反向嵌套PCR技术扩增驯鹿Ghrelin cDNA 5′末端序列

为了研究Ghrelin在驯鹿生长发育过程中的作用和功能,以驯鹿为研究对象,采用反向嵌套PCR RACE技术原理,根据已知的序列设计1条5′末端磷酸化的特异性反转录引物和2对特异性反向嵌套PCR引物,首先进行反转录(RT),然后将反转录成的cDNA进行环化,最后进行反向嵌套巢式PCR,成功地扩增了驯鹿Ghrelin cDNA 5′末端序列。与锚定PCR相比,反向嵌套PCR法具有特异性强、扩增效率高等优点,是一种非常有效的扩增cDNA 5′末端序列的方法。     

酿酒酵母β-葡聚糖通过膜受体Dectin-1和TLR-2诱导绵羊瘤胃上皮细胞表达SBD-1的机制研究

为了探索酿酒酵母β-葡聚糖诱导绵羊瘤胃上皮细胞(ovine ruminal epithelial cells,ORECs)β-防御素-1(sheepβ-defensin-1,SBD-1)表达过程中膜受体Dectin-1和TLR-2可能存在的作用。本研究首先利用免疫组化、RT-PCR、免疫荧光和Western blot等方法检测Dectin-1是否在ORECs内表达,并且采用qPCR和Western blot方法对β-葡聚糖刺激ORECs后细胞膜受体Dectin-1和TLR-2的表达变化进行检测。而后用不同浓度的Dectin-1阻断剂昆布多糖或TLR-2特异性封闭抗体分别预处理ORECs后,采用qPCR和ELISA方法检测SBD-1的表达变化,以确定β-葡聚糖诱导SBD-1表达过程中Dectin-1和TLR-2的参与情况。结果显示:1)绵羊瘤胃组织及ORECs内存在Dectin-1表达,且β-葡聚糖刺激ORECs后Dectin-1和TLR-2的表达水平显著增加(P<0.05);2)不同浓度的昆布多糖和TLR-2封闭抗体均可以极显著降低β-葡聚糖诱导SBD-1的表达(P<0.01),且随着阻断剂和封闭抗体浓度的增加,其抑制SBD-1表达的作用越明显。结果表明,Dectin-1在绵羊瘤胃组织及ORECs内均表达,并且酿酒酵母β-葡聚糖在ORECs中诱导SBD-1的表达是由Dectin-1和TLR-2介导产生的。     

Ghrelin在马鹿器官组织中的表达

为研究Ghrelin在马鹿体内可能表达的器官,通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qPCR)方法检测马鹿的舌、食管、瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、肝、胰、颌下腺、腮腺、气管、肺、肾、输尿管、膀胱、卵巢、输卵管、子宫、阴道、大脑、下丘脑、垂体、松果体、甲状腺、肾上腺、心肌、心内膜、脾、淋巴结和骨骼肌中Ghrelin表达情况。结果显示,Ghrelin在皱胃内的表达量明显高于其他器官(P0.05);胰、子宫、卵巢、十二指肠和食管次之,与其余30种器官的表达量相比差异也显著(P0.05);其余器官内的表达量相对较少。结论:Ghrelin在所检测的36种器官内均有表达。     

防御素的研究进展

防御素(defensins)是一类富合半胱氨酸和精氨酸的阳离子低分子内源性抗微生物短肽,具有特殊的抗性机理和广谱、高效的抗微生物活性,所以防御素在医药、食品、和转基因工程上将发挥重要作用.防御素在自然界广泛分布于动物、植物和昆虫体内,是构成生物体先天免疫的重要成分.根据防御素分子内半胱氨酸和精氨酸的位置和连接方式、前体性质及表达位置的差异可分为5种类型:α-防御素、β-防御素、θ-防御素、昆虫防御素和植物防御素.文章对不同来源的防御素的分布、分子结构特征、抗微生物活性和作用机制以及应用前景做一综述.     

多功能的宿主防御肽——防御素

防御素是生物体内先天性免疫系统中的一类短肽,是内源性抗微生物肽中的一个大家族。根据防御素分子内半胱氨酸的位置和连接方式、前体性质及表达位置的差异可分为α-防御素、β-防御素、θ-防御素、植物防御素和昆虫防御素五种类型。防御素具有广谱的抗微生物活性,无论在细胞内或细胞外,都可以直接杀死细菌、真菌、病毒等病原微生物,同时对某些恶性肿瘤细胞也有毒杀作用。防御素作为一种新型的宿主防御肽进行免疫调节,维持机体内环境的稳定。     

秋季鸡主要疾病的防治

一、细菌性腹泻 1．症状秋季天气忽冷忽热．造成肠道调节机能差．致病微生物大量增殖，引起腹泻。鸡群精神状态尚好．但生长缓慢．鸡冠苍白．部分鸡表现为拉白色条状或粘液状粪便．粪中含有未消化的饲料，粪便颜色微黄。个别鸡出现精神沉郁、缩头、头部震颤、来回乱跑、易尖叫、然后瘫痪．鸡群发病率为1％左右。     

驯鹿β-防御素-1(reBD-1)基因的原核表达及蛋白活性的鉴定

旨在构建驯鹿β防御素-1(Reindeerβ-defensin-1,reBD-1)基因的原核表达载体pET-32a(+ )/reBD-1,诱导reBD-1融合蛋白在大肠杆菌中表达,并对其表达产物的生物学活性进行评价.利用RT-PCR技术扩增reBD-1前原肽.从重组克隆载体PMD19T/reBD-1中扩增reBD-1成熟肽编码基因,并克隆入pET-32a(+)中,在大肠杆菌BL21 (DE3)中用IPTG诱导表达reBD-1融合蛋白.表达的融合蛋白扩大培养,进一步纯化后进行体外抑菌试验.结果表明,reBD-1前原肽和成熟肽扩增产物大小分别为215和138 bp,目的基因的序列与驯鹿防御素-1 mRNA序列同源性为100％.前原肽和成熟肽融合蛋白分子量分别为28和24 ku.利用琼脂糖扩散法表明,0.08 mg·mL-1的纯化成熟肽蛋白对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的活性有明显抵抗作用.结果显示,reBD-1前原肽及成熟肽在大肠杆菌中得到了高效表达,其成熟肽对革兰氏阳性菌和阴性菌的活性有抗性.     

剖腹诊断治疗新疆驴结肠骨盆曲阻塞一例

采用剖腹诊断治疗1头新疆驴结肠骨盆曲阻塞.结果手术驴术后不久便通气,腹围减小,体温、脉博、呼吸正常,术部切口无粘连现象,第2天开始食少量流质饲料,第6天开始食量增加,第20天后复查,病驴恢复正常.表明剖腹诊断治疗新疆驴结肠骨盆曲阻塞是可行的.     

梅花鹿肾上腺组织学研究

取梅花鹿的肾上腺，做常规石蜡切片，进行H．E染色、组织学观察。结果表明，肾上腺的组织结构分为被膜、皮质和髓质。被膜由不规则致密结缔组织构成，其内分布有类似未分化的细胞，并偶见少量平滑肌纤维。皮质最厚，明显分为3个带，即球状带、束状带、网状带，其中束状带最厚，占皮质的绝大部分，髓质位于肾上腺中央部位，细胞排列成索状或团块状，髓质中央有一大的静脉，称为中央静脉。     

益生菌对肠道先天防御反应调节作用的研究进展

益生菌是可添加在饲料中对动物健康产生很多益处的活微生物,其在维持胃肠道微生物平衡、免疫调节和病原体防御中起关键作用,某些特定的益生菌菌株对加强肠上皮的完整性和调节一些免疫组分也显示出一定程度的潜力。有关益生菌的作用机制是当前研究的热点,其中,在益生菌调节肠道介导的防御反应的所有可能途径中,肠屏障功能、先天和适应性黏膜免疫反应及信号传导途径被认为在针对病原菌的肠防御反应中起重要作用。作者主要针对益生菌如何与肠道内的杯状细胞黏蛋白、三叶因子（trefoil factors,tffs）、防御素、Toll样受体（Toll-like receptors,TLRs）、分泌型免疫球蛋白A（secretory immunoglobulin A,sIgA）、热休克蛋白（heat shock proteins,HSPs）和P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）相互作用而起到调节肠道先天防御反应的作用进行了概述,以期为今后研究益生菌对肠道健康及对感染病原体的肠道如何起到有益作用奠定基础。