一株鸡传染性喉气管炎病毒流行毒株的鉴定与致病性分析

为评价一株鸡传染性喉气管炎病毒流行毒株在疫苗效力评价中的应用表现，对制备的一株强毒株进行了系统鉴定，包括性状、纯净性、真空度、病毒含量、特异性等，尤其重点关注不同病毒含量对不同日龄鸡只的致病力情况。结果显示，本研究制备的鸡传染性喉气管炎病毒冻干物性状良好，无细菌、支原体和外源病毒污染，可被特异性血清完全中和，病毒含量稳定在10^5.1 EID₅₀/0.2mL。该毒株致病力表现稳定，100 EID₅₀可使80%鸡只发病或死亡，可作为一株良好的检验用强毒，为后续疫苗评价奠定基础。     

1株鹦鹉热衣原体的冻干、鉴定和分子分型研究

从国家兽医微生物菌(毒)种保藏中心领取1支鹦鹉热衣原体CVCC2410进行冻干和鉴定。将衣原体经卵黄囊接种SPF鸡胚进行复壮和传代，收获卵黄囊膜研磨后分装、冻干，并对冻干衣原体进行了无菌检验、真空度测定、染色特性和形态观察、特异性检验、16S rRNA鉴定、分子分型、衣原体含量测定。结果表明冻干衣原体CVCC2410 2203为C型鹦鹉热衣原体，含量为10^5.50ELD₅₀/0.2mL。本研究完善了该株衣原体的信息，为制定鹦鹉热衣原体的入库标准奠定基础。     

一株1型非洲马瘟疫苗毒种的初步鉴定

为做好非洲马瘟疫苗的储备性研究,以更好应对我国周边地区非洲马瘟疫情传入风险,本研究对中国兽医微生物菌种保藏中心的一株1型非洲马瘟病毒鼠脑组织毒进行了复壮和细胞适应型培养,并对其病毒含量、特异性、对小鼠毒力等进行测定。结果显示,该毒种在VERO细胞连续传代至F10代后病变产生明显,病毒含量可稳定在10^6.5TCID50/0.1mL以上；对小鼠毒力表现稳定,细胞适应毒也可达10^6.5LD50/0.1mL。根据OIE参考引物进行RT-PCR鉴定,序列比对证实该毒株为血清1型,与泰国毒株THA2020/01拥有99.7%的同源性。血清学试验结果表明可被1型特异性血清中和。本研究获得了一株VERO细胞适应毒,可作为良好的疫苗毒株候选株,适用于规模化生产,为疫苗储备奠定良好基础。     

一株MDBK细胞的低血清悬浮驯化研究

研究选取一株背景清晰、纯净的MDBK贴壁细胞,通过直接驯化和逐级降低血清相结合的办法,获得了一株可以在低血清培养基中全悬浮培养的MDBK细胞。该细胞在含0.5%胎牛血清的培养基中悬浮培养48 h后的细胞密度稳定在5.0×10⁶/mL以上,培养72 h后细胞密度最高可达1.16×10⁷/mL,且细胞形态良好,活力在93%以上,具有良好的传代稳定性。应用筛选获得的悬浮培养MDBK细胞株分别接种伪狂犬病毒和传染性牛鼻气管炎病毒后,检测病毒敏感性。细胞在24 h均发生了皱缩,72 h大部分死亡。悬浮培养的MDBK细胞对传染性牛鼻气管炎病毒的滴度在24 h达到最大值107.6TCID50/mL,对伪狂犬病毒的滴度在48 h达到最大值107.6 TCID50/mL,说明虽然细胞的培养方式发生了改变,但并没有影响上述两种病毒在该细胞上的增殖特性。对MDBK细胞的全悬浮驯化研究可为相关病毒类疫苗规模化生产及工艺的升级改进提供细胞学基础资料。     

非洲马瘟病毒VP7蛋白原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

为建立非洲马瘟病毒(African Horse Sickness Virus,AHSV)的血清学诊断方法,本研究构建了非洲马瘟病毒VP7蛋白的原核表达质粒pET-32a-VP7,诱导表达后使用Ni-NTA对可溶性VP7蛋白亲和纯化,以重组VP7蛋白作为包被抗原,优化建立检测血清抗体的间接ELISA方法,并对该方法进行敏感性、特异型和重复性验证,表明该方法的检测效果良好。本研究为非洲马瘟的血清检测试剂盒的开发提供的相关参考。