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应用pGEX原核表达载体构建了牛朊蛋白的1个正常重组蛋白和3个单氨基酸变异体的原核表达质粒,即pGEX-BoPrP(93~241)、pGEX-BoPrP(93~241)(S154N)、pGEX-BoPrP(93~241)(A129V)和pGEX-BoPrP(93~241)(Q234R)。经转化E.coli BL21(DE3).均表达了预期大小约为42.4ku的融合蛋白。在优化的诱导表达条件下,各重组菌可产生表达量占细菌总蛋白量30%~45%的融合蛋白。经免疫印迹检查,所有融合蛋白均可与抗牛单克隆抗体4C11反应。表明,单氨基酸突变并不影响单抗4C11的识别表位。 相似文献
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纳米科技,是以0.1~100纳米这样的尺度为研究对象的前沿科学,是人类科技发展史上又一座重要的里程碑。纳米技术不仅对生物技术产生革命性的影响,而且也促使传统产业的“旧貌变新颜”。为此,我们引进了在国内率先研制推出应用于农业的纳米技术产品——强的纳米863生物助长器,进行试验。强的纳米863利用其核心材料 相似文献
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重组逆转录病毒载体的包装 总被引:1,自引:1,他引:0
将3.7kb的LacZ基因片段克隆到含标志基因Neo的逆转录病毒载体,pLXSN与pLNCX的多克隆位点,构建了含有LacZ基因的重组逆转录病毒载体pLLSN和pLNCL.在测定了G418对饥装细胞系PA317的最小致剂量后(最小致死剂量为0.3g/L),通过脂质体Lipofectin与磷酸钙2种介质,分别将2种重组逆转录病毒载体导入包装细胞系PA317进行包装,并以0.3g/L,的G418进行筛选,得到多个G418抗性克隆,经扩大培养,传代,分别得到包装pLLSN与pLNCL的2株阳性细胞,电镜下可见阳性细胞的培养上清中具有逆转录病毒形态特征的成熟病毒粒子,本0研究为运用逆转录病毒载体系统,解决转角因效率低的问题奠定了基础。 相似文献
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禽痘病毒表达载体是已构建表达外源基因的病毒载体中的一种,它在表达外源基因上具有明显的优势:(1)它的基因组结构庞大,能耐受较大的外源基因(25~35kb)在其基因组的不同位点插入。(2)严格的胞浆内复制,避免了病毒基因重组入宿主细胞染色体的可能性。且禽痘病毒的宿主范围较窄,仅感染禽类,在哺乳动物体内仅产生一过性感染,安全性较高。(3)表达产物(蛋白质)在翻译后的加工修饰过程与体内极为相似,因此活性高。且保留了相应的抗原性、免疫原性。基于这些特点,使得禽痘病毒载体不仅可作为禽源疫苗,而且还可作为哺乳动物乃至人类的基因工程活载体疫苗,具有广阔的应用前景。 相似文献
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