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羊口疮是由口疮病毒(orf virus,ORFV)引起的接触性、嗜上皮性的传染病。020基因是该病毒重要的酶活力调节蛋白。根据Gen Bank中020基因的序列设计引物,从ORFV-F10株感染的病料中提取DNA,PCR扩增获得目的基因。然后将其亚克隆至p ET-32a(+)原核表达载体,构建重组表达质粒p ET-32a-ORF-020。鉴定正确后转化BL21感受态细胞,进行IPTG诱导表达。表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析。最后将纯化的020蛋白免疫BALB/c雌鼠,制备多抗血清。SDS-PAGE结果表明,ORFV 020基因在体外获得正确表达,大小约37 k Da。Western-blot结果表明,制备的多抗血清能够与020蛋白发生特异性反应具有良好的反应原性。 相似文献
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为了对羊口疮病毒(ORFV) AH-F10株127基因进行原核表达及亚细胞定位,本试验采用PCR方法扩增出ORFV127基因,成功构建原核表达重组质粒pG EX-6p-1-ORFV127和真核重组质粒pE GFP-N1-ORFV127。将原核表达重组质粒转化到大肠埃希氏菌中表达,并进行纯化和鉴定。以纯化的蛋白质免疫BALB/c雌鼠制备多克隆抗体,利用Western-blot技术鉴定其反应原性。利用脂质体介导法将重组质粒pE GFP-N1-ORFV127转染至Vero细胞,通过倒置荧光显微镜观察其在细胞中的表达及亚细胞定位。结果表明,获得的ORFV127基因序列全长为558bp,ORFV127蛋白在大肠杆菌中获得高效表达,主要以包涵体蛋白质的形式表达,大小约49 000。Western-blot结果显示,免疫小鼠获得的抗ORFV127蛋白的多克隆抗体可特异性识别ORFV127蛋白,倒置荧光显微镜观察发现,ORFV127蛋白主要定位于细胞质。本试验结果为后续研究ORFV127蛋白的功能提供了宝贵的生物材料。 相似文献
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肉牛剖腹产手术的效果取决于术前准备、施术过程中的每个环节和术后的护理.主要对保定和麻醉、手术切口的选择、手术过程的相关问题以及剖腹产后不孕的预防等进行了介绍,以期为兽医工作者进行肉牛剖腹产和预防术后不孕提供参考. 相似文献
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探讨麦芽糖结合蛋白-促性腺素释放激素六聚体(MBP-GnRH-I6)主动免疫对猫睾丸和附睾的影响。选取12周龄左右,体重1.0~1.2kg健康雄猫10只,随机分成免疫组(n=5)与对照组(n=5)。16周龄时给免疫组猫每只颈部肌肉注射MBP-GnRH-I6,22周龄时加强免疫1次。以同样的方式与剂量给对照组猫每只注射MBP。免疫前称重,以后每2周称重1次。28周龄时手术摘除睾丸和附睾,称重,取组织进行石蜡切片,HE染色,光学显微镜下观察组织结构变化,并用Motic Image Plus 2.0软件分析图片。免疫后,免疫组雄猫的体重与对照组相比没有差异(P0.05)。免疫组雄猫的睾丸和附睾重量减少(P0.05)。组织切片显示:免疫组睾丸的曲精小管管腔内较空荡,细胞层数减少;附睾管内没有精子,附睾管腔变小,静纤毛变短。曲精小管与附睾管的纵径、横径、周长和面积与对照组相比明显减小(P0.05)。曲精小管内的精原细胞、初级精母细胞、精子细胞和精子显著小于对照组(P0.05)。本试验表明GnRH-I主动免疫不影响猫的体重增长,但抑制猫的睾丸和附睾的发育。 相似文献
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采用免疫组化技术链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(StreptAvidin-Biotin-Complex,SABC)法,对成年皖西白鹅大脑和小脑中ghrelin神经元的定位和分布进行了研究。结果显示,大脑分泌ghrelin的神经元和神经纤维主要分布在大脑皮质内,其中锥体层阳性神经元数量最多,多为锥体细胞;小脑分泌ghrelin的神经元主要分布在小脑皮质内,其中蒲肯野细胞层和分子层免疫阳性神经元数量最多,颗粒层阳性神经元数量较少;而大脑和小脑白质内均未见分布。这表明ghrelin在成年皖西白鹅大脑和小脑皮质中分布广泛,可能以自分泌/旁分泌的形式调节中枢神经系统。 相似文献
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运用免疫组化PV-9000二步法和DAB显色技术,研究Kisspeptin在青春期雌性皖西白鹅下丘脑和垂体的定位.免疫组化DAB显色结果表明,在下丘脑后内侧核、室周弓状核和室旁核均可观察到大量Kisspeptin免疫反应阳性神经元,下丘脑室周区及外侧区也可观察到不同程度的Kisspeptin阳性细胞;腺垂体中亦可见少量免疫阳性产物,但神经垂体无阳性细胞.Kisspeptin在雌性青春期皖西白鹅下丘脑和垂体中均有分布,初步揭示Kisspeptin在调节促性腺激素的分泌和参与生殖调控以及青春期的启动中均具有非常重要的作用. 相似文献
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