不同来源禽网状内皮增生病病毒株的致病性比较

本研究旨在探讨不同来源的禽网状内皮增生病病毒(REV)对1日龄SPF鸡的致病性.用包括分子克隆化病毒REV-C99在内的不同来源的6个REV株人工感染1日龄SPF鸡,以禽流感病毒灭活疫苗(H9-AIV、H5-AIV)与新城疫病毒灭活疫苗(NDV)免疫后HI抗体滴度的测定结果为指标,比较不同REV株的致病性.结果表明,分别用3000TCID_(50)·只~(-1)的剂量人工感染1日龄SPF鸡,6个REV感染组与对照组相比,H9-AIV、H5-AIV与NDV免疫后4、5与6周的HI抗体水平均极显著降低(P<0.01).但6个REV感染组之间差异不显著(P>0.05).研究结果显示,不同来源REV株感染1日龄SPF鸡后均造成生长迟缓,并对体液免疫反应有明显的抑制作用,同时,这也揭示出REV感染可能是免疫失败的重要原因之一.     

不同日龄商品代雏鸡胸腺、法氏囊、脾脏重量与体重比动态规律

胸腺、法氏囊、脾脏是与免疫功能密切相关的三个脏器,本研究测定了不同日龄(4、11、18、25、35日龄)蛋雏鸡和肉雏鸡这三个脏器的重量(mg)及其与体重(g)比。结果表明,无论蛋雏鸡还是肉雏鸡,随日龄的增长,三脏器与体重之比都呈现不同的动态变化:胸腺和法氏囊与体重之比从4日龄起逐渐升高,18日龄左右达到最高,而后开始下降。而在35日龄内,脾脏与体重之比则一直在逐渐升高。     

从芦花鸡分离的J亚群ALV病毒及其gp85基因演化

采用RT-PCR方法直接从芦花鸡肿瘤中进行禽白血病病毒(Avian leucosis virus,ALV)的核酸扩增,经测序证实为ALV。将上述病料接种DF1细胞(C/E)进行盲传,并对其感染细胞上清进行ALV P27抗原检测,结果为阳性,证实获得了一株病毒,命名为SDJN2012。用PCR方法扩增其囊膜蛋白gp85基因并测序,与GenBank中的ALV参考毒株进行核苷酸或氨基酸同源性比较。结果表明:SDJN2012与山东较早发现的J亚群ALV代表株SD0001的核苷酸(氨基酸)同源性最高,达93.4%(92.6%),与J亚群不同年代的代表株同源性为88.6%~93.3%(88.2%~90.6%),而与A,C,D,E亚群ALV毒株的同源性仅为19.7%~32.2%(10.2%~32.2%),进一步确证分离到的病毒为J亚群ALV。对种蛋的跟踪监测证实:ALV蛋清P27抗原阳性率为37.6%,而血清学监测则呈现多样性的变化:鸡群发病前J亚群ALV抗体检测为阴性,发病后阳性率仅为9.35%,而A/B亚群阳性率则由发病前的9.8%,攀升到发病后的75.4%,彰显出ALV病原学、血清学和分子流行病学的复杂性。     

鸡传染性贫血病毒与马立克氏病病毒共感染SPF鸡群免疫抑制协同作用的研究

将鸡传染性贫血病毒（Chicken infectious anemia virus,CIAV or CAV）和马立克氏病病毒（Marek s dis-ease virus,MDV）人工单一和共同感染1日龄的SPF鸡,感染后分别于14、21、28、35日龄检测鸡体红细胞压积的变化,并检测鸡群疫苗免疫3周后的抗体反应,以探讨CAV与MDV共感染对鸡体的免疫抑制是否有协同作用。结果表明,在血液分析方面,CAV与MDV共感染组较病毒单一感染组与对照组差异极显著,共感染不仅加重了鸡群贫血现象,而且延长了贫血的病理症状;而在禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）H5/H9疫苗、新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）疫苗和传染性法氏囊病毒（Infectious bursal disease virus,IBDV）疫苗免疫后3周的抗体检测中,CAV与MDV共感染组较其它各实验组差异极显著,抗体滴度大大低于其它实验组;此外,CAV与MDV共感染组,鸡体生长状况明显差于实验各组,有6只鸡只死亡（6/25）,比病毒单一感染时的死亡率大大增加。综上研究证明,CAV与MDV共感染在免疫抑制作用上有协同作用。     

禽痘病毒活疫苗中网状内皮组织增生病病毒的分离鉴定及其序列比较

为了从怀疑污染禽网状内皮组织增生病病毒（Reficuloendotheliosisvirus,REV）的禽痘病毒（Fcwlpoxvirus,FPV）活疫苗中分离病毒,将市场上购买的某些厂家的禽痘弱毒疫苗接种7日龄SPF雏鸡。在5d后采其抗凝血浆接种鸡胚成纤维细胞（chickenembryofibroblast,CEF）,在连续传2代后,用REV特异性单抗做间接免疫荧光试验,确认REV感染,命名为JS0809。提取感染细胞的DNA,采用PCR扩增env基因。测序分析表明,该毒株的env基因开放阅读框同大部分REV-毒株一致,为176lbp。JS0809的囊膜蛋白基因（envelopeproteingene,env）与国内已发表株的同源性高达96．0％-99．％。相对而言,它与早年分离到的毒株的同源性只有96％-97．3％,但与近几年的分离珠的同源性则均高达99．5％-99．8％。它与整合进FPV野毒株中的全基因组REV的env基因同源性很高为99．8％,而与整合进FPV疫苗株中全基因组REV的env基因同源性较低仅为97．3％。本研究证实了在我国生产的某些FPV疫苗中存在REV污染,所污染的REV的env基因更接近最近的流行野毒,这是国内第一次报道从禽痘弱毒疫苗中分离~qREV活毒。     

1株鸡传染性贫血病毒野毒株对不同日龄SPF鸡的致病性

从山东省某商品代肉鸡场表现生长迟缓的20日龄病鸡群分离到1株鸡传染性贫血病毒(CAV)SDLY08株,通过口服和肌肉注射2种途径分别感染1,7,21日龄SPF鸡,12d后检测CAV对SPF鸡体质量、免疫器官和血液指标的影响。结果表明,于3个不同日龄感染后12d,SDLY08株均可导致增重减缓,胸腺显著萎缩,脾脏肿大,同时还可引起白细胞、红细胞数及红细胞压积的显著减少。且1日龄和7日龄鸡易感性大于21日龄鸡,肌肉注射比口服感染组的致病性更强。     

鸡胚中H9N2亚型禽流感病毒的分离鉴定

将来自有产蛋下降的肉用型父母代种鸡群的种蛋孵化,每日观察鸡胚死亡情况。在孵化的50个鸡胚中9日龄时开始死亡1个,尿囊液无血凝性,盲传一代后,鸡胚尿囊液有血凝性。在HI试验中,对H9亚型禽流感病毒(AIV)单因子血清在1∶26稀释度时呈现血凝抑制活性,对新城疫病毒(NDV)和H5亚型AIV单因子血清不呈血凝抑制活性,由此确定为低致病性禽流感病毒,命名为ZKH90901。对该毒株进行HA和NA基因扩增克隆测序,把获得的HA和NA基因与已经发表的H9N2毒株的相应序列比较,结果表明该毒株确实为H9N2亚型禽流感病毒,HA基因的裂解位点序列为KSGR↓GLF,符合低致病性禽流感病毒H9N2蛋白裂解位点的分子特征,仍属于低致病力毒株。从鸡胚中分离到H9N2亚型禽流感病毒在国内尚未见报道。     

鸡白血病及其鉴别诊断和预防控制

近两年来,我国各地蛋鸡场开产后普遍发生由J亚群禽白血病病毒(ALV-J)感染引起的血管瘤病例,给我国蛋鸡业造成了巨大的经济损失,并引发了不少商业纠纷。本文依托国家农业公益性行业科研专项经费项目"鸡白血病流行病学和防控措施的示范性研究",基于对各地鸡白血病的广泛调查研究,就鸡白血病的病原特性和流行特点、我国鸡白血病的流行史和感染状况、蛋鸡中ALV-J的传染来源和系谱关系、鸡白血病的鉴别诊断和防控措施进行了系统阐述。     

禽网状内皮增生病病毒对不同日龄SPF鸡的致病性比较

本研究拟通过禽网状内皮增生病病毒(REV)分子克隆化病毒REV-C99株对1、8日龄SPF鸡的致病性比较,探讨REV的致病性与感染日龄的关系。在1、8日龄SPF鸡,分别腹腔注射REV-C99株1000个TCID50.只-1,以新城疫病毒(NDV)灭活疫苗免疫后HI抗体滴度的测定结果为指标,比较了REV对不同日龄SPF鸡的致病性。结果表明,与对照组相比,1日龄SPF鸡感染REV后,即使经过NDV灭活疫苗的二次、三次免疫,对NDV的HI抗体滴度仍然差异显著(P0.05);而8日龄SPF鸡感染REV后则随着感染时间的延长以及NDV灭活疫苗的二次、三次免疫,对NDV的HI抗体滴度差异不显著(P0.05)。本研究表明,REV感染1日龄SPF鸡可显著抑制对NDV灭活疫苗免疫后的体液免疫反应,并且这种免疫抑制作用可持续至4个月;而8日龄SPF鸡感染REV后更多表现为一过性的致病作用。显然,REV的致病性对雏鸡感染日龄具有很强的依赖性,从而揭示出控制REV早期感染的重要性并具有现实意义。     

对鸡群A/B亚群禽白血病病毒抗体ELISA检测阳性率的可靠性评估

为了评估某些批次的禽白血病病毒（ALV）抗体商品化 ELISA检测试剂盒在检测鸡群中A/B亚群禽白血病病毒（ALV-A/B）抗体阳性率的可靠性,使用同一批次试剂盒,对往年ALV-A/B抗体检测阳性率达标（＜1%）的A类鸡场及往年ALV-A/B抗体检测阳性率不达标（＞1%）的B类鸡场所送检样品进行初检,在A类鸡场初检阳性样品中挑选S/P值最高的8份阳性样品,在B类鸡场初检阳性样品中挑选S/P值最高的40份样品,再使用相同批次的试剂盒将每个初检阳性样品做3个孔的重复检测,并以上述48份样品为一抗同时做间接免疫荧光试验（IFA）,系统比较了IFA和ELISA 2种方法检测结果的一致性。结果发现,A类鸡场初检为阳性的8份样品经复检和IFA检测均变为阴性;B类鸡场4份样品（4/40）ELISA复检和IFA结果均变为阴性,36份样品（36/40）ELISA复检仍为阳性,但其中20份呈IFA阳性,16份呈IFA阴性,结果表明某些批次的试剂盒在特异性和稳定性方面存在一定问题。提示,相关企业在进行大批量样本检测时,ELISA阳性样品需结合IFA进行结果判定,以提高检测的准确性。