高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒JXA1株Nsp2基因分段克隆表达及其单克隆抗体的制备

分析猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV）非结构蛋白Nsp2,扩增和克隆JXA1株Nsp2基因的4个片段,并将它们分别插入pGEX-6P-1表达载体构建重组表达质粒,经IPTG 诱导表达得到蛋白,纯化后进行活性鉴定。以分段表达的蛋白为抗原,建立间接ELISA方法用于杂交瘤细胞株的筛选。用PRRSV NVDC-JXA1株灭活疫苗对BALB/c小鼠进行常规免疫,最后一次用活毒加强免疫,取其脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇作用下融合,经过选择性培养、有限稀释筛选到1株针对Nsp2的杂交瘤细胞株6B8。鉴定结果表明,该株杂交瘤细胞仅与4个蛋白片段中的Nsp2F1有反应,细胞经长期体外培养和冻存后复苏能稳定分泌抗体,上清效价达1∶210,腹水效价达1∶106。本研究成功表达了4个PRRSV JXA1株的非结构蛋白Nsp2的片段,以其为抗原建立筛选方法,得到1株针对Nsp2的单克隆抗体,为研究Nsp2功能和建立相关诊断方法奠定物质基础。     

高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒JXA1株Nsp2基因分段克隆表达及其单克隆抗体的制备

分析猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)非结构蛋白Nsp2,扩增和克隆JXA1株Nsp2基因的4个片段.并将它们分别插人pGEx-6P-1表达载体构建重组表达质粒,经IPTG诱导表达得到蛋白,纯化后进行活性鉴定.以分段表达的蛋白为抗原,建立间接ELISA方法用于杂交瘤细胞株的筛选.用PRRSVNVDC-JXA1株灭活疫苗对BALB/c小鼠进行常规免疫,最后一次用活毒加强免疫,取其脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇作用下融合,经过选择性培养、有限稀释筛选到1株针对Nsp2的杂交瘤细胞株688.鉴定结果表明,该株杂交瘤细胞仅与4个蛋白片段中的Nsp2F1有反应,细胞经长期体外培养和冻存后复苏能稳定分泌抗体,上清效价达1:210,腹水效价达1:106.本研究成功表达了4个PRRSV JXA1株的非结构蛋白Nsp2的片段,以其为抗原建立筛选方法,得到1株针对Nsp2的单克隆抗体,为研究Nsp2功能和建立相关诊断方法奠定物质基础.     

马巴贝斯虫Be82基因截短片段的克隆与表达

本实验在人工合成马巴贝斯虫Be82／236-381A基因的基础上,通过PCR扩增、酶切、串联的连接方法构建了3个Be82／236-381基因截短片段,并连接克隆于pGEX-4T-1中进行了重组蛋白表达。经PCR鉴定,3个重组表达的Be82／236-381基因截短片段的大小分别为192bp、306bp和420bp,与国外发表的基因序列进行比对,其核苷酸的同源性分别为100％、97．3％和96．6％。经SDS．PAGE电泳鉴定,3种融合表达蛋白分子量分别为33ku、37ku和42ku。经ELISA检测,3种融合表达的蛋白均能与马巴贝斯虫阳性血清发生特异性反应。     

重酸性稻田施用石灰对水稻生产的影响

景德镇市土壤酸化比较严重,pH值低于4.8的农田达到了58.1%,已成为制约该市粮食生产的又一瓶颈因素。为此我们开展了试验,以期找到降低土壤酸度的方法。试验设计5个处理,其中设在农户施肥基础上每公顷施石灰900 kg处理一个;设在农户施肥基础上每公顷施石灰1 800 kg处理两个,其中一处理石灰分2次施下,播种前每公顷施石灰900 kg,2叶1心期每公顷施石灰900 kg。试验结果表明,施用石灰效果明显,尤以石灰分两次施下的处理效果显著;与空白比,施用石灰处理的pH提高了0.2~0.4;与农户施肥比,施用石灰处理的千粒重增加了0.07~0.12 g,产量提高了1.35%~4.66%,其中每公顷施1 800 kg石灰处理纯收入增加了76.5~295.2元。     

陕西秦巴山区金荞麦资源调查

通过室内查阅标本和文献并结合野外实地调查,调查了位于自然分布区最北端的陕西秦巴山区农业野生药用植物金荞麦(Fagopyrum dibotrys)的资源和分布特征。结果表明:陕西秦巴山区金荞麦分布较广;资源相对稀少;药材达到《中国药典》(2005年版一部)标准;该区是金荞麦的适生地区。     

百菌消—30对猪繁殖呼吸障碍综合征病毒消毒效果试验

猪繁殖呼吸障碍综合征 (PRRS)给养猪业造成了巨大的经济损失。该病的控制有赖于采取综合防制措施 ,其中采用适宜的消毒剂定期消毒是防制该病的有效措施之一。因此 ,通过实验确定一种对PRRSV有良好杀灭作用的消毒剂 ,对生产实践具有重要的指导作用。百菌消 - 30是美国辉瑞公司开发的新型消毒药 ,本文试验了其对猪繁殖呼吸障碍综合征病毒的消毒效果 ,报告如下。1　材料与方法1 .1　试验材料　百菌消 - 30 (Biocid- 30 )由美国辉瑞公司提供 ,批号 7461 2 9。 PRRS病毒 ATCC VR-2 332及 Marc- 1 45细胞为本中心保存。将 PRRS病毒接种 …     

苹果NLP（Nin-Like Protein）转录因子基因家族全基因组鉴定及表达模式分析

【目的】探究苹果NLP转录因子全基因组特征与表达模式,以便更深入地了解其结构特点与作用机制。【方法】基于本地BLAST数据库和Pfam数据库两大数据库,运用blastp和hmmsearch两种查询策略,对苹果全基因组范围内的NLP转录因子家族成员进行鉴定。经过严格筛选与确认后,对搜索结果进一步展开分析,主要分为3部分,包括NLP蛋白分析、NLP分析与苹果NLP表达分析,其中ProtParam、Clustal Omega、MEGA7、MEME 5.0.2、SOPMA、Phyre ²、WoLF PSORT、STRING等程序或软件用于蛋白质分析,基因分析使用MG2C、GSDS 2.0、PlantCARE、psRNATarget等在线工具,对于苹果NLP表达情况利用qRT-PCR进行定量检测。【结果】从苹果全部蛋白数据库中共筛选出6个NLP成员,系统进化分析可将它们分为I、II、III三类;蛋白二级结构以无规则卷曲为主,其次是α-螺旋,占比最小的是β-转角;亚细胞定位预测均定位于细胞核中,符合转录因子的特征;染色体定位显示5个基因（MDP0000584547除外）定位于4条染色体上;启动子分析发现大量与激素和逆境响应相关的顺式作用元件,暗示它们可能参与到激素和逆境信号的调控过程中,此外还识别到一个响应氮的GCN4作用元件,进一步说明该类转录因子与氮素有密不可分的关系;通过定量检测揭示苹果NLP家族在茎、叶等组织高表达的特征模式,并且表达分析结果也证实苹果NLP响应氮饥饿、干旱胁迫等。【结论】通过对苹果全基因组的分析,共识别6个NLP转录因子,对6个基因的结构与蛋白保守域分析,发现它们之间具有极高的相似性、保守性,同时又存在差异。类比拟南芥NLP蛋白的关联网络,推测与拟南芥NLP7同源性最高的MDP0000132856可能也具有复杂的功能。     

木聚糖酶对断奶仔猪生长与代谢及血液中某些生理生化指标的影响

为了给木聚糖酶的生产应用和深入研究提供依据,选用48头27～29日龄杜洛克×大约克×长白三元杂交断奶仔猪,研究小麦基础日粮添加木聚糖酶对断奶仔猪生长、代谢和血液中某些生理生化参数的影响.将供试仔猪分为玉米基础日粮组(Ⅰ)、小麦基础日粮组(Ⅱ)和小麦基础日粮添加0.02%木聚糖酶组(Ⅲ).预试期6d,试验期28d.结果表明,Ⅰ组较Ⅱ组仔猪日增重提高5.38%(p>0.05);Ⅲ组较Ⅱ组仔猪日增重提高8.52%(p<0.05),但对仔猪饲料转化率无明显影响;Ⅰ组与Ⅱ组相比,仔猪血液尿素氮含量极显著降低(p<0.01),血清胃泌素和T4含量显著升高(p<0.05),葡萄糖含量显著降低(p<0.05),其他指标变化不显著;而Ⅲ组较Ⅱ组仔猪血液尿素氮含量极显著升高(p<0.01),血糖,T4,白细胞介素2(IL-2)和血清胃泌素含量显著升高(p<0.05),T3含量有上升趋势,胰岛素(Ins)含量却略有下降.结果提示,小麦日粮中添加木聚糖酶可以显著提高仔猪增重,甚至超过玉米日粮;木聚糖酶可以通过影响仔猪代谢和免疫而促进仔猪生长.