截去跨膜区对羊痘病毒P32基因免疫原性的影响

羊痘是由羊痘病毒属绵羊痘病毒或山羊痘病毒引起的羊的一种急性、热性、接触性传染病。以无毛、少毛部位皮肤及黏膜发生丘疹和疱疹为特征,是所有动物痘病中最为严重的一种,被感染的羊群由于其生产力和皮毛质量大幅下降,造成巨大的经济损失。世界动物卫生组织（OIE）将该病列为“法定通报疾病”,我国将其列为一类动物疾病。P32蛋白是羊痘病毒（CPV）颗粒的特异性强、免疫原性良好的结构蛋白,可用于羊痘的预防。CPV全长P32基因对细胞有毒性,国内外研究者多以截去跨膜区的P32基因为研究对象,研究其重组蛋白的用途,但对基因截去跨膜区所表达的部分蛋白是否与完整的P32蛋白具有相同的抗原性和特异性,目前尚不明确。笔者等通过构建P32和MP32的重组真核表达质粒,观察对小鼠的免疫效果,初步探讨截去跨膜区对P32基因免疫原性的影响。     

绵羊痘病毒甘肃流行株ORF121基因的克隆及序列分析

从甘肃景泰疑似羊痘绵羊的皮肤组织中提取基因组DNA,PCR扩增糖蛋白ORF121基因。序列分析表明,该基因由519个核苷酸组成,编码172个氨基酸,分子量为19.9 kua,序列中A+T含量占74.95%,G+C含量仅占25.05%。甘肃景泰株ORF121基因同绵羊痘病毒参考株之间的核苷酸同源性高达99%;与疙瘩皮肤病病毒和山羊痘病毒参考株之间的同源性分别为97%和95.6%。结构预测结果显示,ORF121蛋白具有两个N-糖基化位点和一个跨膜区,且具有极强的亲水性。以上结果表明,ORF121蛋白在不同的绵羊痘病毒流行株之间非常保守,具有潜在的疫苗或/和诊断价值。     

微载体培养技术及其在疫苗生产中的应用

微载体培养技术是一种新兴的细胞大规模培养技术,是目前贴壁依赖型细胞大规模培养的重要方法,其兼具贴壁培养和悬浮培养的优势,温度、溶氧浓度和pH等培养条件易控制,培养过程自动化、系统化,不易被污染。现就微载体培养技术的发展及其在疫苗生产中的应用进行了综述,并提出了动物细胞微载体大规模培养技术的发展方向。     

反复冻融新生牛血清对促细胞生长效应的影响

选择促细胞生长性能良好的三批新生牛血清，经不同次数冻融后用其配制MEM培养淹，用于培养SP2／0细胞，从细胞最大增殖量和倍增时间2个指标测定促细胞生长效应。结果，用经不同次数冻融的新生牛血清配制的MEM培养液，对SP2／0细胞的最大增殖量和倍增时间影响不大；但反复冻融20次以上的新生牛血清配制的培养没使细胞的倍增时间延长。由此可见，为了防止细胞倍增时间延长，所用新生牛血清的冻融次数应该控制在20次以内。     

绵羊痘病毒ORF121基因的序列分析及其B细胞表位预测

选取GenBank上4株不同绵羊痘毒株ORF121基因序列,采用DNASTAR软件对该基因序列进行同源性分析,并以B细胞表位分析参数及蛋白质二级结构分析数据,综合预测ORF121蛋白B细胞表位.结果表明:4株不同绵羊痘毒株OBF121基因核苷酸序列的同源性为99%;在ORF121蛋白的肽链中,35～46、76～82、160～167区段亲水性强,35～45、54～83、90～124、130～139、144～158和160～167区段柔韧性好,37～45、112～116、129～137和143～167区段抗原指数高,33～45、78～83和159～167区段表面可及性高,30～57和151～170区段可形成一定的空间构象.结果说明ORF121基因在不同的绵羊痘病毒流行株之间非常保守,ORF121蛋白35～45、160～167区段可能是B细胞表位优势区,具有潜在的疫苗或/和诊断价值.     

动物细胞无血清培养技术研究进展

生物医药是21世纪的朝阳产业,动物细胞无血清培养技术在生物医药领域中发挥着重要作用。无血清培养技术包括无血清培养基的开发、适应细胞株的驯化以及细胞规模化培养技术等关键技术,以细胞生物反应器高密度培养技术作为基础的细胞无血清悬浮培养技术推动了生物制药的快速发展。     

蛛丝蛋白基因重组表达研究进展

蛛丝是一种具有特殊蛋白序列结构和超强收缩性能的天然蛋白纤维,有独特力学性能和实用价值的高性能生物材料。本文概述了蛛丝蛋白的理化性能、力学性能、分子基础和基因重组表达的研究进展。     

低氧下牦牛、黑白花牛肾间质成纤维细胞PDK1、Smad2、Caspase3等因子表达差异研究

为了比较低氧条件下不同海拔牛种肾间质成纤维细胞（RIFs）内PDK1、Smad2、Caspase3等因子的表达差异及细胞增殖差异,并进一步探究牦牛肾脏的高原低氧适应性特点,本研究采用牦牛和黑白花牛RIFs作为研究对象,低氧（1%O2）处理后,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹（WB）法检测细胞内PDK1等因子表达差异。波形蛋白（Vimentin）免疫组化染色鉴定结果显示,两种牛的原代RIFs纯度较高,可用于后续试验。低氧处理后,两种牛的RIFs内PDK1、Smad2及Caspase3的mRNA和蛋白表达均存在不同程度上调,且种属间存在显著差异（P<0.05）,牦牛HIF-1α、PDK1、Smad2及Caspase3等基因表达量于24 h达到峰值,之后下调,而黑白花牛基因则随时间呈递增趋势,且牦牛RIFs低氧下增殖能力低于黑白花牛。综上所述,低氧诱导的相关转录因子表达存在差异,两种牛RIFs的增殖能力存在差异,这可能是导致低氧下黑白花牛肾纤维化程度的加深,从而产生肾源性高原疾病的原因之一。本研究为比较不同海拔牛种肾脏的低氧适应性研究提供了基础数据,为探索牦牛肾脏...     

兰州黑白花奶牛肾组织细胞系的建立

目的:通过体细胞分离培养和保存,在细胞水平上保存兰州黑白花奶牛的种质资源。方法:采用胰蛋白酶热消化分离培养兰州黑白花奶牛的肾组织细胞,传代扩大培养后液氮保存,对保存的细胞进行了复苏活力、形态、生长特性、微生物和内外源病毒因子检查。结果:保存的兰州黑白花奶牛肾细胞复苏活力达94%,生长良好,形态以梭形和上皮形为主,生长曲线呈近"S"型,最大增殖浓度3.89×10~5/ml,倍增时间为27.15 h,无菌、支原体和内外源病毒因子检查为阴性。结论:成功建立了兰州黑白花奶牛肾组织细胞系,使种质资源在细胞水平上得以长期保存。     

昆虫细胞无血清培养基研究进展

随着昆虫杆状病毒表达载体系统的广泛应用,昆虫细胞大规模无血清培养已成为一种发展趋势。目前的昆虫细胞培养基中主要有糖类、维生素、氨基酸、脂类、无机盐、有机酸等基础成分,此外还需要添加血清或酵母提取物和水解乳蛋白等血清替代物。然而使用血清会带来诸多难以解决的问题,因此开发使用血清替代物和无血清培养基已成为生物制品行业关注的主要方向。论文综述了昆虫细胞无血清培养基的研究进展,包括研究历程、研究现状、基础成分和其他添加物等。