鸡Dazl基因启动子活性检测及其诱导剂的初步筛选

论文旨在确定Dazl基因核心启动子活性调控区,并比较不同诱导剂的诱导效率,筛选出最佳基因诱导剂。用PCR技术扩增不同长度的Dazl基因启动子,插入到pEGFP-N1和/或pGL3-basic载体中,构建重组载体;再将这些重组载体分别转染DF-1细胞系和GC-1细胞系,使用双荧光素酶报告基因检测系统测定其转录活性,确定Dazl基因启动子核心活性区域;添加单因素或多因素诱导因子,比较不同诱导剂以及诱导剂组合对鸡Dazl基因启动子活性的影响大小。如皋黄鸡Dazl基因的-932bp~-186bp区域在DF-1和GC-1两种细胞中,都有不同程度的启动活性,而-186bp~-39bp启动子活性几乎完全丧失;诱导剂筛选结果表明,FSH+E2组和Am80组、E2组能够显著提高Dazl基因启动子的活性,RA组、ATRA组、FSH组和睾酮组都不同程度地提高了启动子的活性,而睾丸提取液和BMP4对启动子活性没有显著影响。通过体外诱导实验筛选出如皋黄鸡Dazl基因最适诱导剂,为鸡ESCs体外向雄性生殖细胞分化的细胞诱导剂进一步筛选奠定了基础。     

晒烟RAPD反应体系的优化

以晒烟苗期幼叶为试材,通过设置不同的模版DNA、引物、dNTP、Mg2+及Taq DNA聚合酶的浓度梯度,优化RAPD的反应条件,建立1个适合晒烟的比较稳定的RAPD反应体系。结果表明,适合晒烟RAPD的反应体系是在25μL反应体系中,含模板40ng;引物UBC-388 1.5μL;Mg2+1.6mM;dNTP 0.2mM;Taq酶1U。     

13份烟草种质遗传多样性与亲缘关系的SSR分析

利用10对引物对吉林省11份晒烟种质和2份烤烟种质进行遗传多样性与亲缘关系的SSR分析,并作为参比。结果表明,10对引物共扩增出53条带,其中多态性条带45条,占扩增总带数的85%。不同种质间遗传相似系数介于0.321～0.893,表现出丰富的遗传多态性。聚类分析结果表明,烤烟与晒烟之间的遗传差异明显,而晒烟种内遗传基础相对狭窄。     

沙区灌木能源林营建技术试验研究

通过在辽宁省彰武县沙区进行胡枝子、小叶锦鸡儿、紫穗槐、沙棘等4种灌木的造林对比试验,结果表明:灌木栽植密度以1 m×1 m,初植株数以每穴2株效果最佳,胡枝子的各种产量均高于小叶锦鸡儿,胡枝子和小叶锦鸡儿改善土壤效果明显,放牧影响灌木生长。     

Hsd3β2基因RNA干扰载体构建及对鸡ESCs向PGCs分化的调控

原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)作为配子的原始祖细胞,参与胚胎生殖细胞的发育过程。类固醇激素通路中3β羟基类固醇脱氢酶2(3β-hydroxysteroid dehydrogenase 2,Hsd3β2)能促进细胞分化,但其对原始生殖细胞的形成具体调控机制还不得而知。本研究旨在通过构建类固醇激素合成过程中关键基因Hsd3β2的短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)干扰载体并研究其对鸡(Gallus gallus)胚胎干细胞分化为原始生殖细胞的影响。通过慢病毒包装Hsd3β2感染鸡胚胎干细胞并进行RNA干扰(RNA interference,RNAi)诱导,分别于2、4、6 d观察细胞形态变化并收集细胞样品,q RT-PCR检测Hsd3β2、生殖标记基因鸡Vasa基因同系物(chicken vasa homologue,Cvh)、鸡KIT原癌基因受体酪氨酸激酶(chicken KIT proto-oncogene receptor tyrosine kinase,C-kit)及甾类激素合成信号通路下游基因细胞色素P450亚酶(cytochrome P450 subenzyme,Cyp1a1)、葡萄糖醛酸转移酶1A1(UDP glucuronosyltransferase family 1member A1,Ugt1a1)和17β羟基类固醇脱氢酶7(17beta-hydroxysteroid dehydrogenase7,Hsd17b7)表达;流式细胞检测诱导产生类胚体阳性率;在鸡胚孵化过程中鸡胚注射慢病毒干扰载体,孵化4.5 d后收集生殖嵴,q RT-PCR检测Cvh、C-kit及下游基因Cyp1a1、Ugt1a1和Hsd17b7表达;流式细胞分析原始生殖细胞生成效率。本实验成功构建sh-Hsd3β2慢病毒载体,挽救实验表明过表达Hsd3β2能使sh RNA引起的基因表达下降回升;在体外诱导过程和鸡胚孵化过程中,q RT-PCR结果表明干扰Hsd3β2后,甾类激素合成信号通路中的下游基因的表达显著下调(P0.01);在RA诱导实验过程中,随诱导时间推进,类胚体数量逐渐增加。Hsd3β2抑制后,类胚体形成数量减少。Cvh、C-kit在诱导过程中上调表达,但Hsd3β2干扰后,其表达显著降低(P0.01),流式细胞分析表明干扰Hsd3β2后,诱导4d后产生类胚体阳性细胞(3.27±0.19)%显著低于对照组(7.39±0.09)%;体内实验结果表明干扰Hsd3β2后,Cvh、C-kit表达显著降低(P0.01),生殖细胞数量显著减少。本研究结果表明Hsd3β2能通过甾类激素合成信号通路促进原始生殖细胞的形成,为研究该通路对原始生殖细胞形成具体机制提供理论基础。     

响应面法优化软枣猕猴桃组培增殖培养基

目的:研究优化软枣猕猴桃的增殖培养基。方法:以软枣猕猴桃初代培养的不定芽为外植体,利用响应面法对其增殖培养基进行优化。在单因素的试验基础上,根据Box-Behnken的中心组合试验设计原理,以6-BA、IAA、IBA为试验因子,植株再生频率为响应值,进行三因素三水平的试验设计。结果表明:三因素对植株再生频率的影响力大小为6-BAIBAIAA,最终得到的二元回归方程显示,一步成苗的培养基优化结果为MS+6-BA1.61mg/L+IAA0.55 mg/L+IBA0.33 mg/L。在此条件下,最佳再生频率预测值为7.27,实际操作结果为7.23,说明该方程预测与实际试验拟合度较好,该优化方案有实际意义和可行度。     

论酒店安全管理及防范

随着中国旅游市场的迅速发展,以及国外不断增加的观光客,中国酒店行业在近几年的快速增长。现代的一些大酒店,不仅为广大客户提供了各种休闲娱乐活动,而且还为顾客提供了更丰富的个性化配套服务,以满足顾客的不同需求。随着社会发展的不断改变,酒店安全也逐步出现一些新的问题,因此,人们需要及时防止整体酒店安全隐患的问题,实现酒店整体安全标准的规范运作。     

文冠果组织培养研究

以文冠果茎段为外植体,进行组织培养,试验结果表明:MS+6-BA 0.5mg·L-1+IBA 1.0mg·L-1最适宜不定芽诱导;MS+KT 1.0mg·L-1+IBA 0.5mg·L-1最适宜芽分化培养;生根最佳培养基为1/2MS+IBA 0.5mg·L-1+NAA 0.1mg·L-1。     

一氧化氮延缓采后无核白葡萄果串品质劣变的熏蒸浓度筛选

为提高葡萄采后果串的整体贮藏品质,研究了不同浓度一氧化氮（NO）对采后贮藏期间葡萄果梗和果粒品质的影响。以新疆无核白葡萄为试材,采用11种浓度的NO气体熏蒸处理样品,在（0±0.5）℃,相对湿度90%±2%的贮藏条件下,通过监测葡萄的表观、理化品质和贮藏特性,获得有效作用浓度。结果表明：适宜浓度的NO不仅能显著降低葡萄失重率、落粒率和腐烂率,而且能减缓葡萄果粒硬度、可溶性固形物和可滴定酸含量的下降,但延缓果梗褐变的作用因NO浓度高低存在较大差异,其中NO浓度为400~600 μL·L-1时抑制效果明显,尤其是500 μL·L-1,而低于300 μL·L-1时作用有限,高于700 μL·L-1时有不同程度的伤害作用。由此得出,适宜浓度的NO熏蒸处理保鲜葡萄具有一定的应用前景。     

包容性增长理念下的农村社会养老保险法律制度的构建

在对现行法律制度存在问题剖析的基础上提出了公平、公正、共享的法律制度构建理念,并对于构建稳定、协调、系统的农村社会养老保险立法体系提出了具有一定理论价值和实践意义的观点。