斑马鱼zgc113227多克隆抗体及卵形鲳鲹EVM0008813多肽抗体的制备

【目的】制备斑马鱼zgc113227多克隆抗体和卵形鲳鲹EVM0008813多肽抗体,为后续深入研究斑马鱼zgc113227基因和卵形鲳鲹EVM0008813基因的功能特性提供重要工具。【方法】以卵形鲳鲹EVM0008813基因为查询序列,通过BLASTp搜索获得斑马鱼同源基因zgc113227 （NP_001014341）,以同源重组方式构建原核表达载体并转化大肠杆菌B21感受态细胞进行诱导表达,再以诱导表达获得的融合蛋白为抗原免疫日本大耳兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA检测抗体效价,然后通过Western blotting鉴定及SDS-PAGE检测zgc113227多克隆抗体特异性,并以高效液相色谱—质谱联用（HPLC-MS）纯化鉴定EVM0008813多肽抗体。【结果】斑马鱼zgc113227和卵形鲳鲹EVM0008813均属于亲水性蛋白,二者的氨基酸序列相似性达58.12%,同时表现为潜在抗原位点多、柔性较强、表面可及性高,且无跨膜结构和信号肽存在。斑马鱼zgc113227和卵形鲳鲹EVM000881的保守结构域均包含5个保守基序（Motif 1~Motif 5）,且发现1个相同的保守结构域（DDE_Tnp_4）,故推测二者均属于DDE_Tnp_4家族。以zgc113227蛋白与等容积弗氏完全佐剂混合为抗原制备获得的zgc113227多克隆抗体效价为1:256000,特异性良好,可通过Protein G亲和层析柱进行纯化;以EVM0008813多肽与牛血清白蛋白（BSA）偶联为抗原制备获得的EVM0008813多肽抗体效价为1:256000,经HPLC-MS纯化鉴定抗体纯度达95.35%,特性良好。【结论】制备获得的斑马鱼zgc113227多克隆抗体和卵形鲳鲹EVM0008813多肽抗体纯度高、抗体效价高、特异性良好,可为斑马鱼zgc113227基因和卵形鲳鲹EVM0008813基因功能研究提供有利工具。     

斑马鱼仔鱼人工开口饲料的初步研究

根据斑马鱼仔鱼对营养需求的特点研制出微膜、微粘两种配合饲料,对其物理性状进行了测定,并进行了以蛋黄为对照饲料的饲喂试验(20d)。结果表明:(1)微膜饲料的各项物理性状指标均好于微粘饲料;(2)试验鱼的存活率以微膜组为最高,蛋黄组最低,推测与饲料对水质的不同影响有关;仔鱼生长情况以蛋黄组、蛋黄 微膜组为最好,其次为微膜组。研究认为,所开发的微膜饲料与微粘饲料均可作为斑马鱼仔鱼的人工开口饲料,而微膜饲料与蛋黄组合使用效果最佳。     

斑马鱼雄核发育技术研究

为探索人工诱导斑马鱼雄核发育二倍体克隆鱼的途径和方法,运用紫外线照射卵子使其遗传物质失活,利用斑马鱼体表花纹形态作为遗传标记,使用热休克技术阻止受精卵的第一次卵裂加倍染色体。试验结果表明总辐射剂量为120mJ cm2紫外线照射斑马鱼卵可以使雌核遗传物质完全失活;体表花纹为豹斑花纹被证实是由纯合隐性基因控制的性状,可以作为雄核发育遗传标记;遗传失活卵受精后经2min,(41 5±0 5)℃的热休克后出现两个染色体加倍的高峰期,分别为受精后的11min和23min,且后一时期效果优于前一时期,最高二倍体诱导率达46 15%;经遗传分析,共获得正常存活的雄核发育二倍体克隆鱼19尾,说明经过优化的紫外线结合热休克等染色体操作技术,可以成为诱导雄核发育二倍体克隆鱼的有效手段。     

毒死蜱对斑马鱼血清CAT和SOD活性的影响

通过对斑马鱼肌肉注射不同浓度(2、20、200、2000μg/kg)的毒死蜱,研究了斑马鱼血清中过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化情况。结果显示:在处理后24 h两种酶的活性均明显升高;在处理后96 h两种酶的活性均显著下降。说明毒死蜱对斑马鱼机体的抗氧化系统有明显的损伤作用。     

斑马鱼在鱼类病原免疫学研究中的应用

斑马鱼全基因组测序已经完成,建立了多个专门的在线数据库,作为模式生物在遗传学、发育生物学等领域已得到了广泛的应用.本文介绍了斑马鱼用于鱼类病原免疫学研究的优点,包括个体发育过程透明、免疫系统较成熟,具有先天性和获得性2种免疫系统;多种鱼类来源的细菌和病毒在成年斑马鱼和胚胎中都能感染和复制,使其成为研究鱼类病原的入侵机制和宿主免疫应答的模式生物.同时,对当前已建立的鱼类细菌和病毒病原斑马鱼感染模型以及在疫苗方面的研究现状作简要概述.     

离子液体对靶标生物和非靶标生物AChE的影响

[目的]探究不同离子液体对靶标生物及非靶标生物体内酶活性的影响,明确其对靶标生物的毒杀作用及对非靶标生物的安全性.[方法]研究了3种离子液体对2种生物体内AChE活性的影响.[结果]溴化1-乙基-3-甲基咪唑对斜纹夜蛾AChE活性的影响在LC20浓度处理下呈抑制趋势,LC50浓度处理下呈先抑制后诱导的趋势;对斑马鱼肝脏AChE活性的影响在LC20浓度处理下呈始终抑制趋势,在LC50浓度处理下呈诱导-抑制-诱导的趋势.溴化1-丁基-3-甲基咪唑对斜纹夜蛾AChE活性的影响在LC20浓度处理下呈先抑制后诱导的趋势,在LC50浓度处理下呈抑制趋势;对斑马鱼肝脏AChE活性的影响在LC20浓度处理下呈先诱导后抑制的趋势,在LC50浓度处理下呈抑制趋势.1,2-二甲基咪唑对斜纹夜蛾AChE活性的影响在LC20浓度处理下呈先抑制后诱导的趋势,在LC50浓度处理下呈先诱导后抑制的趋势;对斑马鱼肝脏AChE活性的影响在LC20浓度处理下呈抑制趋势,在LC50浓度处理下呈先抑制后诱导趋势.[结论]3种离子液体在斑马鱼和斜纹夜蛾体内的积累对2种生物体内AChE的活性均有不同程度的影响,改变生物体内神经信号的传导,导致生物体严重的行为改变、功能紊乱、瘫痪,从而产生毒害作用.     

邻二氯苯对斑马鱼的急性毒性

[目的]了解邻二氯苯对斑马鱼的急性毒性.[方法]采用静态试验法,参照《水和废水监测分析方法(第四版)》中有关急性毒性方法测定邻二氯苯对斑马鱼的急性毒性.[结果]邻二氯苯对斑马鱼96h的半数致死浓度(LC50)为5.13 mg/L,安全质量浓度(SC)为0.51 mg/L.[结论]根据鱼类急性毒性分级标准,邻二氯苯属于高毒性物质.     

全氟辛烷磺酸对斑马鱼生理生化指标的影响研究

为了探讨全氟辛烷磺酸(PFOS)对鱼类的毒性效应,参考PFOS对斑马鱼(Danio rerio)的96 h-LC50值,设置了0、1、5和10 mg/L 4个浓度组,采用静水式实验测定了PFOS对斑马鱼头部碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)和乙酰胆碱酯酶(AchE),内脏团中ALP、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)含量以及肌肉中ALP、SOD、MDA含量。结果表明:斑马鱼头部ALP和AchE活力会在实验初期短时间内受到抑制,之后逐渐恢复;中低浓度PFOS(1 mg/L和5mg/L)胁迫会使得头部LDH活力显著升高。内脏团中ALP活力受到显著诱导,并与PFOS浓度呈一定的剂量-效应关系;SOD和CAT活性则在0.5~1 h受到显著诱导,之后有所下降,但并未受到显著抑制;MDA含量在PFOS胁迫下显著升高。肌肉中的ALP活力受到显著抑制(P0.05),SOD活力及MDA含量受PFOS影响不显著。