基于马梨形虫地方虫株EMA和Bc48基因蛋白抗原的间接ELISA检测方法建立及其应用

以筛选马梨形虫地方虫株EMA和Bc48基因最佳抗原蛋白建立间接ELISA检测方法及其临床应用研究为目的,对已构建保存的pGEX4T-1/EMA1、PET-28a/EMA1、PET-28a/EMA2、PET-28a/EMA3、pGEX4T-1/Bc48和PET-28a/Bc48质粒进行优化表达,经KCl方法切胶纯化后作为间接ELISA包被抗原,经表达量、特异性、敏感性、重复性、符合性试验验证,筛选最佳重组抗原蛋白,优化、建立间接ELISA检测方法,并用于临床样品(n=1 584)的抗体检测。结果显示,筛选出的最佳重组抗原蛋白为GST-EMA1和His-Bc48,其可溶性蛋白表达量相比之下较高;以GST-EMA1、His-Bc48蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA可明显区分马梨形虫标准阴性和阳性血清;阳性血清梯度效价可达1∶800;批内重复率分别为96%和94%;与商品化cELISA试剂盒检测结果的符合率为96%。所检测的血清样品中,新疆昭苏、米泉、富蕴、阿克苏及和静样品混合感染率分别为2.27%,6.90%,1.72%,0.74%和1.18%;不同年龄马匹之间感染存在显著性差异(P=0.0000.05)。试验筛选出GST-EMA1、His-Bc48为最佳抗原蛋白,经临床试验验证所建立间接ELISA检测方法的特异性强和灵敏度高,为后期马梨形虫病血清学诊断用间接ELISA商品化试剂盒研制提供实验材料和技术支持。     

卵形巴贝斯虫AMA1基因的克隆与原核表达

为了解卵形巴贝斯虫AMA1基因蛋白特性及免疫活性,本试验用卵形巴贝斯虫特异性引物进行PCR扩增,克隆到pGEX-4T-1中构建BoAMA1重组pGEX-4T-1表达载体,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、Western Blot分析。结果显示,克隆的基因片段长1 042 bp,编码347个氨基酸,与GenBank中相应基因序列(KT312793)的同源性为99.8%。SDS-PAGE分析和Western Blot分析表明,BoAMA1蛋白分子质量约为68 ku,具有较好反应原性。本试验为卵形巴贝斯AMA1基因疫苗研究奠定了基础。     

基于TaqMan qPCR检测凡纳滨对虾样品中虾肝肠胞虫并样检测方法的评价

对山东海阳和潍坊的2个养殖凡纳滨对虾群体取样，采用TaqMan qPCR逐尾检测肝胰腺中的虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei, EHP)载量，再将提取的DNA样品按5并1(5∶1)、25并1(25∶1)、50并1(50∶1)、100并1(100∶1)和150并1(150∶1)进行并样，检测并样的EHP载量。设定不同临界循环数为假定灵敏度，定性判断各单尾检测阳性及并样组阳性，比较不同并样模式与检测阳性率、诊断灵敏度、诊断特异性等之间的关系以及定量的准确性。结果表明，检测灵敏度过低，会降低高并样率检测的准确性；阳性率在30%以上时，高并样率的检测结果与单样品检测相符性很好；高载量感染的阳性率不低于6.7%时，50∶1以内的并样能准确得出检测结果；低载量感染的阳性率不低于16%时，25∶1以内的并样能得出较好结果；高载量感染的1.3%阳性率和低载量感染的8%阳性率可能导致所有并样出现假阴性结果；各种并样模式均有很好的诊断特异性，50∶1并样的诊断灵敏度与OIE标准推荐的5∶1并样的接近；各并样检测的EHP载量与单样品检测平均值之比在0.27~2.83范围，二者存在极显著相关性，各种并样模式的定量检测结果在数量级水平能大致反映样品的平均EHP载量。本研究为水生动物疫病诊断和流行病学调查的样品检测提供了参考依据。     

四氢异喹啉衍生物的合成及体外 抗多子小瓜虫活性的研究

合成四氢异喹啉衍生物并进行杀多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis)药效评价。以1-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉为起始原料，在2位的胺基上引入与环己甲酰氯、苯甲酰氯、噻吩甲酰氯、乙酰氯以及氯乙酰氯等不同的酰基进而合成5种四氢异喹啉衍生物(化合物1~化合物5)，研究其对小瓜虫掠食体和包囊的杀虫活性，并对杀虫活性物质进行安全性评价。结果显示，5种化合物均具有一定的杀虫活性，其中，化合物1 [(1-甲基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-苯基-甲酮]的杀虫活性最强，其对多子小瓜虫掠食体4 h的100%杀灭浓度为24.0 mg/L，对包囊6 h的100%杀灭浓度为60.0 mg/L，对掠食体的半数致死浓度(LD50)为16.4 mg/L。急性毒性实验结果显示，化合物1对翘嘴红鲌(Erythroculter ilishaeformi)的48 h LD50为234.3 mg/L，其安全浓度为64.1 mg/L。研究表明，化合物1 [(1-甲基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-苯基-甲酮]是一种具有较好开发前景的杀小瓜虫药物。     

攀枝花市园林植物蚧壳虫初步调查及防治对策

为了查明蚧壳虫对攀枝花市园林植物的危害情况,了解蚧壳虫的种类及其发生规律,采取定期调查和随机抽查的方式对攀枝花市建成区蚧壳虫进行了调查研究。结果显示,攀枝花市建成区园林植物主要蚧壳虫有16种,其中扶桑绵粉蚧、苏铁白轮盾蚧、吹绵蚧、长尾粉蚧、日本龟蜡蚧等危害较为严重。     

春尺蠖生物学特性与防控技术探讨

春尺蠖属完全变态昆虫,经历卵、幼虫、蛹、成虫四个虫态的发育阶段。越冬蛹羽化成虫时期早,幼虫不仅活动能力强,而且取食量极大,三龄后进入暴食期,当虫口密度较大时,可将整株树叶食光,使树木无法正常进行光合作用,造成树势衰弱,持续受害可导致植株死亡。其取食为害的树种约20余种,还为害小麦、玉米、苜蓿等,当食物短缺时,也取食苦豆子,为害部位为叶片和花蕾,这是长期适应环境的表现。     

四唑虫酰胺对棉田斜纹夜蛾的防治效果

【目的】研究双酰胺类杀虫剂四唑虫酰胺对斜纹夜蛾的室内生测和田间药效试验。【方法】采用人工饲料混药法测定四唑虫酰胺对斜纹夜蛾3龄幼虫毒力,采用机率值分析方法对数据进行处理,用SAS统计分析系统计算毒力回归方程和LD₅₀。用喷洒药剂悬浮液的方法进行田间试验,使用邓肯新复极差法(DMRT)对不同处理防治效果进行统计分析。【结果】四唑虫酰胺对斜纹夜蛾的LD₅₀为0.58 μg/g,氯虫苯甲酰胺对斜纹夜蛾的LD₅₀为1.12 μg/g,四唑虫酰胺的杀虫活性较高,但与氯虫苯甲酰胺的差异不显著。药后3 d,18%四唑虫酰胺悬浮剂7.5和10 mL/667m²处理对斜纹夜蛾的防效分别为85.00%和87.87%,显著高于5.0 mL/667m² 药剂处理,与5%氯虫苯甲酰胺悬浮剂 45 mL/667m²处理差异不显著。药后7 d,18%四唑虫酰胺悬浮剂 3个浓度处理对斜纹夜蛾的防效与5%氯虫苯甲酰胺 45 mL/667m²处理差异不显著。药后 14 d,18%四唑虫酰胺悬浮剂10 mL/667m²处理的防效显著高于5.0和7.5 mL/667m²药剂处理,但与5%氯虫苯甲酰胺 45 mL/667m²处理差异不显著。【结论】18%四唑虫酰胺悬浮剂对斜纹夜蛾具有良好的的防治效果,且随着浓度增高其防效增大。     

规模化标准化饲养白羽肉鸡技术要点

近年来,散养鸡暴露出的问题越来越明显,比如:基础配套设施投入不足或没有,造成畜禽粪便污染环境;资本的限制,抗市场风险能力弱,效益不稳,市场和屠宰场的鸡源波动不定;劳动力成本上升,养殖雇工成本提高,资本投资者赚不到钱;饲料、兽药的来源不固定和随意性添加,造成兽药残留,影响肉品质量,保证不了消费者的合法权益。鉴于此,规模化标准化饲养白羽肉鸡成为发展方向。