猪链球菌2型分泌核酸酶(SsnA)的表达、ELISA方法建立及其在鉴别诊断中的应用

猪链球菌2型(Streptococcussuis type 2,SS2)是一种广泛分布的人畜共患病原菌,严重危害着人类健康和养猪业的发展。本试验旨在研究分泌核酸酶基因(SsnA)作为分子诊断标识在对SS2感染的鉴别诊断中所起的作用。作者以SS2-LT菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增SsnA基因片段,将该片段克隆到表达载体pET-28a(+)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,获得大小为46 ku的融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blot分析表明,重组蛋白质具有抗原反应活性。以纯化的融合蛋白作为包被抗原,建立了SsnA-ELISA鉴别诊断方法。对已知背景的人工感染及疫苗免疫血清和临床血清进行检测,比较感染血清和免疫血清的检测结果,结果发现两者差异显著(P<0.05),表明建立的SsnA-ELISA方法具有良好的检测效果。利用该方法对采集自8个省份的1 446份血清进行检测,显示SS2的阳性率为0%~14.77%,平均阳性率为5.39%。本研究结果表明:猪链球菌2型SsnA可以作为一个良好的鉴别感染的分子诊断标识;对临床血清的检测结果表明感染及流行与气候环境存在明显的关系。     

贵州麻阳河自然保护区7种野生红菇的形态与分子鉴定

为了解麻阳河自然保护区野生红菇真菌资源状况,从保护区采集到7种野生红菇,基于其形态特征结合ITS r DNA序列与Gen Bank中相关的红菇属的同类序列构建的分子系统发育树,将其鉴定为厌味红菇Russula nauseosa、美红菇Russula puellaris、鳞盖红菇Russula lepida、菱红菇Russula vesca、以及变绿红菇Russula virescens、Russula faustiana、粉柄红菇Russula farinipes。     

滴灌频率和定额对枸杞园土壤水热分布及产量的影响

为构建合理的沙质土壤枸杞园滴灌技术体系,以大果枸杞新品种‘宁杞8号’为试验材料,在滴灌条件下开展不同灌水频率和定额大田试验,研究灌水下限和灌水量对枸杞园土壤水热分布及‘宁杞8号’生长的影响。结果表明:在整个枸杞生育期,'宁杞8号'最大耗水时期为6月中下旬,高频灌水处理的土壤水分变化保持在一个较稳定的范围;土壤水分、气温及枸杞生育阶段对土壤温度影响明显,表层土壤温度变化(10cm以上)受空气温度影响显著,7月以后气温对土壤温度的影响逐渐减弱,20cm以下土层基本不受气温影响,而且高频灌水处理能使土壤温度保持在一个相对稳定的范围。因此,沙土地‘宁杞8号’枸杞品种最佳灌水下限宜控制在田间最大持水量的85%,全生育期最佳灌水次数为103次,灌水总量为4817.25m3/hm^2,此条件下产量为6332.1kg/hm^2,且单果质量、果实纵横径、2cm以上等级率均优于其他处理。     

大肠杆菌外膜蛋白F的原核表达、多克隆抗体制备及生物信息学分析

为获得大肠杆菌外膜蛋白OmpF并对其耐药性功能进行研究,通过分子克隆技术构建OmpF蛋白重组表达菌株,利用正交试验法获得OmpF菌株的最佳培养条件和表达条件,采用SDS-PAGE电泳切胶纯化方法获得OmpF蛋白,免疫小鼠获得OmpF蛋白多克隆抗体,Western blotting方法检测多克隆抗体的特异性,使用DNAMAN 8.0与MEGA 5.0软件对OmpF蛋白进行同源性和系统发生分析。结果显示,PCR扩增获得1 089 bp的ompF基因,成功构建pET-32a-ompF载体,其诱导表达产物分子质量为38 ku,与预期大小一致。正交试验获得OmpF菌株的最佳培养条件为葡萄糖浓度为0,转速为230 r/min,装液量为50 mL;最佳表达条件为诱导时菌液OD_(600)为0.5,IPTG终浓度为0.1 mmol/L,诱导时间为8 h,温度为28℃。SDS-PAGE切胶纯化获得高纯度的OmpF蛋白后,利用Western blotting证实OmpF蛋白抗血清具有较好的特异性。OmpF蛋白序列系统发生分析发现,OmpF蛋白在不同种类的细菌中具有较高的同源性,OmpF蛋白产生的抗体可能为不同种细菌的感染提供交叉免疫保护作用,并且不同种类细菌中OmpF蛋白可能具有相似的分子功能。     

土壤与白鬼笔重金属及农药残留污染评价

为了解贵州地区白鬼笔重金属及农药残留污染状况,对大方县白鬼笔种植基地白鬼笔及其种植土壤中Pb、Cd、Cr、Cu、Zn、Hg、As含量及六六六、滴滴涕残留量进行测定,并对其污染程度进行评价。结果表明,白鬼笔种植基地土壤重金属平均含量表现为CuCrZnPbAsCdHg,Pb、Cr、As、Zn含量均未超出贵州省土壤背景值和土壤环境质量二级标准极限值,其余重金属含量均不同程度超标;菌托、菌柄、菌盖中重金属平均含量均表现为ZnCuPbCrCdHgAs,其中Cd、As、Zn含量在菌托、菌柄、菌盖中均未超标,其他重金属在不同组织中发生不同程度超标。白鬼笔及土壤中均未检测出六六六、滴滴涕残留,未受农残污染。从单因子污染指数来看,白鬼笔种植基地土壤中仅Cd的单因子污染指数平均值为1.99,属轻微污染,其他重金属的单因子污染指数平均值均小于1,处于无污染水平;白鬼笔中7种重金属的平均单因子污染指数均小于1,说明其未受到这些重金属的污染。从综合污染指数来看,白鬼笔种植基地土壤受到了轻污染;白鬼笔菌托、菌柄处于非污染水平,菌盖处于轻污染水平。     

不同单株负载量对赤霞珠葡萄生长及果实品质的影响

为了探索不同的单株负载量对酿酒葡萄生长及果实品质的影响,以赤霞珠酿酒葡萄为试材,设置了宁夏贺兰山东麓地区砾质沙土和灌淤土上赤霞珠不同单株负载量试验,测定了不同负载量水平下葡萄果实的单果质量、可溶性总糖含量、可滴定酸含量以及叶片的营养元素和百叶鲜干质量。结果表明:砾质沙土和灌淤土上赤霞珠叶片的百叶鲜干比均是先减小后增大;2种土壤上赤霞珠葡萄叶片和叶柄中氮、磷、钾含量均是随着单株负载量的增加而减少,砾质沙土叶柄钾含量的变异幅度较大,单株负载5串的处理比单株负载25串的处理叶柄钾含量高出87.31%;砾质沙土上6年生赤霞珠单株负载15串时可溶性总糖含量达到了23.33%,单果质量最小(1.36 g),单穗质量最大(228.3 g);灌淤土上6年生赤霞珠则是单株负载10串时单果质量最小(1.35 g),可溶性总糖含量适中(17.94%),糖酸比24.24。合理的负载水平对酿酒葡萄果实品质影响较为显著,砾质沙土6年生赤霞珠合理的负载量为单株15串,灌淤土6年生赤霞珠合理的负载量为单株10串。     

我国农林废弃物栽培食用菌的研究进展

随着我国食用菌产业的发展,原料问题成为该产业发展的瓶颈,其培养料的筛选和开发受到学者的广泛关注。农林废弃物因其来源广泛、种类繁多,是食用菌生产的良好基质,利用农副产品生产食用菌,一方面可解决食用菌生产的原料问题,另一方面减轻农林废弃物对环境的污染。对我国近5年来,不同农林副产品栽培食用菌的研究进行综述,分析食用菌栽培过程中存在的问题,并对应用前景进行了展望。     

基于近红外光谱的烟叶烘烤过程质体色素实时监测

质体色素的降解变化是烟叶香气物质形成的基础之一.为解决烟叶烘烤调制过程中质体色素无法快速准确测定的问题,基于近红外光谱技术(NIRS)的优势,利用竞争自适应重加权釆样法(CARS)进行光谱特征波长选择,并结合偏最小二乘法(PLS)构建了烟叶烘烤过程叶绿素和类胡萝卜素含量的动态变化模型.结果表明,CARS-PLS模型能获得较全谱偏最小二乘(PLS)、连续投影偏最小二乘(SPA-PLS)、遗传算法偏最小二乘(GA-PLS)及蒙托卡洛无信息变量删除偏最小二乘(MC-UVE-PLS)更好的模型性能,其烟叶叶绿素和类胡萝卜素模型预测相关系数分别为0.924、0.908,预测均方根误差分别为0.789、0.321μg/cm2,模型能满足实时定量分析的需要.因此,采用NIRS技术结合CARS-PLS能快速准确测定烘烤过程烟叶质体色素的变化,可为烟叶密集烘烤调控提供参考依据.     

重组铜绿假单胞菌外膜蛋白D的原核表达与多克隆抗体制备研究

为获得铜绿假单胞菌外膜蛋白OprD并研究其分子功能。本研究采用分子克隆构建OprD蛋白重组表达菌株,用正交试验设计方法获得OprD菌株的最优表达条件和培养条件,通过SDS-PAGE切胶的方法纯化OprD蛋白,小鼠免疫制备OprD多克隆抗血清,蛋白质印迹法检测抗血清的特异性。使用DNAMan和MEGA软件对OprD蛋白进行同源性和系统发生分析。结果表明,OprD重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果、OprD蛋白表达与纯化条带大小分别与预测相符。正交试验获得OprD菌株的最优培养条件为:葡萄糖浓度为0,转速230r/min,装液量为50mL;最优表达条件为:菌液OD600=0.8时加入终浓度为0.3mmol/L的异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),37℃诱导12h。SDS-PAGE电泳切胶纯化获得纯度较高的OprD蛋白。蛋白质印迹法证实OprD蛋白抗血清具有较好的特异性。OprD蛋白序列系统发生分析发现,同菌属细菌存在较高的同源性,并且亲缘关系较近的细菌中OprD蛋白可能具有相似的分子功能。