子二代中华鲟分枝杆菌感染及血液生理生化指标的变化

鱼类分枝杆菌病是由分枝杆菌属的非结核分枝杆菌造成的长期性感染疾病。本研究发现,养殖中华鲟(Acipenser sinensis)子二代可感染该病,典型病理特征是腹水、腹膜肉芽肿、肾脏水肿、肝脏呈灰白色等。采集腹水,通过细菌分离培养获得一株缓慢生长型的抗酸杆菌,进一步通过16S r DNA和IS2404重复序列进行分子生物学鉴定,发现该菌与Mycobacterium liflandii相似性最高。将10尾健康子二代中华鲟3次体检的血液参数与4尾分枝杆菌感染子二代中华鲟12次检查的血液参数进行比较,发现在26项生理生化指标中,有9项指标差异显著(P0.05),即中性粒细胞、淋巴细胞、钠、氯、钙、总蛋白、球蛋白、外周血白细胞总数(TWBC)和谷丙转氨酶(ALT),其中TWBC、中性粒细胞和ALT这3项指标显著升高,其他指标显著下降,说明分枝杆菌感染对鱼体肝脏和肾脏的损伤较大。采用盐酸卡纳霉素、红霉素和利福平三种抗生素联合用药进行治疗,给药时间75 d,治疗后腹水明显减少,RBC、血红蛋白、PCV、MCV和球蛋白这5项血液理化指标均有显著性升高(P0.05),说明药物治疗初期具有一定的效果,但随着病程的加剧,该尾鱼最终未能治愈。以上结果表明,分枝杆菌在中华鲟广泛流行,对中华鲟的危害较大,目前尚未见有效的疫苗和药物,因此对该病的预防、早期诊断和治疗极其重要。     

斑点叉尾鮰肾脏组织细胞系的建立及其生物学特性

采用组织块移植培养技术，对来源于斑点叉尾鮰（lctalurus punctatus Rafinesque）肾脏组织的细胞进行原代培养，建立了斑点叉尾鮰肾脏组织细胞系，定名为CCK，目前已稳定传代培养70多次。斑点叉尾鮰肾脏组织细胞为成纤维样细胞，最佳培养基为M199，最适培养温度范围为28～32℃，培养基血清体积分数为10％。在此条件下，CCK细胞的倍增时间为38．9～41．0h。斑点叉尾鮰肾脏细胞的集落形成效率为（74．16±3．54）%，第9代传代细胞的染色体数目为正常二倍体2n=58，第33代传代细胞的染色体众数为60。液氮冷冻保存6个月后复苏的细胞经台盼兰染色检验，（86．69±1．04）％的细胞仍保持活性，细胞复苏后培养生长旺盛。通过对第17代离体培养细胞的28S rRNA基因进行PCR扩增及序列分析与比对，表明该细胞系来源于斑点又尾鮰。     

斑点叉尾(鱼回)肾脏组织细胞系的建立及其生物学特性

采用组织块移植培养技术,对来源于斑点叉尾(鱼回)(Icttalurus punctatus Rafinesque)肾脏组织的细胞进行原代培养,建立了斑点叉尾(鱼回)肾脏组织细胞系,定名为CCK,目前已稳定传代培养70多次.斑点叉尾(鱼回)肾脏组织细胞为成纤维样细胞,最佳培养基为M199,最适培养温度范围为28～32℃,培养基血清体积分数为10%.在此条件下,CCK细胞的倍增时间为38.9～41.0 h.斑点叉尾(鱼回)肾脏细胞的集落形成效率为(74.16±3.54)%,第9代传代细胞的染色体数目为正常二倍体2n=58,第33代传代细胞的染色体众数为60.液氮冷冻保存6个月后复苏的细胞经台盼兰染色检验,(86.69±1.04)%的细胞仍保持活性,细胞复苏后培养生长旺盛.通过对第17代离体培养细胞的28S rRNA基因进行PCR扩增及序列分析与比对,表明该细胞系来源于斑点叉尾(鱼回).[中国水产科学,2009,16(1):75-81]