鸡新城疫病毒F基因部分片段克隆表达及其抗体制备

[目的]为进一步研究新城疫病毒的分子结构和基因疫苗奠定基础。[方法]用自行设计的l对引物,通过RT-PCR从接毒的SPF鸡胚的尿囊液中克隆了新城疫病毒F基因部分片段,将该基因片段插入含谷胱甘肽(GST)基因的质粒pGEX-4T-1,构建了重组质粒,对提取的融合蛋白进行亲和层析纯化和琼扩、ELISA及W estern-blot检测。[结果]通过克隆和PCR扩增获得新城疫病毒F基因的部分片段,大小为509 bp;对构建的重组质粒pGEX-4T-1-F509经诱导表达,获得分子大小约为44 000 bp的融合蛋白,其中F基因的部分片段大小约18 000 bp;经亲和层析,获得纯化GST-F509融合蛋白,进一步用该蛋白免疫小鼠,制备了鼠源抗鸡新城疫病毒F蛋白抗体。[结论]琼脂扩散试验、ELISA及W estern-blot检测表明,该融合蛋白中的F片段具有良好的抗原性。     

作物品种鉴定和纯度分析技术研究进展

作物品种鉴定和纯度分析是农业生产、作物育种和种子检验上的重要方法,也是保护作物新品种、防止假冒伪劣品种进入市场、维护农民利益的重要手段。随着世界各国制定了一系列的作物种子检验和质量标准,品种及其纯度鉴定技术引起了人们的极大关注。因此,对作物品种鉴定和纯度分析     

莽山不同次生林土壤有机碳分布与土壤物理性质的相关性

[目的]探讨湖南莽山国家级自然保护区三类次生林土壤有机碳(SOC)分布特征与土壤物理性质的关系,为该地区森林土壤碳储量的准确计量及森林土壤固碳增汇提供参考依据.[方法]在海拔1230~1300 m区域内的杉木、粤松林和竹林内设9个固定标准地,采集不同层次土壤样品32个,测定其SOC、土壤容重及田间持水量,运用方差分析、相关分析及回归分析法研究不同植被类型SOC分布特征及其与土壤容重和田间持水量间的关系.[结果]杉、松、竹三类林地不同土层SOC含量存在显著差异(P<0.05,下同),随土壤深度增加呈递减趋势;不同林分变化幅度差异不同,且各土层间的差异达显著水平.三类林地0~40 cm土层SOC存贮有机碳在整个土层所占比重不同,分别为77.7%、77.1%和85.9%.经回归分析发现,杉、松、竹三类林地SOC和土壤容重拟合值R分别为0.632、0.727和0.615,杉木林SOC含量与土壤容重呈极显著相关(P<0.01,下同);三类林地SOC含量与田间持水率均呈极显著或显著正相关.方差分析结果表明,黏粒、粉粒、砂粒含量在同一土层中的三类林地间存在极显著差异;黏粒、粉粒、砂粒含量与SOC含量相关不显著(P>0.05),而砂粒与黏粒、粉粒存在极显著负相关.杉、松、竹三类林地砂粒含量在土壤垂直剖面各层均高于黏粒、粉粒含量.[结论]莽山不同次生林SOC与土壤物理性质密切相关,土壤容重、田间持水量、土壤机械组成等物理性质可作为营林和增加森林土壤碳汇的参考指标.     

长江中下游稻茬小麦超高产群体干物质积累与分配特性

为给长江中下游稻茬小麦超高产(>9 000 kg·hm-2)生产提供理论与实践依据,以中筋小麦新品种扬麦20为材料,通过氮素运筹(氮肥施用量、施用时期和比例)和基本苗调控建立稻茬小麦不同产量水平群体,研究超高产群体干物质积累与分配特性。结果表明,合理调控拔节期至孕穗期及适量增加孕穗期至开花期群体干物质积累量,在开花期干物质积累适量的基础上,重点促进花后干物质积累量,增加成熟期干物质积累量,是长江中下游稻茬小麦实现超高产的关键。稻茬小麦超高产群体开花期干物质积累量为12 800～13 600 kg·hm-2,花后及成熟期干物质积累量分别达7 200、20 000 kg·hm-2以上。开花期群体叶片干物质积累量与花后、成熟期干物质积累量呈抛物线关系,茎鞘、穗干物质积累量与成熟期干物质积累量呈极显著线性正相关,表明开花期叶片干物质积累量达到3 300～3 400 kg·hm-2,茎鞘、穗干物质积累量分别达7 500、2 000 kg·hm-2以上,有利于提高群体花后干物质积累量和产量。     

广西区级动物标识及疫病可追溯体系建设

动物标识及疫病可追溯体系分为动物标识申购与发放管理系统、动物生命周期各环节全程监管系统、动物产品质量安全追溯系统三大部分。追溯体系的建立和完善,在广西动物防疫和检疫监督工作中发挥了重要作用,为畜牧业持续、快速、良性发展保驾护航。     

应用Pull-down方法获得鸡B-LB分子中结合恒定链的活性片段

本研究旨在探明鸡(Gallus gallus)主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅱ类分子(B分子)中与恒定链(invariant chain,Ii)结合的活性片段,以了解和深入研究Ⅱ类分子与Ii在递呈抗原肽中的作用机理.从实验室保存的B-LB基因的cDNA克隆了3个结构片段分别插入原核和真核表达质粒,再将其分别转染或者与li共转染工程菌Rosetta (DE3),诱导表达后先后用亲和层析和拉下法(pull-down)、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测其纯度和形成的复合物.然后用免疫印迹(Western blot)验证复合物的性质以及真核表达验证这些片段在细胞内的表达和定位.首先,构建的3个重组质粒pGEX-4T-1-B-LB-Sβ1、pGEX-4T-1-B-LB-β1和pGEX-4T-1-B-LB-β2TC均能单一表达目的蛋白B-LB-Sβ1、B-LB-β1和B-LB-β2TC,并被纯化.其次,在共表达和pull-down中,B-LB-Sβ1和B-LB-β1能够与Ii形成复合物,而B-LB-β2TC不能与Ii结合,因为免疫印迹的结果表明,特异性抗体能识别在poll-down中被结合的这两个目的蛋白.最后在真核表达系统中,也证实B-LB-Sβ1、B-LB-β1能保持B-L分子在293T细胞的浆膜系统定位的功能,而B-LB-β2TC却丧失了该定位功能.本研究结果首次提供了Ⅱ类分子结合Ii的活性片段的证据.     

鸡Rab7b在细胞晚期内吞体定位和结合恒定链的分子特征

Rab蛋白是介导胞内活性蛋白转运的分子家族。恒定链（invariant chain，Ii）具有协助抗原肽转运、B细胞成熟和作为细胞因子的受体等免疫学功能。前期研究发现，鸡（Gallus gallus）Rab5a在细胞早期内吞体中与Ii结合，但不清楚是否还有其他转运蛋白有该特性。基于Rab7b分子定位于晚期内吞体，并与胞内分子转运相关，本研究探索了鸡Rab7b与Ii结合的分子结构特征。首先，用自行设计的引物扩增了鸡和小鼠（Mus musculus）Rab7b基因，并进行了氨基酸同源性比对分析；构建了含鸡Rab7b及其67位氨基酸突变体Rab7bQ67L的原核和真核重组质粒。其次，将含红色荧光蛋白和目的基因的重组质粒转染鼠巨噬细胞系Raw264.7，培养后用绿色荧光素（FITC）标记的鼠抗晚期内吞体蛋白1（LAMP1）抗体染色，观察目的蛋白在内吞体的定位。进一步将鸡Rab7b和Rab7bQ67L分别与Ii共转染293T细胞，观察它们与Ii的共定位。最后用拉下法和免疫印迹检测鸡Rab7b及Rab7bQ67L与Ii的结合。结果表明，所克隆获得的鸡Rab7b基因与预期大小一致，其开放阅读框为624 bp，编码208个氨基酸。鸡和鼠的Rab7b蛋白质结构相似性为74%。尽管鸡Rab7b和突变体Rab7bQ67L均能结合Ii，但只有Rab7b可以定位于晚期内吞体，而突变体却改变了该定位特性。综上所述，鸡Rab7b与Ii不仅在晚期内吞体共定位，而且还能互相结合；鸡Rab7b的第67位氨基酸影响其在细胞内定位而不影响与Ii结合。综上表明，Rab分子参与了Ii在细胞内细胞器的转运，为进一步研究Ii在细胞内的转运机制提供了新的途径。     

特定油菜盛花期全量还田对水稻生长的影响

本试验通过对9队油菜秸秆还田处理小区与对照小区的水稻全生育期苗情、病虫害发生情况进行对比,探索特定油菜BFMG-01盛花期全量还田对水稻生长的影响。由试验看出,秸秆还田小区水稻分蘖早生快发,后期成穗数略高于空白对照小区,实收亩产较空白对照小区高40.5kg；对飞虱、纹枯病有一定的抑制效果。     

鸡MHC Ⅰ类分子克隆及其二聚体融合

为进一步研究MHCI类分子作用机制,以及为制备MHCI基因工程疫苗奠定基础,克隆鸡MHCⅠ基因,并构建MHC Ⅰβ2m-a融合基因进行原核表达.运用RT-PCR方法,克隆鸡MHC Ⅰa和β2m链基因,并通过编码连接肽(Gly4 Ser).的基因序列将两者头尾相连,构建了pET-32a-MHC Ⅰβ2m-a重组质粒,经PCR扩增、双酶切和测序鉴定后,重组质粒在E.coliBL2 Ⅰ细胞进行IPTG诱导表达融合蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting方法分别检测表达产物.结果表明,成功克隆了MHCⅠa和β2m链基因,长度分别为1014和300 by;构建的融合基因MHCⅠβ2m-a长度为1194 by,经原核表达,融合蛋白分子质量约为62.0 ku,能与相应的抗体结合,具有一定的免疫学活性.     

浅析韩国的农产品贸易影响因素以及对我国农产品贸易的发展启示

中韩两国隔海相望,地形地貌接近,农业发展模式较为相似。因此从韩国农产品贸易出发,研究影响韩国农产品贸易因素对于我国农产品贸易发展具有重要意义。有利于促使我国农产品贸易更加重视提高农业生产效率和国际竞争力、增加农民收入、慎重贸易保护以及加强宣传引导等因素,必将会促进我国农产品贸易健康有序发展。