嗜水气单胞菌和大肠杆菌LPS对草鱼免疫相关基因表达的影响

将嗜水气单胞菌粗脂多糖(C-LPS)和大肠杆菌脂多糖(E-LPS)分别经腹腔注射草鱼(剂量为4mg/kg),以注射PBS为对照。48h后,分别提取各组草鱼的头肾、脾脏、肾脏、肝脏和肠组织中的总RNA,利用Real-time PCR的方法检测不同组织中TNF-α、IL-1β、IL-10和TLR4基因的表达情况。结果显示,与对照组相比,头肾中,TNF-α和IL-1β的表达量在E-LPS组显著升高,而IL-10的表达显著下降;C-LPS组TNF-α和IL-10的表达量显著性升高;TLR4在两试验组均有显著性降低。脾脏中,TNF-α、IL-1β和IL-10在E-LPS组与对照组无显著差异,而IL-1β和IL-10的表达在C-LPS组有显著性升高;TLR4在两试验组有显著性降低。肾脏中,TNF-α表达在E-LPS组有显著性升高;IL-1β和IL-10在C-LPS组有显著性升高;TLR4在两试验组中与对照组无显著性差异。肝脏中,TNF-α、IL-10和TLR4在两试验组均有显著性升高;IL-1β的表达在E-LPS组显著高于对照组和C-LPS组。肠组织中,TNF-α和IL-10在两试验组有显著性降低和升高;IL-1β和TLR4与对照组间无显著性差异。表明嗜水气单胞菌C-LPS和大肠杆菌LPS均可引起草鱼细胞因子基因表达的变化,对于机体免疫反应起到一定的调节作用,但LPS对TLR4基因并没有引起显著的上调作用,这与哺乳类动物的研究结果不同。     

布鲁氏杆菌LPS抗原制备及其免疫原性测定

采用热酚水法提取布鲁氏杆菌脂多糖,分离、纯化并SDS-PAGE银染鉴定。纯化的细菌内毒素免疫小鼠,通过斑点ELISA测定血清抗体效价,检测细菌内毒素免疫原性。采用热酚法能获得较高纯度的细菌内毒素,其免疫原性较高,斑点ELISA测血清效价达到1∶1 000 000,与全菌免疫原性接近。本研究为制备布鲁氏杆菌单克隆抗体和建立布鲁氏杆菌病快速诊断方法奠定研究基础。     

Extraction,Purification and Activity Analysis of Lipopolysaccharides from Escherichia coli Isolated from Swine

In order to obtain higher purity and high yield of LPS isolated from Escherichia coli, and evaluate its virulence,excrement of diarrhea piglet was collected as pathological samples, of which, some strains of Escherichia coli were isolated and identified. And furthermore, a strain of Escherichia coli was acquired by 16S rDNA identification. The LPS from this strain of Escherichia coli was isolated with the hot-phenol water method and purified by DNaseⅠ, RNaseA, proteinase K treatment and alcohol precipitation. The polysaccharide, protein and nucleic acid content of purified LPS were detected by phenol-sulfuric acid method, Bradford method and UV points spectrophotometric method. And its bioactivity and acute median lethal dose was determinated by tachypleus amebocyte lysate (TAL) method and acute toxicity experiment method, respectively. The results showed that a strain of highly pathogenic Escherichia coli was successfully isolated. The average yield of purified LPS was 3.74%, the proportion of the polysaccharide was 13.40%, the protein was 0.48%, and the nucleic acid was 0.06%. SDS-PAGE electrophoresis and silver stain showed that the bands were mainly concentrated in the range of 14 to 160 ku. The LAL bioactivity of the prepared LPS was 1.21×10⁷ EU/mg, LD₅₀ of the mouse abdominal cavity was 31.86 mg/kg. The results revealed that the diarrhea piglets in the farm was caused by pathogenic Escherichia coli,purified LPS from this strain of Escherichia coli had the advantages of higher purity, high yield and strong virulence, which would provide theoretical data for clinical prevention and treatment of diarrhea piglets.     

气候和免疫单一或联合应激对4种不同品系蛋鸡生产性能的影响

本试验以4种不同品系的商品蛋鸡为研究对象,探讨了长期气候应激(热暴露)和急性免疫应激(脂多糖,LPS)对其生产性能的单一或联合效应。在体液免疫活性和新生期成活率方面,这4种蛋鸡两两不同,各具特色。22周龄时,每个品系选取80只蛋鸡,随机分配到两个完全相同的人工气候室内,其中一个恒温为32℃,另一个为21℃。热应激开始后1 d,每个气候室每种品系内,一半蛋鸡静脉注射脂多糖。试验期共23 d,在此期间统计采食量、体重、日产蛋数、蛋重和蛋壳厚度等指标。结果发现,温热应激可以显著降低蛋鸡的采食量、体重、日产蛋数、蛋重和蛋壳厚度,而免疫应激只能显著降低前四者,且体重和蛋重尚属LPS处理与时间的互作效应。随着时间的逐步推移,尽管试验鸡群在经历免疫应激后能够恢复如初,但对于温热应激却不能完全耐受。连续热暴露23 d后,蛋鸡的体重、采食量和日产蛋数出现下滑。由此说明,急性LPS处理与长期高温应激对于产蛋鸡群的影响力度不同,同时,试验蛋鸡对于这些应激因素的适应机制存在差异。体液免疫活性和新生期成活率的单边或联合优势,与试验鸡群对不同应激源的颉颃反应没有必然联系,不过蛋鸡采食量的品系与高温处理互作,体重的品系、高温处理与时间互作,品系、LPS处理与时间互作,日产蛋数的品系与高温处理互作,品系与LPS处理互作等效应均显著。虽然各个品系蛋鸡的反应模式类似,但反应水平不同,由此提示,某些品系蛋鸡的应激抵抗能力异于常类。     

内毒素及其诱导的信号转导

细菌内毒素中毒在临床上主要表现为机体发热、休克、恶质病、死亡。多种炎性细胞因子是引起上述临床表现的原因。内毒素通过与细胞膜表面相应的分子如脂多糖结合蛋白、CD14、Toll样受体相互作用，将信号跨膜传递至胞内并活化NF－κB（nuclear factor of kappa B)，从而使细胞核基因激活，产生多种炎性细胞因子。本文主要综述了近年来在内毒素诱导的信号转导方面所取得的进展。     

中华鳖对嗜水气单胞菌粗脂多糖(LPS)的免疫应答

将采用温酚法从嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、柱状嗜纤维菌(Cytophaga columnaris)和叉尾鮰爱德华菌(Edwardsiella ictaluri)中提取的粗脂多糖(crude lipopolysaccharide,LPS)作为免疫原,注射接种中华鳖(Pelodiscus sinensis)后,通过测定受免鳖的交叉凝集抗体效价、肾脏和血液中吞噬细胞的吞噬活性和对A.hydrophila活菌细胞内杀菌活性,比较了3种致病菌的粗LPS对中华鳖的免疫原性。试验结果表明,从3种致病菌中提取的粗LPS对中华鳖均具有较强的免疫原性,受免鳖的血清中存在对3种致病菌的交叉凝集抗体,与对照鳖相比,肾脏和血液中吞噬细胞对吞噬原的吞噬活性和对A.hydrophila活菌杀菌活性明显上升。说明在3种供试菌的粗LPS上不同程度地存在3种致病菌的共同保护性抗原。     

CRP和LPS致正常人外周血单核细胞NF-κB活化及IL-6合成的比较

目的观察C-反应蛋白(CRP)和脂多糖(LPS)诱导人外周血单核细胞合成白细胞介素-6水平及两者致单核细胞NF-κB活化的程度,比较其致炎作用.方法Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法观察CRP和LPS刺激单核细胞产生IL-6的时间效应,比较其峰值.免疫细胞化学观察两者致单核细胞NF-κB活化的程度.结果CRP和LPS刺激IL-6合成开始的时间分别是4小时和2小时,呈时间依赖性,在24小时达高峰.LPS组峰值高于CRP组.在刺激16小时后,LPS组NF-κB活化的程度高于CRP组.结论CRP和LPS均能活化NF-κB,并诱导单核细胞产生IL-6;10ng/mlLPS的致炎作用强于20ug/mlCRP.     

3种鱼类致病菌粗脂多糖（LPS）对斑点叉尾鮰的免疫原性

用温酚法分别从柱状嗜纤维菌（Cytophaga columnaris）、嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）和叉尾鮰爱德华菌（Edwardsiella ictaluri）3种鱼类致病菌中提取粗脂多糖（LPS）作为免疫原．分别接种斑点叉尾鮰（Ictalurus punctatus Rafinsque）后．通过测定受免鱼的交叉凝集抗体效价、头肾和血液中吞噬细胞的吞噬活性以及对A．hydrophila活菌细胞内的杀菌活性．探讨了3种致病菌的粗LPS对斑点叉尾鮰的免疫原性。结果表明，从3种致病菌中提取的粗LPS对斑点叉尾鮰均具有较强的免疫原性．受免鱼的血清中存在对3种致病菌的交叉凝集抗体．与对照鱼相比．头肾和血液中吞噬细胞对吞噬原的吞噬活性和对A．hydrophiln活菌杀菌活性明显上升。说明在3种供试菌的粗LPS上不同程度地存在3种致病菌的共同保护性抗原。     

成团泛菌低分子脂多糖的急性毒性、刺激性、致敏性及遗传毒性评估

本研究对成团泛菌低分子脂多糖（Pantoea agglomerans lipopolysaccharide,LPSp）的安全性进行初步评估。本研究采用一次限量法,用昆明种小鼠进行LPSp急性经口毒性试验,了解LPSp的急性毒性;采用新西兰兔分别进行LPSp急性和多次皮肤刺激性试验以及急性眼刺激性试验,了解LPSp的皮肤和粘膜刺激性;采用豚鼠进行LPSp皮肤变态反应试验,了解LPSp的致敏性;应用平板掺入法进行鼠伤寒沙门氏菌/回复突变试验和小鼠骨髓细胞微核试验考察LPSp的遗传危害。急性毒性试验结果显示,LPSp对小鼠经口一次灌胃的LD50大于5000mg/kg体重,属实际无毒级别;LPSp急性和多次皮肤刺激性试验以及急性眼刺激性试验结果显示,皮肤刺激和眼刺激积分均为0分,LPSp对皮肤无刺激性、对眼睛无急性刺激性;在皮肤变态反应试验中,LPSp在各观察时间点的皮肤变态反应积分均为0分,其致敏率均为0%,说明LPSp对豚鼠无致敏性;LPSp的鼠伤寒沙门氏菌/回复突变试验结果呈阴性（P〉0.05）;LPSp的小鼠骨髓细胞微核试验结果亦呈阴性,LPSp各剂量组的微核发生率与阴性对照组未见统计学差异（P〉0.05）,而与阳性对照组有明显差异（P〈0.01）。本研究结果表明,在本实验剂量范围内,LPSp对小鼠经口毒性极低,属实际无毒级别,对家兔皮肤和眼睛无明显刺激性,对豚鼠无致敏性,对所试菌株和小鼠体细胞无诱变性和致突变性。