水生动物医学领域本科人才培养体系的探索与实践

水产业的快速发展对水生动物医学领域专业人才培养提出了新的要求。该研究从人才培养理念、人才培养规划与定位、人才培养方案3个方面,对华中农业大学在淡水养殖领域水生动物医学领域人才培养的探索与实践进行总结,以期推动水生动物医学专业的建设,促进我国水生动物医学教学质量的提高,为水产品从池塘到餐桌的安全保驾护航。     

寄生部位分化对吉陶单极虫种群分化的影响

为探究寄生部位分化对黏孢子虫种群分化的影响, 以吉陶单极虫(Thelohanellus kitauei)为例, 研究了寄生于鲤(Cyprinus carpio)皮肤和肠道的吉陶单极虫的形态、寄生特征和分子遗传信息。寄生皮肤的吉陶单极虫(S 型)形成单个明显孢囊, 直径约 2.1 cm, 寄生肠道的吉陶单极虫(I 型)形成多个(16 个)孢囊, 直径 0.21~0.82 cm; 孢子形态特征相比, S 型和 I 型孢子鞘膜宽差异不显著(P＞0.05), 但孢子厚差异显著(P＜0.01), 孢子长、极囊长、鞘膜长、孢子宽和极囊宽呈现极显著差异(P＜0.001); 组织病理结果显示, 二者均寄生于结缔组织中, 引起淋巴细胞浸润、组织增生等炎症反应, 但 S 型孢子主要分散在真皮疏松层, 部分孢子侵入致密层, 造成结缔组织弯曲、变形, 而 I 型孢子主要分散在肠黏膜下层上方, 挤压并导致肠绒毛萎缩; 分子序列比对发现, S 型和 I 型的 SSU rDNA 序列相似度较高, 为 99.7%, 具有 4 个差异位点, ITS-5.8S rDNA 序列间相似度较低, 仅 97.3%, 共有 20 个差异位点。基于 SSU rDNA 和 ITS-5.8S rDNA 序列构建的系统进化树显示, S 型和 I 型于吉陶单极虫支系内部各自聚类, 表明相同寄生部位的吉陶单极虫具有更近的亲缘关系。综上所述, 寄生不同部位的吉陶单极虫在形态、寄生特征和遗传信息方面存在不同程度的差异, 具有明显的种群分化特征, 说明寄生部位分化是驱动黏孢子虫种群分化的重要因素。     

克氏原螯虾不同生长阶段饲料适宜蛋白水平的研究

克氏原螯虾作为典型的杂食性偏肉食性动物,其不同生长阶段对日粮蛋白水平的需求存在明显差异.试验分别以体质量为0.026、1.04和5.06 g左右的不同生长阶段(仔虾、幼虾和亚成体虾)克氏原螯虾为研究对象,每个生长阶段分别设计5种不同蛋白水平的配合饲料,每个处理设置3个重复,分别进行为期8周的生长饲养试验.结果显示:①在...     

基于I-FABP的鲫肠道通透性检测方法的建立

肠道通透性与肠道稳态及个体健康状况直接相关，目前尚缺乏鱼类肠道通透性的定量评价方法及试剂。血清中肠脂肪酸结合蛋白（intestinal fatty acid binding protein，I-FABP）是肠道通透性的重要血清生物学指标，可用于肠道通透性的定量评价。为建立鲫（Carassius auratus）血清I-FABP的定量检测方法，克隆了鲫I-FABP基因，经原核表达和纯化，并利用重组蛋白分别免疫新西兰白兔（New Zealand white rabbit）及小鼠（Mus musculus），制备了兔源及鼠源多克隆抗体，其效价均为1∶80 000。以纯化的兔源多克隆抗体作为包被蛋白，以辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）标记的鼠源多克隆抗体作为酶标抗体，通过优化各反应条件建立了基于鲫I-FABP的双抗体夹心酶联免疫检测方法（double antibody sandwich ELISA，DAS-ELISA）。标准曲线的线性回归方程为y=0.003 5x+0.036 7，拟合度较高R²为 0.999 1，临界值为0.090 6。批内及批间变异系数分别为1.17%～5.50%及0.16%～4.78%，具有较好的重复性。以该方法对54份样品进行检测，与商业化试剂盒对比，符合率为100%。构建的DAS-ELISA检测方法可用于鲫肠道通透性的定量评估。鉴于鱼类I-FABP的保守性，该方法或可用于其他鱼类肠道通透性的定量评价。     

黑斑侧褶蛙脑微血管内皮细胞的原代培养及鉴定

为了建立蛙脑微血管内皮细胞原代培养方法，实验以黑斑侧褶蛙脑组织为实验材料，在无菌条件下分离出大脑灰质，利用0.1%Ⅱ型胶原酶和胶原酶-分散酶进行消化，经过Percoll密度梯度离心后，将获取的脑微血管段接种于鼠尾胶包被的培养瓶中，于28°C、5%CO₂条件下原代培养蛙脑微血管内皮细胞，并通过细胞形态学观察和Ⅷ因子相关抗原免疫荧光对细胞进行鉴定，最后用四唑蓝比色法(MTT)测定细胞的生长状态。结果显示，微血管段在体外培养1 d后开始贴壁生长，并逐渐扩大成团簇状，培养至7 d时，细胞呈“铺石路样”镶嵌式排列，表现为区域性单层生长；Ⅷ因子免疫荧光检测发现胞质呈红色，表达为阳性，阳性细胞率达97%以上；MTT实验显示，细胞在第3～5天时生长速率最快。本研究首次建立了蛙脑微血管内皮细胞的原代培养与鉴定方法，为体外研究蛙类神经性疾病的发病机理奠定基础，也为相关药物的研发和筛选提供了细胞模型。