溶血性曼氏杆菌PCR检测方法的研究

溶血性曼氏杆菌是导致牛、羊呼吸道传染病的一种病原菌。为快速、准确诊断由本菌导致的疾病 ,从基因库中获得溶血性曼氏杆菌( M.haemolytica )的基因序列 ,再从其基因序列中获得与其它细菌包括 M.annheimiagranulomatis,M.varigena ,M.ruminalis,M.glucosidal ,M.annheimiaspp和多杀性巴氏杆菌等不同的基因片段 ,设计成引物 ,建立了特异性好、敏感性高的 M.haemolytica PCR检测方法。结果表明 ,除溶血性曼氏杆菌为阳性外 ,其余所有细菌均为阴性 ,特异性为 1 0 0 % ,最小检出量为 8× 1 0 2 cfu/ m L 曼氏杆菌或 1 / 1 0个单个菌落。检验人工感染牛 ,检出率为 75%。此PCR检测方法的建立 ,为 M.haemolytica提供了一个快速诊断方法     

仔猪链球菌和沙门氏菌混合感染

北京郊区某商品猪场哺乳仔猪和刚断奶仔猪发生以关节肿大、拉黄色稀便并不断发生死亡为临床特征的疾病 ,根据其发病特点、临床症状和病变以及实验室检验结果诊断为链球菌和沙门氏菌混合感染 ,并采取了自家菌苗免疫接种的控制方法 ,起到了良好的效果 ,介绍如下。1　发病情况　本     

鸡传染性鼻炎病原学研究进展

鸡传染性鼻炎是由副鸡嗜血杆菌（Hpg)引起的一种鸡急性上呼吸道传染病。本病由Beach首先报道，DEBlieck于1932年初次分离到了该病的病原体，最初命名为鸡嗜血红蛋白鼻炎芽孢杆菌。目前本病在世界许多地方都有发生和流行，我国从1980年起就有许多疑似本病的病例出现，首先由冯文达于1987年在北京分离到细菌。本病发生后可引起蛋鸡产量下降，育成鸡生长发育受阻和淘汰率增加，肉鸡肉质下降，造成很大的经济损失。现将本病目前在国内外病原学研究进展作一综述，以供同行参考。     

副鸡禽杆菌LAMP检测方法的建立

应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立了快速特异的检测副鸡禽杆菌的方法。利用在线引物设计软件Primer Explorer Version 4.0,针对副鸡禽杆菌16SRNA基因序列设计两组LAMP引物,并对副鸡禽杆菌特异性DNA的扩增条件进行优化,评价所建立LAMP的特异性和灵敏性。结果显示,优化后的反应条件为65℃恒温反应60min,内引物1.60pmol/μL、外引物0.20pmol/μL。该LAMP对13株副鸡禽杆菌均发生了扩增反应,而对大肠埃希菌、禽多杀性巴氏杆菌、空肠弯曲杆菌等14株其他病原微生物没有扩增反应;该LAMP最低检出量为0.17pg/反应,敏感性远高于常规PCR的56pg/反应。结果表明,所建立的副鸡禽杆菌LAMP具有快速、高效、方便操作等特点,适用于基层兽医部门进行副鸡禽杆菌的快速检测。     

产气荚膜梭菌型特异性多重PCR的研究

建立了一种简单且具有型特异性的产气荚膜梭菌的多重PCR诊断方法.结果表明,该PCR特异性好,只有产气荚膜梭菌呈现阳性,被检验的其他7种梭菌以及大肠杆菌、葡萄球菌和多杀性巴氏杆菌均为阴性.该PCR具有较高的敏感性,最小检测量为4.2×105 CFU/mL,单个菌落稀释10倍后也能被检测出,适用于医院、防疫和兽医诊断等部门,具有重要的公共卫生意义.     

禽流感病毒和其他禽类病毒在环境中和胴体堆肥期间的生存

在过去的25年,尽管禽流感、新城疫和其他重要的禽类病毒性疫病暴发过多次,但在面对疫病危机时,多把问题集中在环境中病毒的生存状况.本综述主要探讨禽流感病毒(AIV)和新城疫病毒(NDV),而其他禽类病毒和哺乳动物类病毒只作为比较目的之用.AIV和NDV在呼吸道和下消化道繁殖,在粪便中这些病毒的滴度很高.……     

B型副鸡嗜血杆菌北京株的分离与鉴定

鸡传染性鼻炎(IC)是由副鸡嗜血杆菌引起的一种上呼吸道传染病，本病主要影响蛋鸡的产蛋(下降10％～40％)和肉鸡的肉质，给养鸡业造成较大的经济损失。     

猪传染性胃肠炎病毒河北分离株核衣壳N蛋白基因的克隆与序列分析

采用RT-PCR技术扩增了TGEV河北分离株的N基因,长度约为1 149 bp. 将该基因片段进行亚克隆重组到pMD18-T质粒载体上,连接转化,鉴定后得到阳性重组质粒pTN.对重组质粒插入的目的基因片段进行序列分析和比较,结果表明TGEV河北分离株N基因与国外的Purdue-115、FS772/70、TO14、96-1933株有≥95%的同源性;推导的氨基酸序列同源性≥95%.TGEV N基因的克隆及序列分析,为其蛋白质的表达分析提供了重要依据,也为进一步讨论该病毒的分子生物学特性奠定了理论基础.     

Dot—ELISA检测副鸡嗜血杆菌血清型特异性抗原的研究

本研究在副鸡嗜血杆菌型特异性单克隆抗体的基础上建立了检测该菌 Ａ、 Ｃ 型特异性抗原的 Ｄｏｔ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 方法,结果表明本方法在检测副鸡嗜血杆菌型特异性抗原时未呈现与其它 ８ 种常见病原体的交叉反应,新鲜肉汤的最低检出量为 Ａ 型 １３×１０６ Ｃ Ｆ Ｕ／ｍ ｌ和 Ｃ 型 ８×１０６ Ｃ Ｆ Ｕ／ｍ ｌ,抗原的最低检出量均为 ２５μｇ／ｍ ｌ,对 ２０ 份抗原、肉汤和卵黄样品的检测结果与其已知结果相符。这就证明本方法具有较好的敏感性和特异性,是一种能直接检测分离株血清型的良好方法。     

溶血性曼氏杆菌PCR检测试剂盒的研制及初步应用

在溶血性曼氏杆菌PCR检测方法研究的基础上,进行溶血性曼氏杆菌PCR检测试剂盒的研究及初步应用.结果表明,试剂盒特异性好,批内和批间的试剂盒无差异;试剂盒在-20℃可保存30个月,4℃可保存12个月;应用试剂盒从1000多份临床样品中筛选分离到6株溶血性曼氏杆菌.