寄生隐丛赤壳菌ITS分子检测技术研究

寄生隐丛赤壳菌是引起板栗疫病的致病菌。为建立该菌的分子检测技术,本研究首先采用通用引物ITS1/ITS4对分离自四川雅安、泸州及重庆的寄生隐丛赤壳菌及其他参试菌株的ITS区进行PCR扩增和测序比对。根据该片段与GenBank中隐丛赤壳属其他种的ITS序列差异,设计了寄生隐丛赤壳菌的特异性引物ITSP1/ITSP2,片段扩增大小为462bp。利用该引物对菌株基因组DNA进行扩增,可以将寄生隐丛赤壳菌与其他参试菌区分开,检测灵敏度达30pg。而以引物ITS1/ITS4和ITSP1/ITSP2进行的巢氏PCR,可检测到30fg基因组DNA,其灵敏度较常规PCR提高了1 000倍。利用巢氏PCR检测体系对发病程度不同的组织和携菌组织进行检测,均能快速稳定地检测出寄生隐丛赤壳菌。     

绛红褐链霉菌YSSPG3的鉴定及其抗菌蛋白纯化

 从四川碧峰峡撑×绿杂交竹健康植株根际分离到对杂交竹梢枯病菌(Arthrinium phaeospermum)有强拮抗作用的放线菌菌株YSSPG3,该菌株的无菌发酵液对多种真菌和细菌具有抗菌活性。通过对菌株YSSPG3的形态特征、培养特性、生理生化特性、细胞壁组分与16S rDNA 序列分析,确定为绛红褐链霉菌(Streptomyces purpeofuscus)。采用硫酸铵沉淀和柱层析法对发酵液中起主要抑菌作用的抗菌物质进行分离纯化,获得单一的抗菌蛋白AMP,分子量为5 075.619 Da,等电点为6.77。抗菌蛋白在温度≥60℃和pH＜7,以及紫外线照射时间≥12 h的环境下抑菌活性均明显下降,但受蛋白酶K、胰蛋白酶和氯仿影响不大,无几丁质酶、葡聚糖酶等水解酶活性。利用Edman降解法测定抗菌蛋白N末端25个氨基酸序列,与来自 Streptomyces tendae  Tü901 的chitin-binding protein AFP1的同源性较高,为81.00%。     

松烂皮病内生拮抗细菌的筛选、生防效果及华山松的生理响应

为探究内生细菌对华山松烂皮病的生防效果及其生理响应,采用平板涂布法和对峙培养法从健康华山松树皮上分离筛选抗烂皮病菌Cenangium ferruginosum的拮抗菌株,运用形态学、生理生化及分子生物学对其进行鉴定;并利用喷雾法研究其对华山松苗烂皮病的盆栽防治效果及苗木各生理指标的变化,观测其对田间发病华山松病斑的防治效果.结果显示,分离得到具有优良拮抗效果的菌株Ba4,经鉴定为解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens;其发酵原液盆栽防治效果可达90.15%,稀释至10⁵防治效果也有17.77%,发病率和病情指数均下降.接种病原菌30 d后,不同浓度Ba4菌剂处理的苗木丙二醛含量均减少,木质素、可溶性蛋白和可溶性糖含量均增加;丙二醛含量与发病率和病情指数呈显著正相关,与防治效果呈显著负相关;木质素、可溶性蛋白和可溶性糖含量则与其相反.田间试验中原液和稀释倍液(10、10²和10³)的病斑治愈率均超过80%.表明菌株Ba4对松烂皮病有良好的防治效果,能调节华山松抗性物质的合成.     

暗孢节菱孢菌非蛋白类毒素的基本性质研究

用改进的Fries培养基在最佳条件下培养出的暗孢节菱孢菌[Arthrinium phaeospermum(corda)M.B.Ellis]滤液,采用硫酸铵沉淀制备蛋白类、非蛋白类粗毒素。经致病性检测,前者生物活性低于后者小分子毒素成分。基本性质研究显示非蛋白粗毒素有一定专化性,但专化性不强,介于专化性与非专化性毒素之间;具有较强的热和紫外线稳定性、对pH敏感,易受碱性物质影响;9种不同极性物质对毒素的生物活性有不同影响,该毒素可能为极性较大的物质。     

杂交竹白纹羽病生防菌的筛选与应用

本文以健康杂交竹根际土为对象,在稀释平板法获得25株芽孢杆菌基础上,采用牛津杯法、打孔法测定两株目标生防菌发酵滤波对白纹羽病菌的抑制活性,筛选出最优B2菌株,盆栽试验证明该菌株有较高生防潜能,形态学与生理生化鉴定为蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）.田间试验表明该菌剂100倍～200倍（体积比）稀释度沿根系幅面灌根,每株100 mL,每年春季施用一次,可预防白纹羽病发生;50倍～100倍（体积比）稀释度沿根系幅面灌根及附近土壤淋灌,每株200 mL,春、夏各一次,连续3a,可有效治疗白纹羽病,总体效果优于甲基托布津.     

植物病原真菌毒素

植物真菌病害是植物的主要病害，毒素作为引发病害的重要因子之一而受到广泛的注意。已有不少学者对病原真菌毒素作了深入而详尽的研究。本文综述了近年来有关植物病原真菌素的种类及特点，并对毒素的应有前景作了简要的分析和展望。     

枯斑盘多毛孢菌粗毒素的基本性质研究

本文对松赤枯病菌（Pestalotia funeren Desm.)培养液粗提物的基本性质进行了初步研究。结果表明，松赤枯病菌培养液中有致病物质即毒素存在，该菌在PD培养液中能达到最大产毒量；松针浸出汁对毒素的产量和致病活性没有明显的促进作用，培养15天的培养液有较高的致萎蔫的活性，随着培养时间的延长其致萎活性没有较大的提高。该毒素是一类极性较大的非蛋白类物质，能用甲醇将其从培养液中较好地提取出来。pH值对毒素粗提液致病活性无显著影响，毒素粗提液中活性成分能被活性碳吸附。     

山茶炭疽病的初步研究

本试验以山茶叶部症状及病原菌的培养性状和形态特征为依据,通过对病原菌进行分离培养和致病性测定,证实了山茶炭疽病是由山茶炭疽菌(Colletotrichum camelliaeMass)侵染所致,且病菌具有潜伏侵染的特性。     

花椒根腐病防治的研究

苗圃预防试验结果表明，粉锈宁可有效地防治花椒苗期根腐病，经处理后的苗圃发病率为对照的１／１７。不同立地类型移栽试验显示，新垦山地及农耕地中的砂土，砂壤土较适宜花椒生长，不易感染根腐病，成年椒园根腐病的防治效果，以粉锈宁灌根方式较好，并与施药剂的次数有关，在此基础上，本文结合病害流行条件与花椒栽培布局结构关系，初步探索出预防和治疗根腐病害的综合措施。     

坚强芽孢杆菌对3种病原真菌的抗生现象

病害生物防治,具有无污染、不诱导抗药性、防效持久等特点,是今后植物病害控制的主要方向,也是综合治理的一个重要环节.