重组铜绿假单胞菌外膜蛋白D的原核表达与多克隆抗体制备研究

为获得铜绿假单胞菌外膜蛋白OprD并研究其分子功能。本研究采用分子克隆构建OprD蛋白重组表达菌株,用正交试验设计方法获得OprD菌株的最优表达条件和培养条件,通过SDS-PAGE切胶的方法纯化OprD蛋白,小鼠免疫制备OprD多克隆抗血清,蛋白质印迹法检测抗血清的特异性。使用DNAMan和MEGA软件对OprD蛋白进行同源性和系统发生分析。结果表明,OprD重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果、OprD蛋白表达与纯化条带大小分别与预测相符。正交试验获得OprD菌株的最优培养条件为:葡萄糖浓度为0,转速230r/min,装液量为50mL;最优表达条件为:菌液OD600=0.8时加入终浓度为0.3mmol/L的异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),37℃诱导12h。SDS-PAGE电泳切胶纯化获得纯度较高的OprD蛋白。蛋白质印迹法证实OprD蛋白抗血清具有较好的特异性。OprD蛋白序列系统发生分析发现,同菌属细菌存在较高的同源性,并且亲缘关系较近的细菌中OprD蛋白可能具有相似的分子功能。     

浅析牛胃肠炎的发病规律和防治措施

牛胃肠炎是胃肠道黏膜层发生重度炎症后造成胃肠功能紊乱引起的疾病,是生产过程中较为常见的一种疾病,对养牛业健康发展造成巨大的危害。根据多年临床经验,总结牛胃肠炎的发病规律和防治措施,旨在为临床诊断和治疗本病提供参考依据。     

烤烟节水技术研究进展

介绍现有烤烟生产主要节水技术,并对各项技术进行探讨,展望烤烟高效节水灌溉的发展趋势,得出烤烟节水技术的发展要综合多元化、有效利用多种节水理论,才能更好地达到节约用水、提高水分利用效率、进一步增加产量、提高品质的目的。     

农业水资源利用新技术研究进展

<正>农业是经济发展和生态环境维持的基础。水资源作为生态环境的重要组成成分和最活跃的因素,是一种在一定利用限度和时空范围内可更新、利用过程中水质易变的重要农业自然资源,其供给能力制约着区域农业发展,维系着农业生态系统及粮食安全生产,对作物产量起着决定性作用。农业水资源在我国农业经济发展中发挥着极其重要的作用,我国水资源相对短缺,随着社会经济持续稳定的发展,城市化进程的不断加快,工     

鱼类致病嗜水气单胞菌外膜蛋白P5的原核表达、免疫保护及抗血浆杀菌作用研究

研究鱼类致病嗜水气单胞菌外膜蛋白P5的免疫学功能,为相关疫苗开发奠定理论基础。采用生物信息学方法分析P5的理化性质;分子克隆构建P5表达菌株并确定其最佳诱导表达条件,包涵体洗涤和SDS-PAGE电泳切胶纯化P5蛋白,并免疫小鼠制备P5抗血清;Western blotting检测抗血清特异性与效价,免疫酶联法模拟P5抗血清对嗜水气单胞菌的体外识别;P5抗血清被动免疫红鲫,攻毒以评价P5蛋白的免疫保护功能;Western blotting分析P5蛋白抵抗鱼血浆的杀菌作用。结果表明:P5蛋白在气单胞菌属间同源性较好,进化保守。成功克隆表达、纯化P5蛋白,其最佳表达条件为:诱导时菌液浓度OD_(600)=1.0,IPTG浓度0.5 mmol/L,32℃诱导8 h。Western blotting验证P5抗血清特异性较好,效价达到1∶1 600,ELISA显示P5抗血清与嗜水气单胞菌存在识别作用,表明P5蛋白具有较好的免疫原性与抗原性。被动免疫显示P5抗血清对红鲫的免疫保护率为显著性的56%,具有良好的免疫保护作用。Western blotting发现P5蛋白可通过表达下调有效抵抗鱼血浆的杀菌作用,表明其可能与细菌抗血浆杀菌有关。综上,嗜水气单胞菌外膜蛋白P5是一种保护性抗原,有望作为防治嗜水气单胞菌感染的疫苗候选成分。     

微生态制剂在猪粪堆肥中的应用

为研究微生态制剂发酵猪粪堆肥的可行性,本试验在猪粪堆肥中接种芽孢杆菌,通过测定温度、水分、pH值、全碳、全氮、C/N比,综合评定添加菌剂对堆肥的影响。结果表明,添加0.1%和0.2%微生态制剂的处理组,堆肥温度在50℃以上维持的时间均为23天,最高温度达到73℃;而对照组堆肥温度在50℃以上维持的时间只有10天。添加微生态制剂能够提高堆肥的最高温度,延长高温持续的时间,促进碳、氮降解,有利于堆肥的腐熟及无害化。     

大肠杆菌免疫蛋白OmpA生物信息学分析及表位多肽疫苗设计

为进一步提高大肠杆菌外膜蛋白(OmpA)的免疫效果,对大肠杆菌的OmpA进行生物信息学分析并设计其表位多肽重组疫苗。运用DNAMAN 8.0和MEGA 5.0分别对OmpA进行同源性及系统发生分析,通过ExPASy-ProtParam对OmpA的理化性质进行分析,分别采用Signal P 4.1与TMHMM Serverv.2.0对OmpA进行信号肽和跨膜结构预测,应用SOPMA和SWISS-MODEL对OmpA进行二级结构和三级结构预测,通过String进行蛋白质互作网络分析,使用BepiPred 1.0和ABCpred方法预测OmpA的B细胞抗原表位,利用神经网络法与MHC-Ⅱ类分子结合肽在线预测程序预测OmpA的CTL和Th细胞抗原表位,采用DNASTAR.Lasergene.v 7.1拼接获得优势抗原表位。进化关系结果显示,OmpA在肠道菌属间遗传进化关系较近,OmpA抗体可能为不同种肠道细菌的感染提供交叉免疫保护。OmpA为亲水性蛋白质,第1—21位氨基酸为信号肽位置,具跨膜结构。OmpA的二级结构中以无规则卷曲(45.66%)、α-螺旋(31.79%)、β-片层(16.18%)和β-转角(6.36%)为主,其三级结构为桶状结构。OmpA与par、coa蛋白之间存在互作。OmpA可能有4个B细胞抗原表位,1个CTL细胞抗原表位,1个Th细胞抗原表位,且重组获得抗原性较好的OmpA表位多肽。     

不同栽培方法红托竹荪产值与品质综合评价

以贵州红托竹荪为试材，通过比较菌棒覆土法和木材覆土法处理下的红托竹荪产值相关指标，采用因子分析方法，研究了2种栽培方法对子实体菌盖、菌柄、菌托3个部位的营养物质、矿质元素、重金属含量的影响，以期为红托竹荪提质增效提供参考依据。结果表明：菌棒覆土法与木材覆土法相比，红托竹荪的每公顷栽培投入成本下降39.18%,产值、利润分别提升26.15%、60.49%;子实体粗多糖、氨基酸含量分别提高25.90%、18.68%,人体必需氨基酸含量下降20.36%,其中废弃的菌托粗多糖含量提高42.23%;子实体的磷、钾、镁、钙、锰、锌含量提高，菌柄的砷、汞、镉含量降低。综合所有品质因素，菌棒覆土法处理的子实体3个部位的综合得分排名前三，所以该方法下的红托竹荪品质较优。与木材覆土法相比，菌棒覆土法投入成本低，收获的红托竹荪品质优、废弃物加工利用潜力大、产值和利润高。     

羊肚菌继代培养对菌丝特性及 TCC-脱氢酶活性的影响

以六妹羊肚菌为试材，采用继代培养方法，研究了继代培养次数对菌丝的生长特性和TCC-脱氢酶活性的影响，以期为继代培养次数与菌种退化关系研究提供参考依据。结果表明：不同培养方式下，随着继代次数的增加，菌丝生长速率、生物量、TTC-脱氢酶活性均呈下降趋势，要保持较高酶活性和菌丝活力，继代次数应在5次以内，菌丝萌发快、粗壮、前端辐射状，TCC-脱氢酶活性高，且不同菌种培养方式对TTC-脱氢酶活性影响显著，要充分考虑种性特征与生产方式关系。     

羊肚菌菌丝体TTC-脱氢酶及胞外酶活性变化

以六妹羊肚菌为试材，分别测定了菌丝TTC-脱氢酶、羧甲基纤维素酶、淀粉酶、愈创木酚氧化酶活性及残糖含量，研究了羊肚菌不同生长期内菌丝活力及代谢情况，以期为羊肚菌及其它食用菌菌种生产提供参考依据。结果表明：整个培养期内5种酶活性表现一定的规律性，均呈先升后降的趋势。不同酶活性间存在一定相关性，即菌丝活力最强，菌丝生长快，以4～12 d为最佳培养时间，可作为液体菌种生产的最佳时期。