嗜水气单胞菌黏附素基因克隆、序列分析及表达

利用PCR方法对江浙一带淡水鱼类暴发病病原致病性嗜水气单胞菌主要血清型O:9和O:97代表菌株TPS-30和BSK-10的黏附素基因(Al)进行扩增,并分析不同血清型和不同来源菌株Al的序列差异.结果表明:嗜水气单胞菌TPS-30株与BSK-10株相比较,Al序列在N端有个突变区,TPS-30株的Al基因突变区较BSK-10株短;通过pET28a(+)载体构建TPS-30株黏附素基因的表达载体pET28a-AHal,转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,通过SDS-PAGE分析,显示与预期大小约41ku相吻合的融合蛋白带,诱导6h后目的蛋白获得了高效表达,表达量占菌体总蛋白的44.0%;通过免疫攻毒试验发现,免疫银鲫后血清效价在第5周达到峰值,重组表达的蛋白对同源菌株TPS-30和异源菌株BSK-10都具有较高的免疫保护率,分别达到94.7%和77.8%.这为基因工程亚单位疫苗的开发奠定了基础.     

抗哈维氏弧菌脂多糖单克隆抗体的制备及其鉴定

以哈维氏弧菌GYC1108-1细菌颗粒性抗原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,5次免疫后取其脾细胞与SP2/0-Ag-14骨髓瘤细胞融合.用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对杂交瘤进行筛选,阳性克隆经3次亚克隆后,获得一株针对GYC1108-1脂多糖(LPS)的特异性单克隆抗体,命名为2 F 9.该株单抗细胞培养上清ELISA效价为1:1 600,腹水效价为6.4×104,交叉反应结果表明2 F 9除了与测试的多株哈维氏弧菌发生免疫识别外,还与溶藻弧菌、麦氏弧菌和副溶血弧菌代表株发生免疫交叉反应,但不与拟态弧菌、鳗弧菌、嗜水气单胞菌代表株等发生交叉反应.用温和高碘酸氧化法对LPS处理后,GYC1108-1的LPS与2 F 9的反应部分减弱,免疫印迹结果表明2 F 9识别LPS的类脂A抗原.用抑制ELISA法半定量检测GYC1108-1培养上清的LPS,测得培养48 h LPS释放量不超过39μg/mL,大大低于使鱼类致死所需的LPS的剂量.     

不同饲料对乌鳢中汞和甲基汞富集水平的影响

为了解冰鲜鱼和水产配合饲料2种不同饲料对乌鳢(Ophiocephalus argus)中汞和甲基汞富集水平和食用安全的影响,实验采用ICP-MS法、液相-原子荧光分光光度法分别测定乌鳢在摄食冰鲜鱼和水产配合饲料两种不同饲料后,研究其肌肉、肝脏和肾脏3种不同组织中总汞和甲基汞的含量随养殖周期的富集规律。结果显示:在整个养殖过程中,饲料投喂组肌肉、肝脏和肾脏中总汞和甲基汞含量均低于冰鲜鱼投喂组,其中冰鲜鱼组肌肉、肝脏中总汞和甲基汞的富集均明显高于饲料组,肾脏中总汞的富集明显高于饲料组。从不同组织看,肌肉对总汞和甲基汞的富集显著高于肝脏和肾脏。肌肉中汞主要以甲基汞形式存在,平均含量占总汞的84.2%,低于国家食品安全限量标准,食用风险较低。相关性分析显示,2种不同饲料中总汞、甲基汞含量对乌鳢生长周期内总汞、甲基汞富集无显著性影响。结果表明乌鳢配合饲料养殖较冰鲜鱼养殖更为安全,适宜进一步推广运用。     

基于ICP-MS的拟穴青蟹蜕壳期前后蟹肉Ca2+、Mg2+浓度变化研究

采用石墨微波消解技术处理拟穴青蟹(Scylla paramamosain)蟹肉样品,ICP-MS同时测定Ca、Mg两种元素,标准曲线相关系数均≥0.995,前处理耗时短,消解效果良好。结果表明,拟穴青蟹在硬壳期时体内Ca2+、Mg2+平均含量为471、2 508 mg/kg,而蜕壳后分别为385、1 565 mg/kg,拟穴青蟹蜕壳前后Mg2+浓度差异不显著、Ca2+浓度差异显著。因此,为使拟穴青蟹生长过程中甲壳顺利蜕壳及硬化,建议在养殖池中合理补充Ca2+、Mg2+。     

核酸疫苗的研究进展及其在鱼类免疫中的应用

核酸疫苗是20世纪90年代初发展起来的一种新型疫苗,它克服了传统疫苗所存在的一些缺陷,具有许多传统疫苗不可比拟的优点。有关核酸疫苗的研究已成为国内外科技界研究的热点之一,呈现出良好的应用前景。作者综述了核酸疫苗的研究背景、构建过程、作用机理以及疫苗本身具有的优缺点等,同时,概述了近年来国内外对鱼类DNA疫苗基础研究和应用研究的新进展,探讨了鱼用DNA疫苗当前需要解决的问题及发展前景。     

稻虾综合种养模式中小龙虾的品质评价

为研究稻虾综合种养模式中小龙虾的品质,选取了三种不同重量规格的小龙虾进行营养成分分析,结果发现：成体生长阶段的小龙虾营养价值最高。对成体生长阶段的小龙虾进行了活体和死体小龙虾的质构特性和风味物质分析,结果发现：成体小龙虾的活体和死体的质构除了硬度具有显著性差异外,其他各项参数无显著性差异;小龙虾采样后死亡2小时内,肉香味减少,同时产生了多种不良风味物质,建议不要食用死体小龙虾。可见,在水产加工阶段,选择体重为10-20克的成体活小龙虾进行加工,可达到最佳的风味、口感和营养价值。     

三疣梭子蟹血清凝集素的生物学特性

对三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)血清凝集素的凝集特性进行了研究。结果表明:三疣梭子蟹血清凝集素对鲫鱼、中华鳖、草鱼、鸡和人类A、B、O型血细胞没有凝集作用,但是对小鼠、兔的血细胞表现出较强的凝集活性,其中对小鼠血细胞的血凝活性达到210,对兔血细胞的血凝活性达到28;盐度对其凝集活性有较大影响,Na Cl浓度在0.6 mol/L以上时基本失活;凝集素活性最适p H值为6.0~7.4;血清凝集素对Ca2+、Mg2+离子有明显的依赖性,EDTA可以明显抑制其凝集活性;糖抑制结果表明,血清凝集素活性能被N-乙酰葡萄糖胺及N-乙酰甘露糖胺特异性抑制;对血清凝集素进行硫酸铵分级沉淀分离后,发现凝集素活性主要分布在25%饱和度硫酸铵沉淀区;聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)结果表明,主要蛋白条带在72~95 ku。     

4种中草药提取物对水霉的体外抑菌试验

实验采用生长速率法和孢子萌发法测定了五倍子、黄连、黄芩及乌梅4种中草药的提取物对水霉菌丝及游动孢子的抑制作用。结果表明,4种中草药的提取物对水霉菌丝生长及游动孢子的萌发均有一定程度的抑制作用。其中以黄芩的乙酸乙酯提取物对水霉菌丝的生长抑制作用最显著,0.1mg/m L时抑制效率为83%,0.5mg/m L时可完全抑制水霉菌丝的生长。黄芩的乙酸乙酯及无水乙醇提取物在浓度为0.4mg/m L,可使80%的水霉游动孢子萌发被抑制。     

两株草鱼呼肠孤病毒江西株的分离与鉴定

对从江西省南昌县莲塘镇的患病草鱼鱼种池塘采集到草鱼出血病疑似病样材料分离出的两株病毒株进行了鉴定。结果显示:用除菌过滤后的患病鱼肝脏、脾脏、肾脏组织浆滤液腹腔注射感染8～10 cm健康草鱼鱼种,5 d后试验鱼发病,可复制出自然发病症状,死亡率达50%以上,对照组未有死亡。用病样滤液接种草鱼肾细胞系(CIK),可产生细胞病变效应(CPE),病毒的TCID50分别为10-8.3/0.1 mL和10-8.0/0.1 mL。理化特性研究结果显示:氯仿、乙醚处理组病毒的感染力和对照组相比变化不显著。病毒基因组RT-PCR反应可扩增出目的片段,序列测定与分析结果表明,其与GenBank中GCRV(登录号为AF403392,AF239175)相应序列的同源性达99%以上。     

斑点叉尾(鱼回)病害防治研究进展

斑点叉尾(鱼回)(Ictalurus punctatus)又称美洲鲶、沟鲇,属鲶形目、(鱼回)科,原产于美国,其商业化养殖占美国有鳍鱼类总养殖产量的50%～85%,我国湖北省水产科学研究所于1984年从美国引进后,因其具有生长速度比较快、肉质细嫩、销售价格较高的特点,受到了广大消费者和水产养殖业者的欢迎.2000年我国斑点叉尾(鱼回)开始出口美国,2005年1月就占美国市场6%,并且有逐年加大的趋势,更是加快了我国斑点叉尾(鱼回)养殖业的发展.