腺病毒载体及其在口蹄疫疫苗研究中的应用

腺病毒载体具有高效传递和表达外源基因的能力,常被用作体内和体外基因转移或表达的工具.体内同源重组和体外直接连接是目前构建腺病毒重组体的两种主要方式.口蹄疫病毒基因重组腺病毒活载体疫苗多是以缺失E1和E3基因编码区的人5型腺病毒AdHu5为载体进行构建,有些载体还缺失了E4基因编码区.研究证实,已构建的口蹄疫重组腺病毒疫苗对猪、牛都有一定的免疫保护效果,在口蹄疫预防研究领域具有很好的应用前景.     

牛对表达口蹄疫病毒复合多表位基因的重组鸡痘病毒以及DNA疫苗联合免疫的免疫应答

将构建的共表达口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，FMDV）复合多表位基因和猪白细胞介素18基因的重组鸡痘病毒活载体疫苗vUTA2-OAT以及DNA疫苗pVRI-OAT，分别以vUTA2-OAT／vVTA2-OAT（首免／2强免疫）、pVRI-OAT／vUTA2-OAT（首免／2强免疫）和vUTA2-OAT／pVRI-OAT（首免／加强免疫）等3种方式接种牛，然后通过间接ELISA、中和试验和T淋巴细胞增殖试验评价其诱导的特异性体液和细胞免疫水平。结果表明。这3种方式均能诱导牛产生特异性的体液免疫及细胞免疫应答，其中pVRI-OAT／vUTA2-OAT联合免疫方式的免疫效果最佳，诱导的中和抗体达1：64，已接近于常规灭活疫苗免疫方式，而且其可以诱导比灭活疫苗免疫方式高得多的细胞免疫水平（P〈0．01）。上述试验结果为进-步进行免疫攻毒试验。并最终筛选出最佳疫苗和免疫程序奠定了基础。     

综合防控口蹄疫的关键技术——疫苗免疫

口蹄疫的发生和流行严重危害畜牧业的发展,造成惨重的经济损失,因此防控和消灭口蹄疫成为许多国家共同关注的问题。疫苗免疫是特异性预防和控制该病的有效手段。本文从免疫方式、动物种类、地域因素、生物模型4个方面对疫苗防控措施的建立加以论述,提出了常规免疫策略以及非疫苗预防免疫策略,并对紧急疫苗接种与感染动物扑杀进行了时效性分析,旨在面临疫病挑战时制订具有针对性的疫病防控措施,从而使疫苗免疫在控制、消灭和防止口蹄疫传播等方面更能有效地发挥作用。     

口蹄疫A型病毒AF/72株标准细胞毒株的研制

用口蹄疫A型病毒AF/72株的第3代乳鼠组织毒,通过乳鼠继续适应3代后,转适BHK-21细胞,获得该毒株的细胞毒AF/72/MF6/BF12,经测定其TCID50为10-8.0/mL;经RT-PCR获得其VPI基因序列,并与GenBank中的其他6株口蹄疫A型病毒株比对,同源性均大于85%;经无菌检验和外源病毒检验,纯净性达到兽用生物制品标准要求;经间接夹心ELISA测定,OD值均大于0.2,且该毒仅能被口蹄疫A型标准血清中和,具有型特异性;经紫外分光光度法测定其146S含量,均值为189 ng/mL,远大于22 ng/mL的国际标准.综合纯净性检验结果、特异性检验结果和146S含量,确定AF/72/MF6/BF12为口蹄疫A型病毒株AF/72的标准细胞毒.     

Application Experiment in the Field of FMD,CSF and HP-PRRS Vaccines Simultaneously Vaccinated at Two Different Sites

In order to explore the optimal immune procedure of foot-and-mouth disease (FMD), classical swine fever (CSF) and highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome (HP-PRRS) vaccines in backyard pigs in rural areas, field immune experiment was carried out in two towns. Town A used "332" immune procedure, namely, FMD vaccine and CSF vaccine were simultaneously injected at different sides of the neck, and HP-PRRS vaccine was injected 14 days later. Town B used "321" immune procedure, namely, HP-PRRS vaccine and CSF vaccine were mixed together and injected in one side of the neck, and FMD vaccine was injected in the other side of the neck. FMD, CSF and HP-PRRS antibodies were detected by ELISA, and FMDV, CSFV and HP-PRRSV were detected by RT-PCR. The assessment indexes, including the immune density, immune side-reaction rate, death rate of pigs, positive rate of antibody of backyard pigs, positive rate of antibody of slaughter pigs, positive rate of pathogen of backyard pigs, positive rate of pathogen of slaughter pigs and so on, were collected and analyzed. The results showed that, compared with town A used "332" immune procedure, the HP-PRRS immune density, the positive rate of CSF and HP-PRRS antibody of backyard pigs, the positive rate of HP-PRRS antibody of slaughter pigs were significantly increased (P<0.05), while the death rate and the positive rate of HP-PRRSV of slaughter pigs were significantly decreased (P<0.05) in town B used "321" immune procedure. The other major assessment indexes had no significant difference (P>0.05). The results indicated that the immune efficacy of "321" immune procedure was better than that of "332", and it was worthy to be applied in clinical practice.     

口蹄疫表位疫苗的研究进展

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起偶蹄动物发生的一种急性、烈性传染病,给发病地区的畜牧业造成巨大的损失,目前应用疫苗来防控口蹄疫仍是最主要的手段。作为一种新型疫苗,表位疫苗是用病毒相关抗原表位制备,可同时携带多个抗原表位及辅助性表位的疫苗,具有安全性好、易操作和可控等优势,受到人们密切的关注。近些年来,对于口蹄疫表位及疫苗的研究取得了很大的进展,现对口蹄疫病毒相关的细胞表位及其以此为基础的表位疫苗的最新进展进行综述,为研制更加安全有效的口蹄疫疫苗提供参考。     

应用高效体积排阻色谱法测定市场抽检口蹄疫灭活疫苗中的抗原（146S）含量

应用高效体积排阻色谱法对5批市场抽检口蹄疫灭活疫苗中有效抗原(146S)含量进行检测,并使用口蹄疫O型、A型和亚洲1型抗原测试卡对5批疫苗中的抗原进行鉴别。结果显示高效体积排阻色谱法测定146S标准品浓度与峰面积线性关系良好,5批疫苗均检测到146S特征吸收峰(R2=0.9937,n=7),经计算得到灭活疫苗中有效抗原含量分别为2.05、3.73、2.03、4.87、3.41μg/m L;使用抗原测试卡鉴别了5批疫苗中的抗原类型。结果表明,高效体积排阻色谱法简便、高效,准确度较高,有望在口蹄疫灭活疫苗的质量控制中发挥重要作用。     

口蹄疫A型病毒AF/72株参考血清的研制

[目的]研制口蹄疫A型病毒AF/72株参考血清,筛选对实际防疫更具针对性的A型FMD标准血清,为研发安全高效优质的A型FMD疫苗提供实物支撑。[方法]用国家口蹄疫参考实验室提供的口蹄疫A型病毒AF/72株的第12代细胞毒AF/72/MF6-BF12,经测定并经Kaber法计算其TCID50为10-8.0/ml;经紫外分光光度法测定其146 S含量,均值为189.0 ng/ml,远大于22.0 ng/ml的国际标准。将此细胞毒与弗氏佐剂联合制成灭活疫苗免疫豚鼠后分离得到血清。[结果]经物理性状检验、无菌检验和外源病毒检验,纯净性符合兽用生物制品标准要求;参照国际标准血清的抗体效价测定方法ELISA和微量细胞中和试验检测了此血清的抗体滴度,原血清,强阳性血清和弱阳性血清的中和效价均远小于1∶45,符合标准的要求。[结论]对比国际口蹄疫参考血清的抗体滴度确定强阳性血清为口蹄疫A型病毒AF/72株的参考血清,为以后筛选抗原谱广的制苗毒株提供实物支撑。