取的RNA纯度高,完整性较好,受多糖多酚影响较少,且无DNA和蛋白质污染,适宜用于后续研究。     

寄主诱导的基因沉默提高植物真菌病害抗性研究进展

寄主诱导的基因沉默(host-induced gene silencing,HIGS)以病原菌生长发育、产孢繁殖、侵染或致病过程中的关键基因作为靶点,在寄主植物中表达针对靶基因的RNAi构建体,在病原菌侵染植物的过程中,摄入相应的ds RNA或si RNA分子,通过识别、结合特异核苷酸序列,干扰病菌靶基因表达,从而抑制病菌侵染和扩展,使植物表现抗病。这项技术为培育基于病原菌特异序列的植物抗病性奠定了基础,显示了巨大的应用潜力。本文综述了利用HIGS技术提高植物真菌病抗性的最新研究进展,总结了国内外利用这项技术改良植物真菌病害抗性的主要策略、技术路线,展望了发展应用前景。     

病原的性别

<正>在养猪生产中,绝大部分的专家及学者把环状病毒(圆环病毒)和蓝耳病病毒混为一谈,认为两者在致病机理上相似,均为免疫抑制性疾病。诸如此类的认识充斥在当今的养猪行业当中,错误的思维往往导致错误的行动,错误的行动最终带来生产上和经济上的重大损失。常言道:"天地存阴阳,世人分男女,病毒有公母。"在越来越多的健康问题的困扰之下,发扬中国传统哲学理念,剔除现代西方思维方式中的糟粕已经成为人们唤醒理智的一剂良药。     

油菜种子低亚油酸和亚麻酸含量异交稳定技术的建立

为降低油菜种子中的亚油酸和亚麻酸含量并使之在异交条件下保持基本稳定,以高油品种CY2作为受体亲本,采用RNA干涉技术沉默油菜内源Bn FAD2基因的表达,抑制油酸脱饱和反应。育成的3个独立转基因株系的亚油酸和亚麻酸含量下降到6%以下,其中亚油酸含量较受体亲本降低78.2%~86.5%,亚麻酸含量降低53.4%~65.8%。将3个转基因株系与2个亚油酸和亚麻酸含量较高的常规品种正反交,F1种子中这2种脂肪酸的含量依然保持在与转基因亲本相仿的低水平。由此可知,通过RNA干涉技术沉默Bn FAD2基因的表达可赋予油菜低亚油酸和亚麻酸含量的异交稳定特性。这一特性的获得对于今后培育异交稳定的高油酸油菜新品种具有重要意义。     

山羊FATP2基因的克隆及对前体脂肪细胞脂质沉积的影响

旨在对山羊脂肪酸转运蛋白2(fatty acid transport protein 2,FATP2)基因进行克隆及生物信息学分析，检测FATP2基因在山羊不同组织中的表达差异，并进一步揭示干扰FATP2基因对山羊肌内前体脂肪细胞脂质代谢的影响。本试验以10月龄健康简州大耳羊(n=12)为试验动物。采用RT-PCR法扩增并克隆山羊FATP2基因，进行序列对比、系统发育树构建及生物信息学分析；利用实时荧光定量PCR检测FATP2基因在山羊不同组织中及在山羊肌内前体脂肪细胞不同分化时期的相对表达水平，合成SI-RNA干扰序列并转染至山羊肌内前体脂肪细胞；使用RT-qPCR检测FATP2干扰效率及脂质代谢相关基因的表达情况；通过Bodipy染色法观察干扰FATP2对脂滴形成的影响，利用GPO-Trinder酶学反应检测甘油三酯含量。结果显示，获得山羊FATP2基因序列全长2 335 bp, CDS区1 863 bp, 5′UTR 188 bp, 3′UTR 284 bp;共编码621个氨基酸，山羊FATP2基因在肝脏表达量最高；RT-qPCR检测结果显示，FATP2表达在细胞中被显著干扰；B...     

给力的“生物天线”

<正>昆虫和节肢动物以及某些软体动物的头上长着长须,生物学上将其称为"触角",因为与人们使用的电器上的天线十分相似,因此我们不妨把它们称为"生物天线"。触角"天线"科学家们在大量观察、研究的基础上发现,昆虫的通讯能力与它们触角的形状、大小及构造有着十分密切的关系。无论从形态上、感觉毛的排列上以及尺寸大小的比     

富士苹果秋季管理技术

<正>红富士是从普通富士的芽(枝)变中选育出的着色系富士的统称,是世界上最著名的晚熟苹果品种。富士果实虽有风味好、晚熟、耐贮等优点,但也存在着果实着色差的缺点。富士苹果与其他苹果相比有更长的最佳食用期,甚至无需放入冰箱保存。室温下可保存4个月,如果放入冰箱,富士苹果可保存5~7个月。现将秋季富士苹果树的管理技术介绍如下:     

MSTN基因敲低绵羊成纤维细胞株的筛选

为了获得绵羊MSTN基因敲低成纤维细胞株,克隆获得MSTN基因序列构建其真核表达载体;设计合成并筛选3种MSTN基因干涉序列(M1、M2和M3),构建相应的3种RNA干涉载体;将MSTN基因真核表达载体单独或分别与3种RNA干涉载体共转染绵羊成纤维细胞后,分别检测其对MSTN基因表达的干涉效率以获得最佳的MSTN基因RNA干涉载体;将筛选的RNA干涉载体线性化后转染绵羊成纤维细胞,通过筛选获得转基因细胞株。结果显示,成功克隆得到与GenBank中序列同源性为100%的绵羊MSTN基因序列,并获得真核表达载体pcDNA3.1(+)-MSTN;构建获得MSTN基因RNA干涉载体pRNAT-M1、pRNAT-M2和pRNAT-M3;与单独转染pcDNA3.1(+)-MSTN后293GP细胞中MSTN基因的相对表达量相比,转染干涉载体后MSTN基因相对表达量明显下降,其中pRNAT-M1干涉效率最佳;将pRNAT-M1线性化后转染绵羊成纤维细胞并利用G418筛选获得转基因阳性细胞;获得的转基因阳性细胞的细胞形态、生物学特性均呈现正常;PCR检测结果显示,pRNAT-M1已整合到细胞基因组中。上述结果表明,成功获得了MSTN基因敲低的绵羊成纤维细胞株。     

小麦小分子RNA TaMIR1129介导植株抵御低氮逆境功能研究

本研究针对迄今有关小麦小分子RNA(miRNA)家族成员介导植株氮素吸收和利用机理尚少见报道的现状,对TaMIR1129的表达特征和介导植株抵御低氮逆境功能进行了研究。结果表明,TaMIR1129呈低氮胁迫诱导表达,表现为随氮浓度降低(0.02~6mmol/L)和处理时间延长(0~48h)表达水平不断增高特征。此外,低氮诱导的高表达水平在恢复供氮后表达下调。表明该miRNA对介质中氮素应答呈典型的时间及浓度依赖特征。TaMIR1129作用2个靶基因,包括Molybdenum cofactor sulfurase(TaMCS)和Major facilitator family transporter(TaMFFT),上述基因应答低氮特征与TaMIR1129相反。遗传转化结果表明,超表达TaMIR1129具有显著增强植株抵御低氮逆境的能力。表现为与野生型对照相比,转基因系Sen 1和Sen 2低氮处理后植株形态增大,干质量增加,氮累积量增多。表明TaMIR1129与作用靶基因构建miRNA/target模块在介导植株抵御低氮逆境中发挥重要作用。