迟钝爱德华氏菌鞭毛蛋白的提取与分析

采用不同的方法提取迟钝爱德华氏菌鞭毛蛋白(Edwardsiella Tardaflagellin,ETF),选出合适的方法提取ETF,同时制备了ETF的鼠抗血清和迟钝爱德华氏菌菌株ETY全菌的鼠抗血清,通过ELISA法和Western blottig法分析了ETF的抗原性和免疫原性。试验结果表明,酸化高速离心法可获得高纯度分子量约为44 kDa的ETF,该蛋白可被爱德华氏菌的全菌鼠抗血清识别,同时由ETF制备的鼠抗血清除了能特异识别该蛋白之外,也可识别爱德华菌菌体裂解产物中44 kDa的蛋白,证实爱德华氏菌鞭毛蛋白具有抗原性和免疫原性,可作为亚单位疫苗的候选抗原。     

功能性卵黄粉对断奶仔猪腹泻、肠道E.coli和生长性能的影响

在基础日粮中分别添加0.1%(试验Ⅰ组)和0.2%(试验Ⅱ组)的功能性卵黄粉,观察其对断奶仔猪生长性能、肠道菌群、肠绒毛形态的影响.结果表明:试验Ⅰ组和Ⅱ组仔猪的腹泻率分别极显著低于只喂基础日粮对照组的54.8%(P＜0.01)和84.3%(P＜0.01);试验第28 d,试验Ⅰ组粪便中致病性大肠杆菌数和细菌总数极显著...     

美洲鳗鲡腺瘤病毒(AEAdoV)普通PCR和SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为了建立美洲鳗鲡腺瘤病毒（American Eel Adomavirus, AEAdoV）的检测方法,根据AEAdoV福建株的superfamily 3 helicases (S3H)序列,设计了二对引物,建立了AEAdoV的普通PCR和qPCR检测方法;进一步评价检测方法的灵敏性、特异性及重复性,比较两种方法对AEAdoV-FJ检出率,并对美洲鳗鲡体内各组织的病毒含量进行了分析。结果显示,普通PCR扩增的目的片段长度约300bp,利用其构建了qPCR质粒标准品,其拷贝数与qPCR的阈值循环数(cycle threshold value,CT)线性关系良好,线性范围广,标准曲线相关系数(R2)达到0.999,扩增效率为105.067％;采用普通PCR法和qPCR可检测的最低AEAdoV拷贝数分别为100个和10个;上述两种方法均可特异性检测AEAdoV,而对蛙虹彩病毒（Rana grylio virus,RGV）、鳗鲡疱疹病毒（Anguillid herpesvirus,AngHV）、鲤疱疹病毒（Koi herpes virus,KHV）、对虾白斑综合症病毒（White spot syndrome virus,WSSV）、日本鳗鲡内皮细胞坏死病毒(Japanese Eel Adomavirus,JEAdoV)和花鳗鲡腺瘤病毒(Marbled Eel Adomavirus, MeAdoV)均无扩增反应;qPCR法的组内和组间变异系数均小于2%,表明其重复性良好。临床应用结果显示,35 份美洲鳗鲡病料,采用普通PCR法的AEAdoV检出率为82.8%,而qPCR法的AEAdoV检出率为97%。对美洲鳗鲡组织的病毒含量分析结果显示心脏、肝脏、鳃、鳍的AEAdoV相对含量较高,而黏液、皮肤和脾的病毒含量相对较低。上述结果对于研究AEAdoV的致病性,开展其流行情况和病原学情况具有重要意义。     

刺激隐核虫与多子小瓜虫免疫学特性比较研究综述

刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)与多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis)是影响渔业生产重要寄生虫,本文主要阐述了刺激隐核虫与多子小瓜虫种内和种间的免疫学相似性和差异性,及其两种寄生虫抑动抗原的免疫学特性以及克隆表达研究。为免疫学方法预防两种寄生虫病提供理论依据。     

欧洲鳗皮肤黏膜免疫球蛋白纯化及其结构组成分析

应用亲和层析技术提纯欧洲鳗(Anguilla anguilla)黏膜免疫球蛋白(Ig),并在结构和抗原性上进行分析.柱层析结果表明,欧洲鳗黏膜Ig经亲和层析分离后出现1个锐形的蛋白峰,蛋白主要分布于收集物的第2-6管,蛋白峰和抗原活性峰重叠.凝胶电泳结果显示,在变性还原条件下,欧洲鳗黏膜Ig重、轻链分子量分别为68 kD和26 kD,还有1条分子量约为18 kD的蛋白带;在非变性非还原条件下,黏膜Ig只有1条蛋白带,分子量约为350 kD,略旱扩散拖带现象,这一结果提示自然条件下欧洲鳗黏膜Ig可能以二聚体形式存在;在变性非还原条件下,黏膜Ig有3条蛋白带,分子量约为350 kD、138 kD和135 kD,表明欧洲鳗黏膜Ig在SDS作用下可发生不同程度的解聚.Western-blotting试验证实,兔抗血清能识别欧洲鳗黏膜Ig的二聚体、解聚体、重链和81 kD、84 kD处的蛋白带,显示出黏膜Ig的抗原特异性.欧洲鳗黏膜Ig与血清Ig在结构和抗原性上的差异.为进一步探讨欧洲鳗是否存在相对独立的黏膜免疫系统奠定了基础.     

美洲鳗鲡“脱黏败血综合征”病原的分离鉴定及其致病性研究

为明确美洲鳗鲡“脱黏败血综合征”的病原，本研究采集福建省某养殖场的美洲鳗鲡病料组织样品制备病理切片，观察各组织病变，结果显示，病鳗的鳃、肝脏和肾脏呈现广泛性红细胞渗出和组织细胞变性、坏死。将病料样品接种鳗鲡肾脏细胞系(EK)进行病毒的分离，对分离病毒经电镜观察，结果显示，接种病料样品匀浆液的EK细胞出现合胞体病变，可见细胞核内有大量直径约120 nm的病毒。提取病毒基因后作为模板，采用PCR鉴定，结果证实其为鳗鲡疱疹病毒(AngHV)，将其命名为Ang HV-20713。进一步扩增分离病毒的ORF71基因并分析其同源性和遗传进化关系，结果显示，Ang HV-20713与其它Ang HV的同源性为93.6%～99.0%，且与分离自美洲鳗鲡的Ang HV亲缘关系最近。将分离病毒以106pfu/尾腹腔注射健康的美洲鳗鲡和欧洲鳗鲡，进行人工感染实验，结果显示，Ang HV-20713对鳗鲡具有致病性，感染鳗鲡可见体表黏液脱落、胸鳍出血等“脱黏败血综合征”症状，并导致美洲鳗鲡60%的发病率和20%的死亡率，而感染的欧洲鳗鲡死亡率高达56.7%。利用q PCR从感染病毒的美洲鳗鲡各组织内均可检测到...