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兔出血症病毒RT-PCR检测方法的建立及应用 总被引:3,自引:0,他引:3
摘要:按照GenBank上公布的兔出血症病毒(RHDV)基因序列设计一对引物,以RHDV发病兔的新鲜肝为材料,提取总RNA,进行cDNA的合成和PCR扩增,结果能扩增出与预期的269bp大小一致的片段,该产物序列与公布的RHDV基因序列有95.8%~98.5%的同源性,表明已成功建立了RHDV RT-PCR检测方法。用该方法和血凝实验(HA)对兔出血症发病兔各组织脏器进行检测,结果表明,发病死亡兔各脏器中,HA检测阳性的病料为肝脏、肾脏、脾脏、血液、肺;RT-PCR检测除粪便外,其它均为阳性,其敏感性是HA的4×104倍。RT-PCR方法检测RHDV敏感度高、特异性强、重复性好,不仅可用于RHD临床诊断和流行病学调查,而且在兔肉等兔类产品的检疫方面具有很好的应用前景。 相似文献
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通过RT-PCR方法扩增上海地区兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白基因(VP60).将其克隆入腺病毒表达载体系统中,构建成重组腺病毒质粒,用脂质体法转染HEK293细胞,得到重组病毒pAd-VP60,经RT-PCR、IFA、HA、SDS-PAGE和Western-blotting鉴定,结果表明重组VP60蛋白在HEK293细胞中获得表达.表达产物与铝胶佐剂混合后注射3月龄非免疫健康家兔,结果表明,免疫后21 d兔体内产生抗RHDV抗体,其HI效价可达2~6~2~7,能抵御HA≥2~(10)致死剂量RHDV强毒的攻击,保护率为100%. 相似文献