肉鸡大肠杆菌的分离鉴定

从豫、鲁、冀接壤地区部分肉鸡场送检的病料中分离出49株大肠杆菌,确定42株菌分属11个血清型,其中02、078、01、074、011为主要血清型,分别占分离株的26.2%,19.0%,11.9%,9.5%和9.5%,表明该地区血清型复杂.药敏试验表明,所分离的49株大肠杆菌对丁胺卡那霉素、氟本尼考、头孢噻呋最敏感,高敏菌株达94%～100%,可作为防治肉鸡大肠杆菌病的首选药物.     

分光光度法测定硫酸卡那霉素饮水剂中卡那霉素的含量

采用分光光度法测定硫酸卡那霉素饮水剂中卡那霉素的含量，与常规的抗生素微生物法比较。此法简便、快速、准确。     

硫酸卡那霉素MIC与耐药性试验

<正> 江西制药厂有一批1977～1978年生产的硫酸卡那霉素样品,保存已12～13年,从外观检查:无变化的为68.33%,轻度变化的呈微黄色11.71%、中度变化呈黄绿色6.7,重度变化的呈金黄色13.18%。经生物测定法检查的效价为标示量(%):无变化的94.8、轻度的90.1、中度的76.5、重度     

杨树对卡那霉素（Kanamycin）敏感性的测定

植物遗传转化时,选用抗性基因作为标记基因,用来分析已转化植株的基因整合及表达。新霉素磷酸转移酶基因(neo)是在遗传工程中经常使用的标记基因,它对卡那霉素具有很高的抗性。作为杨树基因转化的显性选择记号,首先要将杨树不同种对卡那霉素的敏感性进行测定。本文报道了这方面研究的结果。     

分子育种过程中春小麦出现白化苗的探讨

分子育种过程中采用卡那霉素作为选择抗生素,淘汰未经转化的春小麦芽不十分敏感,88%正常生长,开花、结实,导致白化苗约12%,死去仅占10%.     

条斑紫菜壳孢子的抗生素敏感性研究

以往研究紫菜细胞对抗生素的敏感性时,常以叶状体的酶解单离体细胞为材料,但由于来自同一个叶状体的体细胞处于不同的分化阶段,离体培养时,体细胞的成活、再生和发育途径均不相同,从而无法准确地判断抗生素对紫菜离体细胞的生长和发育影响。以成活、萌发和发育途径等几乎一致的条斑紫菜壳孢子为研究材料,较系统地观察了3种抗生素对壳孢子的成活、生长和发育的影响。结果表明：卡那霉素能促进条斑紫菜壳孢子的萌发、生长和发育。加卡那霉素培养7 d,26%的壳孢子萌发体,其细胞数多于20个,比对照组多2倍,培养11 d和18 d,萌发体的平均长度分别为对照组的1.6倍和2.1倍。氨苄青霉素能显著地抑制条斑紫菜的壳孢子萌发、生长和发育,造成细胞的分裂速度减缓、叶状体发育异常。加氨苄青霉素培养7 d,80%的壳孢子萌发体的细胞数少于15个,培养11 d和18 d,各试验组的壳孢子萌发体的平均长度均显著低于对照组,并且随着氨苄青霉素浓度的提高,萌发体的平均长度下降。氯霉素对条斑紫菜的壳孢子具有强烈的致死作用。加氯霉素培养7 d,浓度大于100 μg/mL的各试验组的壳孢子萌发体全部死亡;培养11 d,低浓度组（50 μg/mL）的萌发体也全部死亡,90%以上的萌发体的细胞数小于5个。由此得出,氯霉素是开展条斑紫菜基因工程的理想抗性选择压力。     

根癌农杆菌介导的‘魏可’葡萄遗传转化体系的优化

以‘魏可’葡萄离体叶片为外植体,利用植物表达载体上含有卡那霉素抗性基因(nptⅡ)的根癌农杆菌LBA4404(pCAMBIA2301)对影响‘魏可’葡萄遗传转化效率的因素进行系统研究。结果表明,最佳农杆菌介导‘魏可’葡萄遗传转化体系为农杆菌侵染4 min,共培养3 d,卡那霉素质量浓度5 mg·L-1,羧苄青霉素质量浓度200 mg·L-1。采用此体系对‘魏可’葡萄进行转化,共获得9株抗性苗。利用GUS组织化学染色、PCR扩增的方法检测,结果表明,有4株通过了PCR检测,1株通过了RT-PCR检测,初步证明nptⅡ基因已经整合进入‘魏可’葡萄基因组中。将PCR产物回收,经测序验证nptⅡ基因完全整合进入‘魏可’葡萄基因组中。对CK及经PCR检测呈阳性的株系进行卡那霉素抗性鉴定,发现PCR呈阳性的株系均比CK抗Kan的能力明显增强。     

自身启动子控制的卡那霉素抗性基因在哺乳动物细胞中表达的检测

为了研究卡那霉素抗性(KanR)基因能否在哺乳动物细胞中表达以及用含相同抗性基因重组质粒防治奶牛乳腺炎的安全性,用PCR从重组质粒p215C3LYZ中扩增得KanR基因,将其克隆入原核表达载体pQE-31,用含卡那霉素(Kan)琼脂平板筛选得KanR重组菌,经IPTG诱导成功表达了预期大小的Kan抗性融合蛋白;用纯化的重组蛋白免疫小鼠,获得了Kan抗性蛋白抗血清,经Western blotting证明免疫血清特异性良好;分别用重组质粒pQE-Kan和p215C3LYZ转染COS-1细胞,在不含抗生素培养液中培养后分别收集细胞上清和细胞裂解物;将转染细胞上清分为添加和不加Kan组,接种Kan敏感菌DH5α大肠杆菌,培养物的OD600检测结果显示,添加组的指示菌生长被抑制,转染细胞上清中无Kan抗性蛋白表达;以Kan抗性蛋白免疫血清进行的Western blotting结果显示,转染细胞内无Kan抗性蛋白表达;将p215C3LYZ注射奶牛乳腺,用脱脂和浓缩奶样进行Western blotting检测,结果显示试验牛乳中也无Kan抗性蛋白表达。这些试验结果提示,来源于原核大肠杆菌的KanR基因启动子在动物细胞中无转录活性,乳腺注射含KanR基因的重组质粒不会表达对奶牛和人体有害的Kan抗性蛋白。     

卡那霉素对梨叶片愈伤组织和不定梢诱导的影响

研究了卡那霉素(Km)对梨叶片愈伤组织和不定梢诱导的影响.结果表明,Km浓度为10 mg/L时,明显抑制“金华”和“金水”叶片愈伤组织的生长;Km浓度为20 mg/L时,2个品种叶片均无不定梢发生,且随着浓度的增加,死亡率逐渐增大;Km浓度达100 mg/L时,“金华”和“金水”叶片死亡率分别达100％、96.70％.对于“苍溪”品种而言,Km浓度为10 mg/L时,已完全抑制了“苍溪”叶片不定梢的再生;当Km浓度增加到60 mg/L时,“苍溪”叶片全部白化死亡.     

番茄基因转化中抗生素筛选压力的确定方法

在以抗生素为筛选标记的基因转化中。确定适宜的筛选压力是提高基因转化率的前提。本研究以卡那霉素为例，通过在10mg／L，20mg／L，30mg／L，50mg／L，100mg／L的筛选压力下，转化和非转化番茄子叶外植体的生长表现、愈伤组织和芽的分化率．来确定适宜的筛选浓度。本实验以该方法找到的适宜的卡那霉素筛选浓度为50mg／L。以此浓度为筛选压力进行遗传转化所获得的部分再生苗经southern blot鉴定．均为转化株。