羊口疮病毒127基因的克隆表达及亚细胞定位分析

为了对羊口疮病毒(ORFV) AH-F10株127基因进行原核表达及亚细胞定位,本试验采用PCR方法扩增出ORFV127基因,成功构建原核表达重组质粒pG EX-6p-1-ORFV127和真核重组质粒pE GFP-N1-ORFV127。将原核表达重组质粒转化到大肠埃希氏菌中表达,并进行纯化和鉴定。以纯化的蛋白质免疫BALB/c雌鼠制备多克隆抗体,利用Western-blot技术鉴定其反应原性。利用脂质体介导法将重组质粒pE GFP-N1-ORFV127转染至Vero细胞,通过倒置荧光显微镜观察其在细胞中的表达及亚细胞定位。结果表明,获得的ORFV127基因序列全长为558bp,ORFV127蛋白在大肠杆菌中获得高效表达,主要以包涵体蛋白质的形式表达,大小约49 000。Western-blot结果显示,免疫小鼠获得的抗ORFV127蛋白的多克隆抗体可特异性识别ORFV127蛋白,倒置荧光显微镜观察发现,ORFV127蛋白主要定位于细胞质。本试验结果为后续研究ORFV127蛋白的功能提供了宝贵的生物材料。     

冷应激对家鸡雏鸡和贵妃雏鸡消化器官影响的观察

本实验采用10日龄家鸡雏鸡和贵妃雏鸡进行急性冷应激（12h、24h）、慢性冷应激（3d,7d）实验（比常温低10℃）,宰杀后比较两种雏鸡消化器官的变化。结果表明：急性冷应激期间,两种雏鸡消化器官都有不同程度的充血、出血及溃疡现象．冷应激3天到7天后,家鸡雏鸡消化器官出血、溃疡现象仍比较严重,而贵妃雏鸡消化器官充血、出血以及溃疡现象基本消失。结果提示贵妃雏鸡比家鸡雏鸡抗冷应激能力强。     

羊口疮病毒安徽株121基因的原核表达与生物信息学分析

为了对羊口疮病毒(ORFV)安徽株121基因进行原核表达及生物信息学分析。以ORFV AH-F10株为模板对121基因进行PCR扩增,将扩增产物克隆至p GEX-6P-1原核表达载体,构建重组质粒p GEX-6P-1-121,并进行测序鉴定。经鉴定正确后的重组质粒转化至E. coli Rosetta感受态细胞进行IPTG诱导表达,并对重组蛋白的诱导条件进行优化,确定了ORFV 121重组蛋白表达的最佳条件。SDS-PAGE及Western-blot鉴定结果表明,重组蛋白大小约为60 ku,在Rosetta中高效表达,主要以包涵体形式存在且具有良好的反应原性。包涵体蛋白经过纯化后得到目的蛋白,将纯化蛋白与弗氏佐剂进行乳化后皮下注射6周龄的BALB/c雌鼠。每14 d后加强免疫1次,4次后收集小鼠血清。对收集到的血清进行Western-blot特异性鉴定,该抗体血清可以和阳性原核表达的ORFV 121蛋白进行特异性反应,表明成功制备鼠源多抗血清。利用生物信息学相关软件对目的基因编码蛋白的理化性质、信号肽、跨膜结构域、磷酸化位点、二级结构和B细胞表位进行预测。结果显示该蛋白等电点为8. 86,属不稳定的亲水性蛋白;预测有50个可能的磷酸化位点,无信号肽和跨膜结构域;二级结构中以无规则卷曲结构居多占62. 25%,α-螺旋、β-转角、延伸链分别占27. 81%,2. 98%,6. 95%;预测该蛋白存在8个潜在B细胞优势表位。成功表达了ORFV AH-F10 121蛋白并预测其生物学特性,为该蛋白结构与功能及ORFV致病机理的深入研究奠定基础。     

鹅星状病毒SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法的建立

为建立快速检测鹅星状病毒(GAstV)的方法,本研究根据GenBank中GAstV ORF2基因序列设计1对特异性引物,构建重组质粒pMD19-T-GAstV,以其作为标准品建立了GAstV的SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法。优化其反应条件及体系,进行特异性、敏感性和重复性试验以及临床样本检测。试验结果显示,除GAstV外,禽白血病病毒(ALV)、血清4型禽腺病毒(FAdV-4)、鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)和鸡传染性贫血病病毒(CIAV)等常见禽病病原利用该方法检测均呈阴性,表明其特异性良好;建立的荧光定量RT-PCR检出的最低模板含量为1μl 3.75×10~1拷贝,敏感性较高;组内和组间重复性试验变异系数均小于1%。利用该方法对来自安徽地区的32份临床样品进行检测,阳性检出率为43.75%,常规PCR方法阳性检出率为18.75%,阳性检出符合率100%,表明该方法可用于临床样品检测。该方法的建立为临床样品中GAstV的快速高效检测提供了技术支持。     

一体化教学的尝试与体会

一体化教学是采用理论与实践相结合的方法,旨在培养学生职业能力、方法能力、社会能力,提高学生的综合素质,是保证职业能力整体培养目标实现的创新型教学模式.几年来我院逐步开展与探索一体化教学的尝试,积累了一些经验,同时也得到了很多启发.     

泌乳盛期奶牛的饲养管理

发展奶牛业,不仅要有优秀的奶牛品种,还应有科学的饲养管理措施。大量的生产实践告诉我们,牛个体之间产奶量差异约70％是环境因素造成的,环境因素中最重要的是饲养管理因素。科学的饲养管理则是发挥奶牛生产潜力的重要条件。本文从预付饲养法、诱导饲养法、定期交替饲养法、全混饲粮自由采食法、季节饲养法等方面阐述了泌乳盛期奶牛的饲养管理,旨在为广大养牛户提供参考和借鉴,     

牛副结核病及预防

牛副结核病又名副结核肠炎 ,是由副结核分枝杆菌在肠粘膜及相应的淋巴结内繁殖而引起的一种慢性传染病 ,病的显著特征是顽固性腹泻和逐渐消瘦 ,肠粘膜增厚并形成皱襞。本病主要是使牛发生典型的副结核 ,绵羊、山羊和猪也可感染。马、水牛、鹿及骆驼等也有自然感染的报告。海猪、家兔、小鼠、鸡、狗等不感染副结核杆菌。人也有感染此菌的报告。1　诊断根据症状和病理变化 ,一般可作出初步诊断。诊断又分生前诊断和死后诊断 ,生前诊断主要包括临床诊断、粪便检菌和培养及免疫学诊断方法。死后诊断主要是病理学方法及病变组织的涂片和培养。应…     

口疮病毒O2O基因的克隆、表达及多抗制备

羊口疮是由口疮病毒(orf virus,ORFV)引起的接触性、嗜上皮性的传染病.O2O基因是该病毒重要的酶活力调节蛋白.根据GenBank中O2O基因的序列设计引物,从ORFV-F10株感染的病料中提取DNA,PCR扩增获得目的基因.然后将其亚克隆至pET-32a(+)原核表达载体,构建重组表达质粒pET-32a-ORF-020.鉴定正确后转化BL21感受态细胞,进行IPTG诱导表达.表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析.最后将纯化的020蛋白免疫BALB/c雌鼠,制备多抗血清.SDS-PAGE结果表明,ORFV O2O基因在体外获得正确表达,大小约37 kDa.Western-blot结果表明,制备的多抗血清能够与O2O蛋白发生特异性反应具有良好的反应原性.