共表达鹅细小病毒VP3-gIL2重组乳酸杆菌的构建及其口服免疫评价

笔者拟构建共表达鹅细小病毒(GPV)VP3和鹅白细胞介素-2(IL-2)的分泌性重组乳酸杆菌,评价口服表达融合蛋白GPV VP3-gIL2的重组乳酸杆菌的免疫效果。通过酶切将VP3基因和IL-2基因连接,并在其5′端连入乳酸杆菌的信号肽基因SP,亚克隆到乳酸杆菌整合表达载体pMJ67,电转化入干酪乳杆菌L.CECT5276,SDS-PAGE和Western blot法鉴定重组菌GPVVP3-gIL2融合蛋白的表达活性。将重组乳酸杆菌口服免疫雏鹅后检测血清GPV抗体、小肠黏液sIgA和脾淋巴细胞增殖情况,评价其免疫效果。结果表明,酶切和测序结果表明成功构建重组表达载体pMJ-SP-GPVVP3-gIL2,PCR证实质粒pMJ-SP-GPVVP3-gIL2成功整合到乳酸杆菌基因组;Western blot表明重组乳酸杆菌分泌表达的融合蛋白GPVVP3-gIL2能与GPV阳性血清特异性结合;淋巴细胞增殖试验表明口服重组菌后能特异地刺激脾淋巴细胞增殖,且在第4、5、6周明显高于GPV VP3组和gIL2组;重组乳酸杆菌口服免疫雏鹅可以产生抗VP3蛋白抗体,且具有中和活性的抗体显著高于GPV VP3组;小肠黏液sIgA细胞生成的数量自第2周较GPV VP3组和疫苗组显著上升。动物攻毒试验结果显示GPV VP3-gIL2融合蛋白免疫组能够获得85%的保护率,表明所构建的重组乳酸杆菌口服后对GPV的攻击具有较好的免疫保护作用。本试验成功构建能稳定表达GPV VP3-IL2融合蛋白的口服乳酸杆菌工程菌,为研究其作为口服疫苗奠定了基础。     

无角多赛特绵羊球虫感染情况和种类调查初报

应用饱和盐水漂浮法和麦克马斯特法对河南某种羊场新引进的82只1岁左右无角多赛特绵羊球虫感染情况和种类进行了调查,结果表明:10圈绵羊均感染球虫,感染率28.57%￣100%,平均为84.2%(69/82);多为2￣5种球虫混和感染;平均OPG值为839.03(200￣4200)。共检出11种艾美耳球虫,分别是:韦不理吉艾美耳球虫(Eimeria weybridgensis)、巴库艾美耳球虫(E.bakuensis)、小型艾美耳球虫(E.parva)、类绵羊艾美耳球虫(E.ovinodalis)、颗粒艾美耳球虫(E.granulosa)、槌形艾美耳球虫(E.crandllis)、阿撒他艾美耳球虫(E.ahsata)、浮氏艾美耳球虫(E.faurei)、贡氏艾美耳球虫(E.gon-zalezi)、爱缪拉艾美耳球虫(E.aemula)、苍白艾美耳球虫(E.pallida),其中前4种为优势虫种。用Miaspro图象分析处理系统软件对各种卵囊进行了测量,并进行了显微照相和形态描述。     

猪源隐孢子虫Hsp70基因的测定与种系发育关系分析

从河南两个地区猪的粪便中分离纯化了猪源隐孢子虫卵囊。参考隐孢子虫Hsp70基因属特异性引物,用PCR分别扩增了卵囊基因组DNA大小均为1 948 bp的片段,PCR产物经电泳鉴定后用试剂盒回收纯化,纯化后PCR产物直接测序。将测得的序列和推测出的氨基酸序列分别用ClustalX软件与已报道的相应序列比对,用DNASTAR中的MegAlign分析其同源性,并用PAUP绘制系统发育进化树。序列分析结果显示河南猪源隐孢子虫两个分离株Hsp70 DNA序列的同源性为99.9%,与其他隐孢子虫相应序列同源性介于81.9%~99.8%之间,其中与猪隐孢子虫(Cryptosporidium suis,AF221533)同源性最高分别为99.8%,97.9%;与安氏隐孢子虫(C.andersoni,AY954592)同源性最低。两个分离株推导Hsp70氨基酸序列的同源性为100%,同其他隐孢子虫相关序列的同源性在92.8%~99.8%之间。本研究为隐孢子虫诊断及流行病学研究打下了良好基础。     

4种粪便检查方法在球虫病临床检测中的应用效果评价

为了评价不同粪便检查方法在球虫病预防性检测和临床病例诊断中的应用效果，本研究通过在无球虫鸡新鲜粪便中添加不同浓度的柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊模拟临床样品，共8个梯度，然后用改进型直接涂片法、水洗沉淀法、饱和氯化钠溶液漂浮法和改进型麦克马斯特虫卵计数法进行检测和计数。结果显示，改进型直接涂片法检测下限为6000个/g，水洗沉淀法检测下限为3000个/g，这两种方法镜下检测均有大量杂质。饱和氯化钠溶液漂浮法检测下限为100个/g，改进型麦克马斯特虫卵计数法检测下限为300个/g，二者镜下视野中杂质含量均较少。添加回收试验结果显示，改进型麦克马斯特虫卵计数法平均回收率为82.2%，平均变异系数为3.7%；3~5 g为最佳检测粪样重量，具有较高的准确性和可重复性。综合考虑，改进型麦克马斯特虫卵计数法是一种理想可靠的球虫病临床检测方法，在集约化养殖场畜禽球虫病防控中具有重要的推广价值。     

一株血清9型副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验

【目的】确定河南某猪场送检病猪疑似副猪嗜血杆菌的血清型,为其提临床用药提供参考。【方法】经实验室分离培养,对分离到的病原菌进行生化鉴定、药敏试验和血清型分型。【结果】该分离菌革兰氏染色为阴性短杆菌,具有多形性;发酵葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖,甘露醇、木糖、尿素、氧化酶阴性,硝酸还原酶、接触酶阳性,MR和VP试验阴性,有卫星现象;16Sr RNA扩增出了821 bp目的片段,测序结果与GenBank公布的副猪嗜血杆菌NR_118757.1同源性达98%以上;分离到的细菌对头孢噻呋、阿米卡星、硫酸黏菌素、甲砜霉素、卡那霉素、庆大霉素、多西环素、氟苯尼考高敏,对阿莫西林、恩诺沙星耐药;采用14对分型引物对分离菌进行血清型分型,多重PCR扩增到700 bp左右大小的目的基因片段,测序结果与GenBank公布的KC795429.1副猪嗜血杆菌funV同源性达99.85%,确定该分离菌株为9型副猪嗜血杆菌。【结论】本研究结果将为副猪嗜血杆菌的防治提供参考。     

河南猪隐孢子虫病流行病学调查及动物感染试验

为了掌握河南猪隐孢子虫(Cryptosporidium)的感染情况,用饱和糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法调查了郑州、许昌、漯河和禹州等地市6个猪场共417份粪样,并进行了固始品种雏鸡和昆明系小白鼠和长大二元杂交仔猪的动物感染试验.结果表明,根据形态大小初步鉴定为小球隐孢子虫(Cryptosporidium parvum),平均感染率为10.95%,20日龄以前的仔猪未感染,21~40日龄的的仔猪感染率为12.20%,41~60日龄的仔猪感染率为21.19%;猪源隐孢子虫分离株(sucp)不感染5日龄固始品种雏鸡和18日龄正常的昆明系小白鼠,但是能感染免疫抑制小白鼠,对4日龄仔猪有较强的致病性,并且出现严重的拉稀、脱水等症状.组织切片用H.E染色观察结果显示,sucp株寄生在小白鼠的十二指肠、空肠和回肠以及仔猪的盲肠、结肠和直肠.     

鸡柔嫩艾美耳球虫体内瞬时转染系统的建立

本研究通过限制性内切酶介导的整合转染,将球虫表达载体pEtHEA转染的柔嫩艾美耳球虫子孢子经泄殖腔接种到4日龄AA雏鸡的回盲口.在不同时间段在荧光显微镜下检测黏膜内容物内虫体是否表达黄色荧光蛋白;另外还收集粪便中的卵囊,观察其是否同样表达黄色荧光蛋白.结果显示,转染后的柔嫩艾美耳球虫可以在体内发育阶段及卵囊阶段均表达黄色荧光蛋白,表明本研究建立了球虫体内瞬时转染系统,能简便可靠的检测黄色荧光蛋白在球虫内的瞬时表达.为进一步球虫的稳定转染提供了有力的技术支持.     

河南省家兔主要疫病调查

随着人民生活水平的日益提高,兔肉以其高蛋白质、高赖氨酸、高磷脂、高消化率、低脂肪、低胆固醇,受到越来越多的消费者的青睐;兔皮、兔毛在制衣、制鞋等轻工业上的应用日益广泛。养兔不仅节粮,而且投资少,见效快,周期短,成为许多人首选的项目,养殖规模逐渐扩大。但是,由于缺乏养殖技术,不懂疫病防治技术,结果造成很大经济损失。为了摸清我省家兔主要疫病流行情况,找出最佳防治办法,为养兔业发展保驾护航．我们开展了本次调查,现将有关情况报告如下：     

奶牛新孢子虫病的巢式PCR诊断及ELISA检测

为确定焦作某奶牛场奶牛流产是否与新孢子虫感染有关,对采自该奶牛场流产奶牛的胎牛组织进行新孢子虫Nc5基因巢式PCR检测诊断,并用ELISA方法对该奶牛场不同年龄阶段奶牛血清样品进行新孢子虫抗体检测。结果显示,在4例流产胎牛样本中有3例检出新孢子虫DNA;新孢子虫血清抗体阳性率达44.80%(112/250),其中,经产奶牛阳性率为55.40%(77/139),未经产奶牛或犊牛阳性率为31.53%(35/111);经产奶牛中有流产史的阳性率为73.17%(30/41),其余未发生过流产的阳性率为47.96%(47/98)。综上推断,新孢子虫是导致该奶牛场奶牛流产的主要病原。     

柔性教育理念下动物药学本科培养模式的思考

动物药学是一门关于动物用药品的来源、化学、制剂、药理、毒理及生产应用的综合知识的学科.在"药剂养殖"时代,食品动物的商品化生产,从饲料、营养、保健、促产乃至提高产品质量都需要使用药物,动物药物的使用不仅是保护动物的健康,更重要的是保护环境及保护人类健康,促进人类社会的可持续发展.