培养基更换后草鱼出血病灭活疫苗的免疫效果

使用廉价培养基ＣＡＳ在ＣＩＫ细胞系上增殖草鱼出血病病毒（ＧＣＨＶ—８５４株），所制备的灭活疫苗性能稳定，安全性好。用该疫苗免疫草鱼，饲养１０天后，其血清中和抗体水平测定结果表明，注射组为１０７．９±１１．０（３），浸泡组为６８．５±９．９（３），与对照组［２０．２３±４．５（３）］相比，Ｐ值分别为Ｐ＜０．００１和０．００１＜Ｐ＜０．０１，差异极显著。     

我国水产养殖动物病害的现状及发展方向

水产养殖动物病害的有效防治措施、水产药物的合理应用等一直以来都是广大水产养殖业者非常关心的问题,养殖动物疾病的正确预防和治疗是养殖成功的关键。为使读者对当前水产养殖动物病害的现状和养殖过程中大家比较关心的问题有一个全面的了解,我刊特别约请中国水产科学研究院长江水产研究所鱼病室主任、国家大宗淡水鱼类产业技术体系鱼病岗位专家曾令兵研究员对以上问题作一阐述。     

患病大鲵摩氏摩根菌的分离与鉴定

从患病大鲵肝脏中分离到1株优势菌SX01,通过Biolog微生物自动鉴定系统、16S rDNA序列分析及构建系统发育树的方法对纯培养的细菌进行鉴定,并进行人工感染试验及药敏试验。结果表明,该分离菌为摩氏摩根菌(Morganella morganii),对大鲵具有致病性。药物敏感性试验表明,该菌株对头孢曲松、头孢吡肟、氨曲南等10种药物高度敏感。     

草鱼出血病病毒高滴度培养方法的研究

本文对草鱼出血病病毒 854株高滴价培养的几种方法进行了的研究 ,现将结果报告如下 :材料和方法1　细胞 :草鱼肾脏组织细胞系 (ＣＩＫ) (左文功 ,1986 ) ,培养基为含 10 %小牛血清的ＣＡＳ。2　病毒 :草鱼出血病病毒 854株 ,维持液为 2 %小牛血清的ＣＡＳ。3　高滴价培养方法3 1　用 854株病毒接种刚生长成单层的ＣＩＫ细胞系 (区别于致密单层细胞 ,下同 )。病毒接种量为维持液量的 1/ 10 ,2 8℃吸附 6 0分钟后 ,添加维持液 ,2 8℃培养 ,观察细胞病变过程 ,测定病毒的ＴＣＩＤ50 /ｍｌ。3 2　精氨酸处理　在接种病毒时 ,向病毒液中加入浓…     

夏季水产养殖管理技术要点

夏季是一年中渔业生产最关键时期。但是,由于夏季温度高,昼夜温差大,水体上下温差明显,水质变化快,病原菌滋生,特别是持续高温天气时,养殖鱼类受环境变化影响,应激反应加剧,抵抗力下降,极易导致病害发生与流行,造成经济损失。     

黄颡鱼肠道及养殖水体中菌群的分析

对黄颡鱼肠道及所处水体菌群的数量和组成进行了分析。结果显示,黄颡鱼各肠段中好氧和兼性厌氧菌数量的对数值分别为5.27±0.74、6.26±0.36、7.56±0.61。厌氧菌数量远大于好氧和兼性厌氧菌,相差约2～3个数量级,双歧杆菌为厌氧菌的优势菌。养殖水体中细菌数量的对数值为4.80±0.73,表明水体中营养盐浓度不高。黄颡鱼肠道与养殖水体中的优势菌基本相同,均为气单胞菌属、肠杆菌科和不动杆菌属。此外,对患细菌性出血病的黄颡鱼肠道菌群的研究结果显示,患病鱼肠道细菌数量显著增加,气单胞菌相比健康黄颡鱼增加18.3%～33.6%,细菌种类明显减少。表明气单胞菌等重要条件致病菌需要在一定条件下、达到一定的优势度才能体现其致病性。     

草鱼呼肠孤病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法的建立

根据草鱼呼肠孤病毒 (grass carp reovirus, GCRV)衣壳蛋白VP6编码基因的序列设计特异性引物, 以病毒全基因组RNA为模板, 通过对反应条件进行优化, 建立了GCRV的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。检测结果表明, 本方法可在63℃下1 h内实现靶片段的大量扩增, 扩增产物经凝胶电泳呈现梯型条带, 反应体系中添加SYBR Green I 荧光染料后, 绿色阳性结果明显区别于橙色阴性结果。该检测体系针对草鱼呼肠孤病毒的检测灵敏度高, 其最低检测限为33 pg, 与常规RT-PCR方法相比较, 灵敏度高10倍, 且与斑点叉尾鮰呼肠孤病毒(CCRV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、锦鲤疱疹病毒(KHV)、大鲵虹彩病毒(GSIV)等无交叉反应。该方法灵敏度及特异性高, 且不需昂贵仪器设备, 为快速检测草鱼呼肠孤病毒与诊断草鱼出血病提供了简捷快速的技术手段。

     

嗜水气单胞菌灭活疫苗免疫施氏鲟后的免疫应答反应与保护效果

为了研究嗜水气单胞菌灭活疫苗免疫施氏鲟(Acipenser schrenckii Brandt,1869)后的免疫应答反应与保护效果,本研究采用福尔马林灭活法制备嗜水气单胞菌灭活疫苗。通过腹腔注射途径免疫健康施氏鲟,对施氏鲟外周血的红细胞和白细胞数量、白细胞组成、吞噬活性、吞噬指数、血清酸性磷酸酶活性、血清溶菌酶活性、血清中和抗体效价等免疫指标及疫苗保护效果进行测定。结果显示,免疫组红、白细胞数量迅速上升,于免疫后第4天达峰值,分别为(8.50±0.17)×10~8个/mL和(8.96±0.44)×10~6个/mL;单核细胞和嗜中性粒细胞分类百分比于第7天达峰值,分别为10.50%和15.53%,极显著高于对照组(P0.01),淋巴细胞分类百分比在第21天才达峰值73.51%;吞噬指数和吞噬百分比均于第4天达到最高值,分别为4.53和30%;血清中溶菌酶活性和酸性磷酸酶活性分别在免疫后第7天和第14天达到峰值,极显著高于对照组(P0.01);血清抗体效价于免疫后第21天达到峰值1:203,极显著高于对照组(P0.01)。攻毒感染实验结果表明,免疫组的相对免疫保护率为76.84%。由此可见,嗜水气单胞菌灭活疫苗免疫施氏鲟后,能够显著诱导施氏鲟体内的免疫应答反应,增强鱼体的免疫保护能力。本研究为养殖鲟因嗜水气单胞菌感染引起疾病的免疫预防技术研究奠定了前期基础。     

实时定量PCR测定(鮰)爱德华氏菌隐蔽质粒的拷贝数

为测定(鮰)爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri)隐蔽质粒的拷贝数, 并探究不同基因组制备方式及定量策略对质粒拷贝数测定的影响, 分别采用试剂盒和水煮法制备(鮰)爱德华氏菌基因组, 通过绝对定量和相对定量PCR测定两种不同总DNA制备方式下的隐蔽质粒拷贝数, 同时测定试剂盒对染色体DNA和质粒DNA的回收率.结果显示, 以试剂盒提取的总DNA测得的pEI1和pEI2拷贝数绝对定量和相对定量分别为3.63 ± 0.30、 5.04 ± 0.18和4.22 ± 0.15、 5.13 ± 0.50, 显著低于以水煮法测得的pEI1 和pEI2 拷贝数的绝对定量11.84 ± 0.80、 11.70 ± 0.25和相对定量13.85 ± 1.64、 11.90 ± 0.97.回收率结果显示, 试剂盒对染色体DNA的回收率(45.8 ± 4.1)% ,显著高于对质粒pEII的回收率(25.1 ± 0.5)%和pEI2的回收率(31.3 ± 1.7)% .结果表明: 通过实时定量PCR测定(鮰)爱德华氏菌隐蔽质粒的拷贝数时, 基因组的制备以水煮法为宜,(鮰)爱德华氏菌隐蔽质粒pEI1和pEI2均属于中拷贝质粒.     

鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2) ORF25蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备

利用PCR方法扩增鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2)ORF25基因的部分基因序列,并将扩增产物连接到原核表达载体pGEX-KG,成功构建了CyHV-2-ORF25-KG重组质粒。IPTG将其诱导后,SDS-PAGE分析表明:目的蛋白得到表达,分子质量大小为42ku,且主要以包涵体形式存在;用纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,多次免疫后通过细胞融合,筛选出1株单抗5C6;经间接免疫荧光试验和Western blot试验验证,这株单抗可以识别CyHV-2ORF25蛋白。