四川省食品动物源大肠埃希菌产ESBLs菌株blaCTX–M基因的分子流行特征

2010—2016年,从四川省不同养殖场的食品动物源(猪源、鸡源)中分离和纯化并最终获得123株大肠埃希菌产超广谱β–内酰胺酶(ESBL–EC)菌株,采用PCR法,并通过测序检测其bla_(CTX–M)基因,采用脉冲场凝胶电泳法(PFGE)分析33株不同来源菌株的亲缘关系。结果显示:123株菌株中bla_(CTX–M)检出率高达91.9%(113/123),其中以bla_(CTX–M–55)和bla_(CTX–M–65)基因型为主;bla_(CTX–M)流行率呈逐年上升的趋势;不同动物源菌株中bla_(CTX–M)流行情况不同;12株菌中bla_(CTX–M)基因发生了9种类型的突变,其中有10株菌为有义突变,导致7种类型氨基酸被取代;33株不同来源菌株共有32种PFGE型。可见,四川省食品动物源产ESBLs大肠埃希菌中bla_(CTX–M)基因型复杂且存在变异,在不同遗传背景的ESBL–EC菌株间广泛流行。     

硫酸头孢喹肟子宫注入剂对泌乳期奶牛的安全性研究

为研究硫酸头孢喹肟子宫注入剂对泌乳期奶牛的安全性,试验选用24头泌乳期的健康中国荷斯坦奶牛,随机分为4组(每组6头),其中3个受试药物组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组)分别给奶牛子宫内注入不同剂量的硫酸头孢喹肟子宫注入剂,1个空白对照组(Ⅳ组),给奶牛子宫内注入一定剂量的灭菌生理盐水。给药2次,间隔72h。在给药第0天、末次给药日及停药第7天,观察记录试验奶牛的各项指标,包括体温(直肠温度)、脉搏、呼吸频率、血液生理和生化指标、精神状态等临床表现及日产奶量和乳汁体细胞数(SCC)等,并对其进行考查。结果表明,泌乳期奶牛按推荐方法使用受试药物硫酸头孢喹肟子宫注入剂较安全,临床可用于治疗泌乳期奶牛的子宫内膜炎。     

重组溶葡萄球菌酶的致突变实验

实验用ICR小鼠经口罐胃染毒（骨髓细胞微核实验和精子畸形实验的剂量分别为2500、5000、10000mg·kg^-1）,取其股骨或睾丸组织常规制片,观察分散良好的中期分裂相鼠伤寒沙门氏菌回复突变（Ames）试验采用平板掺入法（剂量分别为0．01、0．04．0．2、1．00、5．00μg·皿^-1）,探讨了重组溶葡萄球菌酶的致突变性;预防其遗传危害性和潜在致癌作用的可能性。结果表明：小鼠骨髓、睾丸细胞染色体畸变实验显示：重组溶葡萄球菌酶给药组与阴性对照组比较,差异无显著性（P〉0．05）,Ames试验显示各菌株的各测试酞度的回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍。由此证明在本实验条件下,重组溶葡萄球菌酶无致突变性。     

黏菌素促进mcr-1阳性IncI2质粒在大肠杆菌间的接合转移

【背景】黏菌素是人医临床治疗多重耐药革兰阴性菌感染的“最后一道防线”药物,其同时作为饲料添加剂及治疗用药长期用于畜禽养殖业。2015年,我国研究人员首次报道了质粒介导的黏菌素耐药基因mcr-1,预示该道防线面临被攻破的风险。然而,杀菌浓度及亚抑菌浓度的黏菌素对mcr-1阳性质粒传播的影响仍未知。【目的】以流行最广的mcr-1阳性IncI2型质粒为研究对象,探究不同浓度黏菌素对该质粒接合转移频率的影响,为黏菌素的科学使用提供理论依据。【方法】使用肉汤法进行了不同浓度黏菌素（0.02-4 μg·mL^-1）作用下携带mcr-1的IncI2型质粒的接合转移试验。通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）及构建的公式计算不同时间点（1-24 h）的接合转移频率,并分析不同浓度黏菌素对IncI2质粒接合转移频率的影响。使用PI染料、活性氧（ROS）检测试剂盒测定不同浓度黏菌素下供体菌和受体菌的细胞膜透过性和ROS产生量。选取了对照组与低中高浓度3个处理组（0.02、1、4 μg·mL^-1）进行了转录组测序,使用Deseq2软件进行基因差异表达分析。采用Prism v8.2.0软件对不同组间接合转移频率、细胞膜透过性及ROS产生量的差异进行统计学分析。【结果】结合本研究建立的接合转移频率计算公式表明黏菌素浓度为4 μg·mL^-1时可在不同时间点提高mcr-1阳性IncI2质粒3-10倍的接合转移频率,而其他浓度则无显著差异。转录组结果显示,与对照组相比,低中高浓度黏菌素均可显著提高IncI2质粒上IV型分泌系统相关基因的表达,其中包括virB1、virB2、virB5以及traC。此外,黏菌素增加了I型菌毛合成基因fim的转录水平。PI染色结果显示当黏菌素浓度为2和4 μg·mL^-1时,可增强供体菌和受体菌的细胞膜透过性,且转录组结果也显示膜相关基因（ompAX、bamDE、lolB、yiaD、csgEF）的转录水平均出现显著上调。但是黏菌素作用后ROS产生量及相关基因的转录水平无显著提高。【结论】揭示了黏菌素可通过增加细菌IV型分泌系统活性、细胞膜透过性和菌毛的生成从而提高mcr-1阳性IncI2质粒在大肠杆菌间的接合转移频率。研究结果提示,杀菌浓度无法完全杀死mcr-1阳性大肠杆菌的同时,还能增加质粒传播速度。因此,畜禽养殖业中黏菌素的治疗使用可能维持mcr-1阳性质粒的存在及传播,此外鉴于黏菌素已批准用于人医临床,该现象有可能引起临床黏菌素治疗mcr-1阳性病原菌的失败。     

山东猪产业链中大肠杆菌耐药性及传递的研究

为比较养殖区猪"养殖-屠宰-销售"产业链各个环节中大肠杆菌的耐药性状况,及其在动物与动物、与人之间传递的情况,采集猪产业链中多个环节的样品,分离大肠杆菌150株,用肉汤稀释法检测细菌对常用药物的最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC),并对所有菌株进行脉冲场凝胶电泳(Pulsed field gel electrophoresis,PFGE)分型分析。研究结果表明养殖环节中(包括饲养员)细菌耐药程度普遍较高且呈现多重耐药性,屠宰、加工和销售过程中细菌耐药程度较低;在仔猪、哺乳母猪和怀孕母猪之间,及保育猪和饲养员之间存在PFGE型高度相似的菌株,而PFGE型相似菌株的耐药性则存在不同程度的差异。说明良好的屠宰条件在一定程度上能够阻断养殖环节形成的高耐药性菌株的传递,耐药性大肠杆菌菌株可以在密切接触的人和动物之间传播。评估猪产业链中动物源条件致病菌及耐药性的转移扩散风险,对食品安全和公共卫生具有一定参考价值。     

那西肽饲料添加剂对大白猪血液生理生化指标的影响

那西肽(nosiheptide)又名诺西肽、诺肽菌素和诺肽霉素,是含硫多肽类抗生素家族中的一个新成员[1],1961年由法国洛普克公司首次发现.它不但可增强机体免疫力,对细菌等病原微生物有抑制、杀灭作用,而且可明显促进猪、鸡、鸭、鱼、虾等动物的生长,提高饲料报酬[2-6].具有用量小、不易产生耐药性、无残留、对环境污染少等特点,是一种理想的新型非吸收性动物饲料添加剂.     

盐酸沃尼妙林预混剂对猪痢疾的临床疗效试验

沃尼妙林(valnemulin)是新一代截短侧耳素(pleuromutilin)类半合成抗生素,属二萜烯类,与泰妙菌素属同一类药物,是动物专用抗生素.主要用于防治猪、牛、羊及家禽的支原体病和革兰阳性菌感染.1999年由欧共体批准用于预防与治疗由猪痢疾短螺旋体感染引起的猪痢疾和由肺炎支原体感染引起的猪地方性肺炎[1].     

800株不同动物源大肠杆菌的耐药性监测

采用微量稀释法,检测了2007年12月分离自四川省5个市的牛源、猪源、鸡源800株大肠杆菌对13种抗菌药物的敏感性.结果显示,分离菌株的耐药率除阿米卡星仅5.9%外,其余药物均超过35%,对磺胺异(口惡)唑、磺胺甲嗯唑+甲氧苄啶、氨苄西林的耐药率较高,分别为100%、96.6%、75.8%;分离菌株多重耐药情况严重,耐受3种以上药物的菌株占92.6%.不同地区及不同动物源大肠杆菌耐药水平存在差异.其中成都地区耐药性最严重,鸡源大肠杆菌耐药率最高.监测结果表明,四川省动物源大肠杆菌的耐药现状已不容乐观,有必要加强耐药性监测,指导兽医临床合理使用抗菌药物.     

奶牛乳房炎大肠杆菌整合子与耐药表型的相关性研究

为研究自乳房炎奶牛分离的大肠杆菌整合子携带情况与其耐药表型之间的相关性，在获得菌株对20种抗菌药物耐药谱的基础上，设计Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合子简并引物扩增菌株的整合酶基因，并结合内切酶限制性片段长度多态性分析，调查菌株携带的各类整合子，然后进一步扩增菌株整合子的基因盒插入区，测序分析其携带的基因盒。结果发现，80株自奶牛乳房炎病例分离的大肠杆菌中有37株检出Ⅰ类整合子（检出率46．25％），未检出Ⅱ类和Ⅲ类整合子。Ⅰ类整合子阳性菌中31株扩增出3种不同大小的基因盒插入区片段，插入基因盒主要是二氢叶酸还原酶基因（dfr）和氨基糖苷类抗生素耐药基因（aadA），最主要的基因盒排列为dfrA17-aadA5。分析表明，Ⅰ类整合子集中分布在耐受7种以上抗菌药物的菌株中，与菌株的多重耐药性高度相关，而菌株Ⅰ类整合子携带的耐药基因盒与其耐药谱缺乏对应关系。     

溴莫普林对几种动物病原菌的体外抗菌作用

采用试管二倍稀释法测定了溴莫普林 (BDP)对禽大肠杆菌 O78、沙门氏菌 C79-13 、金黄色葡萄球菌 2 80 0 1的最小抑菌浓度分别为 0 .313μg/ml、80 μg/ml及 6 40 μg/ml。BDP对病原菌的 MIC与 TMP相同或略优 ,与其它抗菌药物的联合抑菌作用和 TMP相似。