| 黑斑侧褶蛙脑微血管内皮细胞的原代培养及鉴定 |
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| 引用本文： | 艾单寒,侯家昊,刘芳园,顾泽茂,胡瑞雪.黑斑侧褶蛙脑微血管内皮细胞的原代培养及鉴定[J].水产学报,2023,47(8):089408-089408. |
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| 作者姓名： | 艾单寒 侯家昊 刘芳园 顾泽茂 胡瑞雪 |
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| 作者单位： | 华中农业大学水产学院，湖北 武汉 430070;湖北省水生动物病害防控工程技术研究中心，湖北 武汉 430070;华中农业大学水产学院，湖北 武汉 430070;湖北省水生动物病害防控工程技术研究中心，湖北 武汉 430070;华中农业大学双水双绿研究院，湖北 武汉 430070;教育部长江经济带大宗水生生物产业绿色发展工程研究中心，湖北 武汉 430070;华中农业大学水产学院，湖北 武汉 430070;湖北省水生动物病害防控工程技术研究中心，湖北 武汉 430070;教育部长江经济带大宗水生生物产业绿色发展工程研究中心，湖北 武汉 430070 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(32202990)；湖北省自然科学基金 (2021CFB128)；中国博士后科学基金 (2021M701351) |
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| 摘 要： | 为了建立蛙脑微血管内皮细胞原代培养方法，实验以黑斑侧褶蛙脑组织为实验材料，在无菌条件下分离出大脑灰质，利用0.1%Ⅱ型胶原酶和胶原酶-分散酶进行消化，经过Percoll密度梯度离心后，将获取的脑微血管段接种于鼠尾胶包被的培养瓶中，于28°C、5%CO2条件下原代培养蛙脑微血管内皮细胞，并通过细胞形态学观察和Ⅷ因子相关抗原免疫荧光对细胞进行鉴定，最后用四唑蓝比色法(MTT)测定细胞的生长状态。结果显示，微血管段在体外培养1 d后开始贴壁生长，并逐渐扩大成团簇状，培养至7 d时，细胞呈“铺石路样”镶嵌式排列，表现为区域性单层生长；Ⅷ因子免疫荧光检测发现胞质呈红色，表达为阳性，阳性细胞率达97%以上；MTT实验显示，细胞在第3～5天时生长速率最快。本研究首次建立了蛙脑微血管内皮细胞的原代培养与鉴定方法，为体外研究蛙类神经性疾病的发病机理奠定基础，也为相关药物的研发和筛选提供了细胞模型。
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| 关 键 词： | 黑斑侧褶蛙 脑组织 微血管内皮细胞 原代培养 |
| 收稿时间： | 2021/7/20 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2022/6/17 0:00:00 |
Primary culture and identification of Pelophylax nigromaculata brain microvascular endothelial cells (BMECs) |
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| AI Danhan,HOU Jiahao,LIU Fangyuan,GU Zemao,HU Ruixue.Primary culture and identification of Pelophylax nigromaculata brain microvascular endothelial cells (BMECs)[J].Journal of Fisheries of China,2023,47(8):089408-089408. |
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| Authors: | AI Danhan HOU Jiahao LIU Fangyuan GU Zemao HU Ruixue |
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| Institution: | College of Fisheries, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China;Hubei Engineering Technology Research Center for Aquatic Animal Diseases Control and Prevention, Wuhan 430070, China;College of Fisheries, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China;Hubei Engineering Technology Research Center for Aquatic Animal Diseases Control and Prevention, Wuhan 430070, China;Shuangshui Shuanglü Institute, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China;Engineering Research Center of Green development for Conventional Aquatic Biological Industry in the Yangtze River Economic Belt, Ministry of Education, Wuhan 430070, China; College of Fisheries, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China;Hubei Engineering Technology Research Center for Aquatic Animal Diseases Control and Prevention, Wuhan 430070, China;Engineering Research Center of Green development for Conventional Aquatic Biological Industry in the Yangtze River Economic Belt, Ministry of Education, Wuhan 430070, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pelophylax nigromaculata brain microvascular endothelial cells primary culture |
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