从一病例谈对肉仔鸡J—亚群白血病的认识

2000年11月，济宁市郊区的三个饲养户在饲养三群肉仔鸡(每户1 000只)时发现，鸡群从20日龄左右开始出现死亡，有一户日死亡鸡高达10只左右，因曾喂过一段时间结块怀疑发霉的饲料，故怀疑是霉饲料中毒，28日龄时来校化验，发现：病鸡的个体差异较大，有的鸡出现瘫痪，在进行病理组织检查时发现，有两只鸡的肝脏出现了淡黄色大小各异的斑块，使肝脏呈花斑状，未发现其他病变，故将心、肝、脾、皮肤、关节等用福尔马林固定，制作了病理切片，病理组织学观察发现：肝、心、脾、肾等器官组织有嗜酸性颗粒的髓细胞局灶性浸润，故怀疑为J－亚群白…     

猪瘟病毒囊膜糖蛋白的研究进展

猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CFSV;或称Hog cholera Virus,HCV),属黄病毒科瘟病毒属[1].感染猪可引起高热、皮肤变色,大量内出血及神经系统症状等,死亡率很高.     

鸡IL-18 cDNA的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

运用RT—PCR方法，从经脂多糖(LPS)诱导的鸡马立克氏病成淋巴细胞样细胞系MIDCC-MSBI总RNA中扩增得到了鸡白细胞介素18(Chicken interleukin-18，ChIL-18)成熟蛋白基因的cDNA，并将其克隆到pMD18-T载体上。DNA序列测定表明，克隆得到的ChIL-18cDNA与国外报道的完全一致，包括终止密码子在内其编码区的长度为510bp，编码169个氨基酸残基的蛋白质。将ChIL-18成熟肽段编码区定向克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游，构建成原核表达质粒pGEX—ChIL18。该质粒的BL21(DE3)DysS转化菌在IPTG的诱导下可高效表达GST—ChIL18基因融合蛋白，表达量约占菌体总蛋白的32％。     

I型马立克氏病病毒特异性核酸探针试剂盒的制备和应用

应用非放射性的地高辛标记法来标记Ⅰ型马立克氏病病毒特异性DNA，通过优化核酸探针标记、检测的步骤，建立了马立克氏病的诊断试剂盒。该探针在1：1250的工作浓度下，能检出1－2pg/μl的马立克病病毒基因组DNA，探针与其它病毒DNA不发生反应，具有较好的特异性，该试剂盒稳定性较好，可重复使用，初步具备了诊断试剂盒的基本要求，该探针和方法成功地用于鸡群中马立克氏病感染状态的流行病学调查。     

抗J亚群禽白血病病毒囊膜糖蛋白特异性单克隆抗体的研制及其特性

J亚群禽白血病病毒（ALV-J）是一种主要感染肉用型鸡的反转录病毒。本研究用表达ALV-J囊膜蛋白基因产物的Sf9细胞免疫Balb/c小鼠，取其脾脏细胞与骨髓瘤细胞NS1进行融合，获得了4株特异性抗ALV-J的单克隆抗体。免疫荧光分析结果表明，3株单克隆抗体仅与所试验的ALV-J毒株反应，而不能与ALV的A、B、C、D和E亚群的毒株反应。有趣的是，有一株单克隆抗体可以与所有试验的外源性ALV毒株反应，但不与内源性的E亚群反应。Western Blot和免疫沉淀试验结果表明，单克隆抗体识别的ALV-J囊膜糖蛋白的分子量为90-94kD，识别未糖基化的囊膜蛋白分子量约为53kD。用这些单克隆抗体能检测出ALV-J病毒感染鸡胚成纤维细胞中的病毒抗原。这些结果提示这些单克隆抗体可用于ALV-J疾病的诊断和流行病学调查。     

鸡贫血病毒细胞凋亡素基因的原核表达及其免疫学活性

将鸡贫血病毒 (CAV)细胞凋亡素基因克隆入表达性载体 p GEX- 5 X- 3,在大肠杆菌中以融合蛋白的形式获得表达。再以表达产物免疫小鼠 ,制备抗 CAV凋亡素的多克隆抗体。以其对 CAV感染的 MSB1细胞作间接免疫荧光试验(IFA)检测呈阳性 ,表明表达产物保留了其相关的天然抗原特性。     

中国株兔出血症病毒衣壳蛋白VP60基因在大肠杆菌中的表达及其免疫原性鉴定

应用RT—PCR技术扩增编码兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)WX84株衣壳蛋白VP60基因，将PCR产物按相应的阅读框架克隆到表达性载体pGEX-6P-1中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游。将重组质粒转化入大肠杆菌BL21株，在1．0mmol／L 1PTG和37C的条件下诱导，VP60—GST基因融合蛋白获了高效表达。经聚丙烯酰胺凝胶电泳和western-blotting试验证实所表达的融合蛋白产物相对分子质量与预期的87000相符。将表达产物经电泳切胶回收目的条带后免疫小鼠，所得抗血清应用间接ELISA检测，与RHDV病毒粒子呈阳性反应。试验结果表明，大肠杆菌中表达的RHDVVP60融合蛋白在抗原性上与天然衣壳蛋白具有一定的相似性。     

用IFA和PCR对部分省区肉鸡白血病的调查

从山东省内不同地区和宁夏、河南等省随机采集肉鸡和肉种鸡的病料 ,采用间接荧光抗体实验和 PCR方法进行 J亚群禽白血病的流行病学调查 ,结果从 92份商品代肉鸡病料和 1 5份父母代种鸡病料中先后鉴定出 8株 J-AL V,其中 3株来自商品代肉鸡 ,5株来自父母代肉种鸡 ,感染 AL V-J的肉鸡品系有 AA、科宝和爱维因 ,表明我国肉鸡群中 AL V-J的感染十分严重。     

禽肉中氯霉素药残的快速检测

近年来 ,在对外出口畜禽食用产品时 ,对氯霉素残留的检测成为必不可少的检测指标。国外一般要求畜禽食用产品中氯霉素不得超过 1ｎｇ/ｍｌ,这对检测手段的灵敏度提出了很高的要求。目前我国国内常用的检测氯霉素药残的方法是使用液相法或气相色谱法来对其进行检测 ,但这种检测方法对样品的处理比较复杂 ,对实验操作技术要求很高 ,不利于在基层生产单位推广应用。本实验根据酶联免疫吸附 (ＥＬＩＳＡ)借助于氯霉素残留快速检测试剂盒对鸡肉组织残留的氯霉素进行检测 ,处理简单 ,操作步骤简便 ,可以快速有效地测定出肉品中的氯霉素残留量 ,其…     

不同方法对网状内皮组织增殖病病毒的检测

从山东、江苏、上海等地的鸡场中，收集疑为网状内皮组织增殖病病毒（REV）感染鸡的脾脏、肝脏56份，分别通过聚合酶链式反应（PCR）、斑点杂交试验（Dot-blot)和间接免疫荧光试验（IFA）对其进行REV检测。结果有21份呈PCR阳性，20份呈Dot-blot阳性，15份呈IFA阳性，且所有IFA阳性样品，PCR和Dot-blot检测都呈阳性，20份Dot-blot阳性样品中有19份呈PCR阳性。研究表明，PCR检测REV较其他方法敏感，可作为REV的常规检测方法之一。