| 华支睾吸虫成虫cDNA表达文库的构建与筛选 |
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| 引用本文： | 吴秀萍,高丽芳,张玲,邓洪宽,刘相叶,叶春艳,王子见,王学林,王峰,刘明远.华支睾吸虫成虫cDNA表达文库的构建与筛选[J].中国兽医学报,2009,29(7). |
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| 作者姓名： | 吴秀萍 高丽芳 张玲 邓洪宽 刘相叶 叶春艳 王子见 王学林 王峰 刘明远 |
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| 作者单位： | 1. 吉林大学,人兽共患病研究所,人兽共患病教育部重点实验室,吉林,长春,130062
2. 吉林大学,人兽共患病研究所,人兽共患病教育部重点实验室,吉林,长春,130062;法国食品卫生安全局,巴黎,94703 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，吉林省科技厅基金 |
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| 摘 要： | 为了获得华支睾吸虫成虫期强反应原性抗原基因,首先利用λZAP栽体构建华支睾吸虫成虫cDNA表达文库:即从我国东北疫区(镇赉县)家犬胆管内分离收集华支睾吸虫成虫,采用Trizol Reagent提取其总RNA,Oligo(dT)纤维素柱纯化mRNA,反转录合成第1链cDNA及第2链cDNA,用CHROMA SPIN-400柱离心层析纯化后,与栽体λZAP Express连接,体外包装后成功获得我国东北疫区华支睾吸虫成虫cDNA表达文库.文库容量为1.5×106pfu,重组率为99%,插入片段长度在0.4～2.0 kb之阀,扩增文库的滴度为1.5×1010pfu/mL.然后利用免疫学方法对该cDNA表达文库进行筛选:以自然感染华支睾吸虫的人血清为抗体探针,从2.0×105个重组噬菌体筛选强反应原性抗原基因,对筛选出的强反应原性克隆进行测序,利用相关分子生物学软件进行序列分析.共获得41个阳性克隆,测序结果分析表明,这些cDNAs根据其编码的蛋白可分为以下几种,即与来自华支睾吸虫的甘氨酸-2、脯氨酸-2及Cs44抗原高同源的基因及分别与来自Nematostella vectensis的未知蛋白、转录延伸因子及果蝇CG3446基因编码蛋白较低同源性的基因.本研究结果为进一步对华支睾吸虫抗原的生物学特性研究及应用奠定了理论基础和实验依据.
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| 关 键 词： | 华支睾吸虫 成虫 cDNA文库 |
Construction and screening of a cDNA expresssion library of Clonorchis sinensis adult worm |
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| WU Xiu-ping,GAO Li-qang,ZHANG Ling,DENG Hong-kuan,LIU Xiang-ye,YE Chun-yan,WANG Zi-jian,WANG Xue-lin,WANG Feng,LIU Ming-yuan.Construction and screening of a cDNA expresssion library of Clonorchis sinensis adult worm[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2009,29(7). |
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| Authors: | WU Xiu-ping GAO Li-qang ZHANG Ling DENG Hong-kuan LIU Xiang-ye YE Chun-yan WANG Zi-jian WANG Xue-lin WANG Feng LIU Ming-yuan |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Clonorchis sinensis adult larvae cDNA library |
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