华支睾吸虫后囊蚴cDNA表达文库的构建及鉴定

构建华支睾吸虫后囊蚴cDNA表达文库,为筛选特异诊断抗原和疫苗候选抗原奠定基础,也为进一步研究华支睾吸虫后囊蚴感染宿主的信号传导机制、探究其致病机理提供新的起点。从中国东北疫区（镇赉县）麦穗鱼肉里分离收集华支睾吸虫囊蚴,采用Trizol Reagent提取其总RNA,Oligo(dT)纤维素柱纯化mRNA,反转录合成第1链cDNA及第2链cDNA,加EcoRⅠ接头,经XhoⅠ酶切,用CHROMA SPIN-400柱离心层析纯化后,与载体λZAP Express连接,Gigapack III Gold包装蛋白体外包装,构建华支睾吸虫后囊蚴cDNA表达文库。结果表明,构建的华支睾囊蚴cDNA表达文库的库容量为9.15×10⁵ PFU,重组率为99.5%,扩增后文库滴度为1.6×10¹⁰PFU/mL。成功构建了一高质量的华支睾吸虫后囊蚴cDNA表达文库。     

丙磺舒对阿莫西林在猪体内的药代动力学影响

本实验采用高效液相色谱法测定猪血浆中阿莫西林的浓度,研究了丙磺舒对阿莫西林在健康猪体内药物动力学的影响。结果表明,单剂量肌肉注射阿莫西林后,阿莫西林吸收迅速,药峰时间为(0.19±0.11)h,药物浓度为(7.21±3.27)μg/mL,其动力学模型为一级速率一室模型。使用丙磺舒后,阿莫西林的半衰期由(0.86±0.18)h延长到(2.77±1.02)h(P<0.05),AUC由(12.38±5.69)μg/mL·h增加至(35.24±18.62)μg/mL·h,药峰时间为(0.42±0.32)h,药峰浓度为(6.24±3.43)μg/mL·h。     

浅论甜菜合理密植

密度是影响甜菜产质量的重要因子。为了探讨在安达县的自然条件和栽培水平的合理密度与适宜的株行距,达到高产高糖的目的,对此在大面积中进行对比试验,以便为甜菜生产提供科学依据。根据三年的试验结果,浅谈我们的认积如下。     

从编印《甜叶菊栽培技术》看农业图书馆的服务效果

1982年我们从大量的资料中发现近年从国外引进的糖料植物一甜叶菊,它具有用途广、经济价值大、适应性强、繁殖容易等特点,其含糖量是蔗糖的300倍,若每户种植十来株就可解决一家全年的吃糖困难。因此,给河南科技报写了一篇报导,结果很快引起全国十多个省市的广大读者强烈反映,几百位读者纷纷来信要求援助,一要种子,二要技术。当时并无甜叶菊的系统材料,为了解决种植者的困难,满足广大群众的要求,我     

苦味西葫芦药理作用初步研究

本实验对苦味西葫芦提取物的镇痛、催眠、抗病毒、抗菌等作用进行了初步研究。结果表明苦味西萌芦提取物可提高离体十二指肠的收缩力，具有明显的镇痛作用，并可增强阈下剂量的戊巴比妥钠的作用，提示有催眠作用；抗病毒和抗菌实验结果表明，该提取物对NDV、CPV的50％（IC50）抑制浓度分别为1：520.6及1：450.5，提示有较强的抗病毒作用；对金黄色葡萄球菌及猪霍乱沙门氏菌MIC均为50mg/ml，对大肠杆菌作用不明显。     

中华真地鳖几丁质含量的研究初报

以中华真地鳖全虫、体壁、蜕和刚蜕皮的雌成虫为原料,利用消化法测得其几丁质含量分别为 11.50％、12.99％、11.02％和3.15％,并简要分析了蜕的开发利用及几丁质争地鳖虫药理作用的关系。     

抗犬细小病毒复方制剂的研究

对山茶叶、轮叶党参、卵叶芍药、苦味西葫芦、狼毒大戟 5种中草药的提取物进行体外抗犬细小病毒 (CPV)筛选 ,并对以山茶叶、黄芪等组成的复方进行抗病毒效果评价与药理作用研究。结果表明 ,山茶叶抗CPV作用较强 ,其对CPV的抑制率为 55 2 4 % ;由山茶叶组成复方对CPV的抑制率为 63 0 4 % ,抗病毒效果明显优于单方的山茶叶和药物对照黄连 ;对CPV 50 %抑制浓度 (IC50 )为 1∶587 5 ,提示有较强抗病毒作用。由山茶叶、黄芪等组成的复方药物对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌有抑制作用 ,可明显增强机体免疫力。     

旋毛虫肌幼虫p53cDNA的克隆及鉴定

根据GenBank中旋毛虫53000抗原基因的序列设计引物，用PCR技术直接从旋毛虫肌幼虫cDNA文库中扩增靶基因p53cDNA，将其克隆到pMD-18T载体，转化至大肠埃希氏菌NovaBlue后测序分析，结果表明，克隆到1176bp的p53cDNA，共编码391个氨基酸。序列分析表明，p53cDNA序列与GenBank中的旋毛虫p53基因序列相比共有12个核苷酸发生改变，二者的同源性为98％，所编码蛋白质氨基酸序列的同源性为98％。将其克隆到原核表达载体pET28a并转化至表达菌BL21star（DE3），经IPTG诱导表达后获得约48000的重组蛋白。Western blotting检测证实，p53重组蛋白可以被旋毛虫感染猪血清识别，具有很好的抗原性。     

华支睾吸虫成虫cDNA表达文库的构建与筛选

为了获得华支睾吸虫成虫期强反应原性抗原基因,首先利用λZAP栽体构建华支睾吸虫成虫cDNA表达文库:即从我国东北疫区(镇赉县)家犬胆管内分离收集华支睾吸虫成虫,采用Trizol Reagent提取其总RNA,Oligo(dT)纤维素柱纯化mRNA,反转录合成第1链cDNA及第2链cDNA,用CHROMA SPIN-400柱离心层析纯化后,与栽体λZAP Express连接,体外包装后成功获得我国东北疫区华支睾吸虫成虫cDNA表达文库.文库容量为1.5×106pfu,重组率为99%,插入片段长度在0.4～2.0 kb之阀,扩增文库的滴度为1.5×1010pfu/mL.然后利用免疫学方法对该cDNA表达文库进行筛选:以自然感染华支睾吸虫的人血清为抗体探针,从2.0×105个重组噬菌体筛选强反应原性抗原基因,对筛选出的强反应原性克隆进行测序,利用相关分子生物学软件进行序列分析.共获得41个阳性克隆,测序结果分析表明,这些cDNAs根据其编码的蛋白可分为以下几种,即与来自华支睾吸虫的甘氨酸-2、脯氨酸-2及Cs44抗原高同源的基因及分别与来自Nematostella vectensis的未知蛋白、转录延伸因子及果蝇CG3446基因编码蛋白较低同源性的基因.本研究结果为进一步对华支睾吸虫抗原的生物学特性研究及应用奠定了理论基础和实验依据.     

免疫胶体金标记技术及其在植物保护上的应用前景

综述了胶体金制备、质量鉴定方法 ,胶体金探针的制备、纯化方法 ,以膜为固相载体的免疫胶体金快速试验即免疫层析和免疫渗滤试验技术 ,以及免疫胶体金标记技术在植物保护研究领域中的应用前景。